RIN-m5f大鼠(shu)β胰(yi)島素瘤細胞(bao)

公(gong)司產(chan)品僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得用(yong)於臨床診斷(duan)！

1、細胞(bao)傳代(dai)：

1）細胞(bao)生長(chang)至覆(fu)蓋培養瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的(de)培養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培養瓶中，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕(qing)輕吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用 1-2ml 培養基重懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳代(dai)，最後放入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養箱中培養；

2、細胞(bao)凍存：

1）細胞(bao)生長(chang)至覆(fu)蓋培養瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的(de)培養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培養瓶中，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入培養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕(qing)輕吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於凍存管中；

4）先將細胞(bao)凍存管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後轉入液(ye)氮(dan)中(zhong)進行(xing)長期(qi)保存。使(shi)用(yong)程序(xu)

降溫(wen)盒可直接放入-80℃。

二(er)、細胞(bao)培養操作(zuo)

1) 復蘇細胞(bao)：以(yi)下(xia)細胞(bao)培養凍存處(chu)理僅(jin)供(gong)參考(kao)，具體(ti)操作(zuo)步驟以(yi)隨貨產(chan)品說明(ming)書為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍存管在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速搖晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培養基混合(he)均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基後吹勻。然(ran)後將所有細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入含(han)適(shi)量培養基的(de)培養瓶中培養過(guo)夜（或將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約(yue)8 mL培養基，培養過(guo)夜）。第(di)二天(tian)換(huan)液(ye)並檢(jian)查細胞(bao)密度(du)。

2) 細胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果細胞(bao)密度(du)達(da) 80%-90%，即可進行(xing)傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去培養上清(qing)，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤(run)所有細胞(bao)，將培養瓶置於37℃培養箱中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況(kuang)而定(ding)），然(ran)後在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)消(xiao)化情(qing)況，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓(yuan)並脫(tuo)落，迅速拿回操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養瓶後加(jia)2-3ml培養基終止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕打勻後裝入無菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養液(ye)後吹勻。

c、將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到(dao)新的(de)含(han)8 mL培養基的(de)新皿(min)中或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置於培養箱中培養。 3) 細胞(bao)凍存：待細胞(bao)生長(chang)狀態良好時，可進行(xing)細胞(bao)凍存。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養液(ye)，裝(zhuang)入無菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據細胞(bao)數(shu)量加(jia)入無血清(qing)細胞(bao)凍存液(ye)，使(shi)細胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存管凍存1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍存管做(zuo)好標(biao)識。將凍存管放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記錄凍存管位置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司正在出售的(de)產(chan)品：

NCOA3： 類固醇受(shou)體(ti)激(ji)活蛋(dan)白(bai)3抗(kang)體(ti) STXBP1 Others Human 人 STXBP1 / UNC18A 桿狀病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照)

II型膠原酶(含(han)10mL酶解(jie)緩沖(chong)液(ye)) 1mL 大鼠(shu)尿素(su)酶相關蛋(dan)白(bai)C(UreC)ELISA試(shi)劑盒 CH50  大鼠(shu)血清(qing)總補(bu)體 96T

Netrin 1： 軸突導(dao)向因子(zi)1抗(kang)體 T/G HA-VSMC細胞(bao)，人主(zhu)動脈血管平(ping)滑肌(ji)細胞(bao) 人胚肝(gan)細胞(bao)正常(chang),QSG-7701細胞(bao) CL-0064CoC1(人卵巢(chao)癌(ai)細胞(bao))5×106cells/瓶×2

HA Others H3N2 甲(jia)型流感(gan) H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝(ning)素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 大鼠(shu)尿素(su)(Urea)ELISA試(shi)劑盒 B7-2/sCD86  大鼠(shu)可溶(rong)性(xing)CD86 96T

TrkB： 酪(lao)酸激酶B抗體 腎小(xiao)球內(nei)皮細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次(ci)方(1ml)

JAKMIP2： JAK和(he)微(wei)管相互作(zuo)用蛋(dan)白(bai)2抗(kang)體(ti) 小(xiao)鼠(shu)胚胎(tai)成纖維細胞(bao)(來(lai)自(zi)NIH3T3);PA12

ZA1細胞(bao)，轉S9基因倉鼠(shu)卵巢(chao)細胞(bao) PC-12未分化(大鼠(shu)腎上腺嗜鉻(ge)細胞(bao)瘤) 中(zhong)國(guo)倉(cang)鼠(shu)肺(fei)細胞(bao);R 1610 [R1610] 牛(allaoin)ELISA試(shi)劑盒 TTF-2(thyroid transcription factor 2;forkhead box E1) 甲(jia)狀腺(xian)轉(zhuan)錄因子(zi)-2(抗(kang)原) 0.5ml

JunB： 活化蛋(dan)白(bai)激(ji)酶B抗體 TNFRSF21 Others Human 人 DR6 / TNFRSF21 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照)

人表皮(pi)角(jiao)質細胞(bao)cDNAHEK cDNA 牛腦(nao)源性(xing)神(shen)經營(ying)養因子(zi)(BDNF)ELISA 試(shi)劑盒 Tyrosinase 酪酸酶(多肽抗(kang)原) 0.5mg

phospho-JAK2(Tyr1007+Tyr1008)： 0酸化蛋(dan)白(bai)酪(lao)酸激酶JAK-2抗體 人Burkkit淋巴瘤細胞(bao);Daudi

RIN-m5f大鼠(shu)β胰(yi)島素瘤細胞(bao)Senataxin： 肌(ji)側索(suo)硬(ying)化癥(zheng)相關蛋(dan)白(bai)4抗(kang)體(ti) CL-0189Raji(人Butt's淋巴瘤細胞(bao))5×106cells/瓶×2

MGC80-3(MGC-803)人胃(wei)癌(ai)細胞(bao) 大鼠(shu)TGF-β誘導(dao)早期基因1(TIEG1)ELISA試(shi)劑盒 LAM(Human Lipoarabinomannan)  人脂阿拉伯(bo)甘(gan)露(lu)聚(ju)糖(tang) 96T

SH3GL3： 胞(bao)漿蛋(dan)白(bai)SH3GL3抗(kang)體(ti) ACVR2B Others Cynomolgus 食(shi)蟹猴(hou) ACVR2B / ACIIB 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照)

HEL1 人胚肺(fei)成纖維樣細胞(bao)(男(nan)) 大鼠(shu)TGF-β誘導(dao)早期基因1(TIEG1)ELISA 試(shi)劑盒 MN(Human Mannose)  人甘(gan)露(lu)糖(tang) 96T

ABCG8： 三(san)0酸腺苷(gan)結合(he)轉(zhuan)運蛋(dan)白(bai)G超(chao)家族成員8抗(kang)體(ti) Jurk. Clone E6-1細胞(bao)，白血病細胞(bao) 急性(xing)T淋巴細胞(bao)白血病細胞(bao),TALL-104細胞(bao) 人胰(yi)腺(xian)導管癌(ai)細胞(bao);CFPAC-1

三(san)、培養註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細胞(bao)後首先觀察(cha)細胞(bao)瓶是(shi)否完好，培養液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有上述(shu)現象(xiang) 發生請(qing)及(ji)時和(he)我們(men)聯系(xi)。

2. 仔細閱(yue)讀(du)細胞(bao)說明(ming)書，了解(jie)細胞(bao)相關信息(xi)，如(ru)細胞(bao)形態、所用培養基、血清(qing)比例(li)、所需 細胞(bao)因子(zi)等(deng)，確(que)保細胞(bao)培養條件壹(yi)致，若(ruo)由(you)於培養條件不壹(yi)致而導致(zhi)細胞(bao)出現問題，責(ze)任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭細胞(bao)瓶表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)狀態。因(yin)運輸問題，部(bu)分細胞(bao)由(you)於溫(wen)度(du) 變化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎(sui)片，是(shi)正常(chang)現象(xiang)。觀察(cha)好細胞(bao)狀態後，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁將 T25 瓶置於 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞(bao)可以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)直接(jie)混勻(yun)收集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培養基重懸(xuan) 細胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到新(xin)的(de)培養瓶或培養皿(min)中，置(zhi)於培養箱中進行(xing)培養。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相同(tong)條件的(de)培養基用於細胞(bao)培養。

6. 建議客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞(bao)後前 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張細胞(bao)照片，記錄細胞(bao)狀態，便(bian)於和(he)我司(si)技術部(bu)溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於運輸的(de)原因，個別(bie)敏(min)感細胞(bao)會出現不(bu)穩定的(de)情況，請(qing)及(ji)時和(he)我們(men)聯系(xi)，告知細胞(bao) 的(de)具體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技術人員跟(gen)蹤(zong)回訪直至(zhi)問題解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅(jin)供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備註(zhu)：運輸用的(de)培養基 (灌液(ye)培養基) 不能再(zai)用(yong)來(lai)培養細胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按照說明(ming)書細胞(bao)培 養條件新配(pei)制(zhi)的(de)培養基來(lai)培養細胞(bao)。     收到(dao)細胞(bao)後第(di)壹(yi)次(ci)傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。