RT112人膀(pang)胱癌細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不(bu)得(de)用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用 PBS 清洗細胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮變圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用 1-2ml 培養基重懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比例(li)進行(xing)分瓶傳代，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養箱中(zhong)培養；

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用 PBS 清洗細胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮變圓(yuan)後加入(ru)培養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置於(yu)凍存管(guan)中(zhong)；

4）先將細胞(bao)凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進行(xing)長(chang)期保存。使(shi)用程序

降溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養操(cao)作

1) 復(fu)蘇細胞(bao)：以下細胞(bao)培養凍(dong)存處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)以隨貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為主(zhu)。將含有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培養基混合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後吹(chui)勻。然後將所有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量培養基的(de)培養瓶(ping)中(zhong)培養過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約8 mL培養基，培養過(guo)夜(ye)）。第二(er)天換液(ye)並(bing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細胞(bao)傳代：如(ru)果細胞(bao)密度(du)達(da) 80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳代培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上(shang)清，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離子的(de)PBS潤洗細胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細胞，將培(pei)養瓶(ping)置於(yu)37℃培養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況(kuang)而(er)定），然後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分變圓(yuan)並脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾下培養瓶(ping)後加2-3ml培養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻後裝入(ru)無菌離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹(chui)勻。

c、將細胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養基的(de)新皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培養箱中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長狀態良(liang)好時，可(ke)進行(xing)細(xi)胞凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收集細(xi)胞(bao)及細胞(bao)培養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，用PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞計(ji)數。

b、根據細(xi)胞(bao)數量加入(ru)無血清(qing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻，每支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標識。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存管(guan)位置(zhi)以便下次拿(na)取(qu)。

三(san)、培養註(zhu)意事(shi)項 

1. 收到細(xi)胞(bao)後首先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否完好，培(pei)養液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等現象，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現象 發(fa)生(sheng)請(qing)及時和我們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細閱讀(du)細(xi)胞說明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細胞(bao)相關(guan)信息，如細(xi)胞形態、所用培養基、血清比例、所需(xu) 細胞因(yin)子(zi)等，確保細(xi)胞培(pei)養條(tiao)件(jian)壹致，若(ruo)由(you)於(yu)培養條(tiao)件(jian)不(bu)壹致而導(dao)致細(xi)胞(bao)出現問(wen)題(ti)，責(ze)任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀態。因(yin)運(yun)輸問(wen)題(ti)，部(bu)分細胞由(you)於(yu)溫度(du) 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破碎(sui)形成碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞狀態後，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻收集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮(xian)的(de)培養基重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種到新(xin)的(de)培養瓶(ping)或培(pei)養皿(min)中(zhong)，置於(yu)培養箱中(zhong)進行(xing)培(pei)養。

5. 請(qing)客戶(hu)用相同(tong)條(tiao)件(jian)的(de)培養基用於(yu)細胞培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天各拍幾張(zhang)細胞照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細胞狀態，便(bian)於(yu)和我司技(ji)術部(bu)溝通 交流。由(you)於(yu)運(yun)輸的(de)原因(yin)，個別敏(min)感(gan)細胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及時和我們聯(lian)系，告(gao)知細(xi)胞 的(de)具體(ti)情(qing)況(kuang)，以便我(wo)們的(de)技(ji)術人(ren)員(yuan)跟蹤回訪(fang)直至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供(gong)科研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸用的(de)培養基 (灌液(ye)培(pei)養基) 不(bu)能再(zai)用來培(pei)養細(xi)胞，請(qing)換用按照(zhao)說明(ming)書(shu)細胞(bao)培 養條(tiao)件(jian)新(xin)配制的(de)培養基來培養細(xi)胞。     收到細(xi)胞(bao)後第壹次傳代建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：

CA1 Others Human 人(ren) CA1 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 大鼠透(tou)明(ming)質酸結(jie)合(he)蛋白(bai)(HABP)ELISA 試(shi)劑盒 NT-3  人(ren)神經營養因(yin)子(zi)3 96T

Muc2： 粘(zhan)蛋(dan)白-2/上皮膜(mo)抗(kang)原2抗(kang)體(ti) 人生(sheng)發(fa)基質細胞(bao)裂(lie)解(jie)物(wu)HHGMCL

MS1小(xiao)鼠(shu)胰島內(nei)皮細胞 MS1 mouse islet endothelial cells DMEM培養基+5%FBS 大鼠透(tou)明(ming)質酸(HA)ELISA試(shi)劑盒 NGF(Human Nerve growth factor)  人(ren)的(de)神經生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi) 96T

Mucin 4： 粘(zhan)蛋(dan)白4抗(kang)體(ti) HA Others H5N1 甲型流感(gan) H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/14/2008) 血凝(ning)素 (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

CL-0191RBE(人(ren)膽(dan)管(guan)癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2 大鼠透(tou)明(ming)質酸(HA)ELISA 試(shi)劑盒 OFQ/N(Mouse orphanin FQ/nociceptin)  小(xiao)鼠(shu)孤腓(fei)肽 96T

P388細(xi)胞(bao)，小(xiao)鼠(shu)白血病細胞(bao) 空(kong)腸彎(wan)曲(qu)桿(gan)菌(jun) 大額(e)牛皮膚(fu)成纖(xian)維(wei)樣(yang)細胞(bao);BOS-1 人苯(ben)諾(nuo)龍(long)/苯去(qu)(NP)ELISA 試(shi)劑盒 MLC/Myosin light chain 3 peptide 肌(ji)球(qiu)蛋(dan)白輕鏈(lian)3抗(kang)原 0.5mg

IFNGR1： 幹(gan)擾素(su)-gamma受(shou)體(ti)1抗(kang)體(ti) FAS Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) FAS / TNFRSF6 / CD95 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

人(ren)結(jie)直腸腺(xian)癌細(xi)胞(bao);HCT-15 [HCT15] 人苯(ben)(LPA)ELISA 試(shi)劑盒 MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor) 巨(ju)噬(shi)細胞(bao)移(yi)動(dong)抑制因(yin)子(zi)抗(kang)原 0.5mg

IL-1 Alpha Propeptide： 白(bai)介素1α前(qian)肽/IL-1α前(qian)肽抗(kang)體(ti) 人前(qian)列(lie)腺癌細(xi)胞(bao);DU 145 [DU145;DU-145]

P815(小(xiao)鼠(shu)肥大細胞瘤細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 人 CD1B & B2M Heterodimer 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 人本(ben)周(zhou)蛋白(bai)(BJP) ELISA 試(shi)劑盒 MIP-1 Beta (macrophage inflammatory protein 1 Beta) 巨(ju)噬(shi)細胞(bao)炎(yan)癥因(yin)子(zi)1β 抗(kang)原 0.5mg

RT112人(ren)膀(pang)胱癌細(xi)胞(bao)MHCC97-H 高(gao)轉(zhuan)移(yi)人(ren)肝(gan)癌細(xi)胞(bao) 大鼠雌(ci)激(ji)素(su)受(shou)體(ti)β(ERβ)ELISA試(shi)劑盒 cath-K(Human Cathepsin K)  人(ren)組織(zhi)蛋(dan)白酶(mei)K 96T

phospho-c-Raf(Ser339)： 0酸(suan)化(hua)原(yuan)癌基因(yin)c-Raf抗(kang)體(ti) SKOV-3/DDP細胞(bao)，卵巢(chao)癌耐(nai)藥株(zhu) 人卵巢(chao)癌細(xi)胞(bao),Ovary細胞(bao) 人真(zhen)皮微(wei)血管(guan)內(nei)皮細胞cDNAHDMEC cDNA

CD4 Others Ferret 雪(xue)貂 CD4 / Leu-3 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 大鼠雌(ci)激(ji)素(su)受(shou)體(ti)α(ERα)ELISA試(shi)劑盒 BMPs(Human bone morphogenetic proteins)  人(ren)骨形成蛋白 96T

Phospho-Rb (Ser612)： 0酸(suan)化(hua)視網膜(mo)母(mu)細胞(bao)瘤(liu)相關(guan)蛋(dan)白1抗(kang)體(ti) 中(zhong)國倉鼠卵巢(chao)細(xi)胞K1(亞系克隆);CHO-K1

CL-0402NCI-H520(人(ren)肺(fei)鱗癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2 大鼠雌(ci)激(ji)素(su)受(shou)體(ti)(ER)ELISA試(shi)劑盒 RBP-4(Human Retinol binding protein 4)  人(ren)結(jie)合(he)蛋白(bai)4 96T