RPMI8226人多發性骨髓(sui)瘤細胞

公(gong)司產品(pin)僅供科研(yan)研(yan)究使用、不得(de)用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生長至覆蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞回縮變(bian)圓後加(jia)入 5ml 培養(yang)

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打細胞使之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)細胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比(bi)例進行(xing)分瓶傳(chuan)代(dai)，最後放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞回縮變(bian)圓後加(jia)入培養(yang)液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹打細胞使之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入液氮(dan)中進行(xing)長期保存。使(shi)用程(cheng)序

降溫盒可(ke)直(zhi)接放(fang)入-80℃。

二、細胞培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細胞：以(yi)下細胞培養(yang)凍(dong)存處理僅供參考，具體操(cao)作步驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產品(pin)說(shuo)明書(shu)為(wei)主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存管(guan)在 37℃水(shui)浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混合均勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹勻。然(ran)後將所有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入含(han)適量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二天(tian)換(huan)液並(bing)檢(jian)查(zha)細胞密度。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細胞密度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所有(you)細胞，將培養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞情(qing)況而(er)定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細胞大部(bu)分變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿回(hui)操(cao)作臺，輕敲(qiao)幾下培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹勻。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例分到新(xin)的(de)含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞凍存：待(dai)細胞生長狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時，可(ke)進行(xing)細胞凍存。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收集(ji)細胞及細胞培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞數(shu)量(liang)加(jia)入無(wu)血清(qing)細胞凍存液(ye)，使(shi)細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支凍存管(guan)凍(dong)存1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍存管(guan)做(zuo)好(hao)標識。將(jiang)凍(dong)存管(guan)放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入液氮(dan)灌(guan)儲存。記(ji)錄(lu)凍存管(guan)位(wei)置以(yi)便下(xia)次拿取(qu)。

三(san)、培養(yang)註(zhu)意(yi)事(shi)項 

1. 收到細胞後首先(xian)觀(guan)察細胞瓶是否完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是否有(you)漏(lou)液、渾濁等現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述現象(xiang) 發(fa)生請(qing)及時和我們聯系。

2. 仔(zai)細閱讀(du)細胞說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細胞相關信(xin)息，如(ru)細胞形態、所用培養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例、所需(xu) 細胞因子等(deng)，確(que)保細胞培養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不壹(yi)致而(er)導致細胞出(chu)現問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦拭(shi)細胞瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞狀(zhuang)態(tai)。因運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分細胞由於溫(wen)度(du) 變(bian)化及劇(ju)烈碰亡(wang)破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察好細胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞直接混(hun)勻(yun)收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的(de)培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用相同條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用於細胞培養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶收到細胞後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細胞照片，記(ji)錄(lu)細胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和我司技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交流(liu)。由於運輸(shu)的(de)原因，個別敏(min)感(gan)細胞會(hui)出(chu)現不穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況，請(qing)及時和我們聯系，告知(zhi)細胞 的(de)具體情(qing)況，以(yi)便我們的(de)技(ji)術人員跟蹤回訪直(zhi)至問(wen)題解(jie)決。

7. 該細胞僅供科研(yan)使用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用來培(pei)養(yang)細胞，請(qing)換用按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細胞培 養(yang)條(tiao)件(jian)新配制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來培養(yang)細胞。     收到細胞後第壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：

MDCK[NBL-2]狗腎上皮(pi)細胞 MDCK[NBL-2] canine kidney epithelial cells MEM+10% FBS 大鼠突觸(chu)體素(su)/突觸(chu)素(su)(Syp/SYN)ELISA試(shi)劑盒 CYP450  大(da)鼠細胞色素(su)P450 96T

MCP-3： 單核細胞趨(qu)化蛋(dan)白(bai)3抗(kang)體 HA Others H5N1 甲(jia)型(xing)流(liu)感(gan) H5N1 (A/Indonesia/5/2005) 血凝(ning)素(su) (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

CL-0199RSC96(大鼠雪旺細胞)5×106cells/瓶×2 大(da)鼠突觸(chu)蛋(dan)白(bai)1(Syn1)ELISA試(shi)劑盒 Apo-E(Mouse Apolipoprotein E)  小鼠載(zai)脂(zhi)蛋(dan)白(bai)E 96T

MCP-3： 單核細胞趨(qu)化蛋(dan)白(bai)3抗(kang)體 tTA基因修飾(shi)的(de)小鼠畸(ji)胎(tai)瘤細胞(B類);P19-CAG-tTA-3C8

R 1610(倉鼠肺細胞) 5×106cells/瓶×2 HL-60(白(bai)血病(bing)原髓(sui)細胞) 大鼠透明(ming)質(zhi)酸酶1(HYAL1)ELISA試(shi)劑盒 HNT-4(uman Neurotrophin 4)  人神(shen)經營養(yang)因(yin)子4 96T

IL-17D/IL-27： 白(bai)介(jie)素(su)-17D抗(kang)體 RELT Others Human 人 RELT / TNFRSF19L 人細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

人腎上腺皮(pi)質腺癌細胞;NCI-H295R 人鞭(bian)毛蛋(dan)白(bai)(flagellin)ELISA 試(shi)劑盒 Mfn1 (Mitofusin1) 線(xian)粒體融合蛋(dan)白(bai)1 0.5mg

IBRDC1： 環指(zhi)蛋(dan)白(bai)217抗(kang)體 人肺癌(ai)細胞;A549 [A-549]

P3X63Ag8(小鼠骨髓(sui)瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 SARS 核蛋(dan)白(bai) (Nucleoprotein / NP) 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆蟲細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 人鼻咽(yan)癌(ai)病(bing)毒(du)(NPCV)ELISA試(shi)劑盒 MT(metallothionein) 金屬硫(liu)蛋(dan)白(bai)抗(kang)原 0.5mg

IL-2： 白(bai)介(jie)素(su)2抗(kang)體 人脾(pi)臟(zang)內(nei)皮(pi)細胞HSEC

RPMI8226人多發性骨髓(sui)瘤細胞CFD Others Human 人 CFD / Adipsin 人細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠雌壹(yi)醇(chun)(E1)ELISA試(shi)劑盒 LBP(Human lipolysaccharide binding protein)  人脂多糖結合蛋(dan)白(bai) 96T

phospho-c-Raf(Ser494)： 0酸化(hua)原癌基因c-Raf抗(kang)體 中國(guo)倉鼠卵(luan)巢(chao)細胞(亞系克(ke)隆(long));CHO-HCV-C

CL-0410P3X63Ag8.653(小鼠骨髓(sui)瘤細胞)5×106cells/瓶×2 大(da)鼠雌酮(tong)(E1)ELISA試(shi)劑盒 GSH-Px(Human Glutathione peroxidase)  人過(guo)氧(yang)化(hua)酶 96T

phospho-c-Raf(Ser43)： 0酸化(hua)原癌基因c-Raf抗(kang)體 ICAM1 Others Human 人 ICAM-1 / CD54 人細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

人小膠(jiao)質(zhi)細胞RNAHM miRNA5 μg 大鼠雌三(san)醇(chun)(E3)ELISA試(shi)劑盒 GSH(Human glutathione)  人 96T