TCMK-1小鼠(shu)腎(shen)小管上(shang)皮細胞

公司(si)產(chan)品僅供科(ke)研研(yan)究使(shi)用、不得用於臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消化(hua)，再輕輕吹打細(xi)胞使(shi)之脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比(bi)例進行(xing)分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞凍存：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消化(hua)，輕輕吹打細(xi)胞使(shi)之脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並(bing)放置(zhi)於凍存管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍存管放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中(zhong)進行長(chang)期(qi)保存。使(shi)用程序

降溫盒可(ke)直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復(fu)蘇細胞：以下細胞培(pei)養(yang)凍(dong)存處理僅供參(can)考，具體操作(zuo)步(bu)驟(zhou)以隨貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明書為主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存管在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速搖(yao)晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適(shi)量培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並(bing)檢查細胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上(shang)清，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤(run)洗細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消化(hua)液浸潤所(suo)有(you)細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置(zhi)於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況(kuang)而定），然(ran)後(hou)在(zai)顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞消化(hua)情況(kuang)，若細胞大部(bu)分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫落，迅速拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化(hua)。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上(shang)清液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹勻。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液按1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍存：待(dai)細(xi)胞生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好時(shi)，可進行細胞凍存。下面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收集細(xi)胞及細(xi)胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件下離(li)心(xin)4 min，棄去上(shang)清液，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進行細(xi)胞計數(shu)。

b、根據細胞數量加入(ru)無血清(qing)細(xi)胞凍存液，使(shi)細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每支凍(dong)存管凍存1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註(zhu)意凍(dong)存管做好標(biao)識。將凍(dong)存管放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管位(wei)置(zhi)以便下次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在出售的(de)產(chan)品(pin)：

SW480-EGFP-puro [SW480-pSB4](慢病毒(du)構(gou)建穩(wen)定株)人(ren)結(jie)腸腺癌(ai)細(xi)胞 SW480-EGFP-puro [SW480-pSB4] (leiviral consuct stable sain) of human colon adenocarcinoma cells 1640+10% FBS+2μg/ml puromycin 大鼠(shu)前列腺素F合(he)成酶(mei)(PGFS)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) C3  大(da)鼠補體蛋(dan)白(bai)3 96T

Phospho-NDRG1 (Thr346)： 0酸化(hua)分(fen)化(hua)相(xiang)關(guan)基(ji)因NDRG1抗體 IL1R1 Others Human 人(ren) IL1R1 / CD121a 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

CM-H108人(ren)表(biao)皮黑(hei)色(se)素細(xi)胞培(pei)養(yang)基(ji)100mL 大(da)鼠前列腺素F2α受(shou)體(PTGFR)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Ag-NORs(Human Argyrophilic nucleolar organizer region proteins)  人(ren)核(he)仁(ren)形(xing)成區嗜銀蛋(dan)白(bai) 96T

NEDD4L： 泛(fan)素連(lian)接(jie)酶(mei)NEDD4-2抗體 大鼠(shu)腎(shen)小(xiao)球(qiu)系膜(mo)細胞;HBZY-1

人(ren)少(shao)突(tu)膠質前體細胞(HOPC-os)(懸(xuan)浮生(sheng)長(chang)) 人(ren)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細(xi)胞-臍帶(dai) U251人(ren)膠質瘤(liu)細胞 大鼠(shu)前列腺素F2α(PGF2α)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) ACTH(mouse adrencocorticotropic hormone)  小(xiao)鼠促(cu)腎上(shang)腺皮質激(ji)素 96T

人(ren)結(jie)腸平滑肌細胞總RNAHCSMC NA 犬轉移(yi)生長(chang)因子β1(TGF-β1)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) HSP-27(Heat Shock Protein 27) 熱(re)休克(ke)蛋(dan)白(bai)-27(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

IL-20RB： 白(bai)介素20受(shou)體β鏈(lian)抗體 人(ren)結(jie)直腸腺癌(ai)細(xi)胞;Caco-2

U-937(人(ren)組織(zhi)細(xi)胞淋巴(ba)瘤(liu)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 小鼠(shu)淋(lin)巴(ba)瘤細胞;EL4 犬轉化(hua)生(sheng)長(chang)因子β1(TGF-β1)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) HSP-90Alpha(Heat Shock Protein 90Alpha ) 熱(re)休克(ke)蛋(dan)白(bai)90α(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

IAA： 吲哚乙(yi)酸抗體 腸靜脈(mai)內(nei)皮細胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)

EFNB2 Protein Canine 重(zhong)組狗(gou) Ephrin-B2 / EFNB2 蛋(dan)白(bai) (His 標(biao)簽) 犬主(zhu)要(yao)組織(zhi)相(xiang)容(rong)性(xing)復(fu)合(he)體(MHC/DLA)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) HSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta) 熱(re)休克(ke)蛋(dan)白(bai)-90β (抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

TCMK-1小(xiao)鼠腎小(xiao)管上(shang)皮細胞RPL15： 核(he)糖(tang)體蛋(dan)白(bai)L15抗(kang)體 FCGR3A Others Human 人(ren) CD16a / FCGR3A 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

髓(sui)核(he)細(xi)胞培(pei)養(yang)基(ji)NPCM-prf 大(da)鼠β內(nei)啡肽(tai)受(shou)體(β-EPR)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) LEPR(Human Leptin Receptor)  人(ren)瘦(shou)素受(shou)體 96T

RLBP1L1： 結(jie)合(he)蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體 22RV1(人(ren)前列腺癌(ai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2

EB病毒(du)轉(zhuan)化(hua)的(de)人(ren)B淋(lin)巴細(xi)胞;KMY0901 人(ren)真(zhen)皮淋巴(ba)上(shang)皮細胞培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 大(da)鼠β內(nei)啡肽(tai)受(shou)體(β-EPR)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) AT2R(Human Angiotensin II Receptor 2)  人(ren)血管緊張(zhang)素Ⅱ受(shou)體2 96T

RBBP6： 視(shi)網膜(mo)母細胞瘤結(jie)合(he)蛋(dan)白(bai)6抗(kang)體 CL-0311293E(人(ren)胚(pei)腎細(xi)胞(EBNA1基(ji)因修(xiu)飾(shi)))5×106cells/瓶(ping)×2

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項 

1. 收到(dao)細(xi)胞後(hou)首(shou)先觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是否完好，培(pei)養(yang)液是否有(you)漏(lou)液、渾濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有(you)上(shang)述現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和我們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書，了解細胞相(xiang)關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例、所(suo)需(xu) 細胞因子等，確(que)保(bao)細胞培(pei)養(yang)條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若由於培(pei)養(yang)條(tiao)件不壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞出現(xian)問題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀態(tai)。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細胞由於溫度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰亡(wang)破(po)碎形(xing)成碎片(pian)，是正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞狀態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可以消化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞直接(jie)混(hun)勻收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相(xiang)同條件的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於細胞培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶收到(dao)細(xi)胞後(hou)前 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀態(tai)，便於和我司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於運輸(shu)的(de)原(yuan)因，個別(bie)敏(min)感細(xi)胞會出現(xian)不穩(wen)定的(de)情況(kuang)，請及(ji)時(shi)和我們(men)聯(lian)系，告知細(xi)胞 的(de)具體情況(kuang)，以便我們(men)的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細胞僅供科(ke)研使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸(shu)用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不能(neng)再用來培(pei)養(yang)細(xi)胞，請換(huan)用(yong)按照(zhao)說(shuo)明書細胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件新配制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收到(dao)細(xi)胞後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。