組織(zhi)化(hua)學染(ran)色

1.室溫(wen)脫蠟、水化(hua):二(er)甲苯壹(yi)號10分(fen)鐘(zhong)、二(er)甲(jia)苯(ben)二號(hao)8分鐘(zhong)、二(er)甲(jia)苯(ben)三號(hao)8分鐘(zhong)、無水(shui)乙(yi)醇(chun)5分(fen)鐘(zhong)、90%乙(yi)醇(chun)3分(fen)鐘(zhong)、80%乙(yi)醇(chun)3分(fen)鐘(zhong)、70%乙(yi)醇(chun)3分(fen)鐘(zhong)。蒸(zheng)餾水3分(fen)鐘(zhong)*3次(ci),PBS3分(fen)鐘(zhong)*3次(ci)。

2.熱抗原(yuan)修(xiu)復(fu),換(huan)新(xin)的(de)切片(pian)架(jia),放入(ru)水化後(hou)的切片(pian)。配(pei)置抗原(yuan)修(xiu)復(fu)液(壹(yi)包檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉粉(fen)末配(pei)置2升(sheng)PBS溶(rong)液),用(yong)鐵(tie)飯盒或者(zhe)鍋加(jia)熱煮沸(fei)。溫(wen)度(du)控制(zhi)在96-98度。然(ran)後(hou)將(jiang)切片(pian)放(fang)入(ru)熱鍋中15分(fen)鐘(zhong),最(zui)後(hou)自(zi)然(ran)冷卻(que)室溫(wen)。PBS五(wu)分(fen)鐘(zhong)*2次(ci),蒸(zheng)餾水3分(fen)鐘(zhong)*2次(ci)。

3.免疫組化(hua)筆(bi)畫(hua)圈(quan):取(qu)出組織(zhi),甩(shuai)幹水分(fen),可用吸水紙吸幹水珠(zhu)。用組化(hua)筆(bi)畫(hua)圈(quan)圍住組織(zhi),圓圈(quan)完整(zheng)。

4.滅(mie)活(huo)內源(yuan)酶(mei)活性:將切片(pian)放(fang)入(ru)濕(shi)盒中,盒中加(jia)入(ru)少量蒸(zheng)餾水,滴加(jia)3%過氧化氫(二(er)抗(kang)試(shi)劑(ji)盒中A壹(yi)滴或者(zhe)50微升(sheng),劑(ji)量詳(xiang)見二抗(kang)說(shuo)明(ming)書),室溫(wen)孵(fu)育(yu)10分(fen)鐘(zhong)。PBS三(san)分(fen)鐘(zhong)*3次(ci),蒸(zheng)餾水水(shui)洗(xi)三分鐘(zhong)。

5.封(feng)閉(bi)非特(te)異(yi)性位(wei)點:甩(shuai)幹水分(fen),吸幹水珠(zhu),加(jia)山羊血(xue)清(qing)封(feng)閉(bi)液(ye)(二抗(kang)試(shi)劑(ji)盒B壹(yi)滴或者(zhe)50微升(sheng)),放(fang)入(ru)濕(shi)盒內,室溫(wen)10分(fen)鐘(zhong)。

6.甩掉封(feng)閉(bi)液(ye),滴加(jia)壹(yi)抗蓋(gai)住組織(zhi),然(ran)後(hou)放(fang)入(ru)濕(shi)盒內4攝(she)氏度過(guo)夜(ye)。(壹(yi)抗濃(nong)度見抗體(ti)說(shuo)明(ming)書,提前(qian)稀釋後(hou)分裝,並(bing)在負二十度(du)冰(bing)箱(xiang)保存(cun)。每張片(pian)子(zi)壹(yi)抗劑(ji)量不(bu)定,看組織(zhi)面(mian)積(ji)大小(xiao),xxxxx癌(ai)組織(zhi)壹(yi)張20微(wei)升(sheng)左右。

7.第二(er)天,4度冰(bing)箱(xiang)取(qu)出濕(shi)盒,室溫(wen)復(fu)溫(wen)30分(fen)鐘(zhong),PBS三(san)分(fen)鐘(zhong)*三(san)次(ci),蒸(zheng)餾水洗(xi)滌(di)三分鐘(zhong)。

8.甩幹水分(fen),吸幹水珠(zhu),滴加(jia)二抗(kang)(二(er)抗(kang)試(shi)劑(ji)盒C)壹(yi)滴或者(zhe)50微升(sheng),室溫(wen)孵(fu)育(yu)10分(fen)鐘(zhong)。PBS三(san)分(fen)鐘(zhong)*三(san)次(ci),蒸(zheng)餾水水(shui)洗(xi)三分鐘(zhong)。

9.每張片(pian)子(zi)滴加(jia)壹(yi)滴或者(zhe)50微升(sheng)鏈(lian)黴(mei)菌抗(kang)生(sheng)物su-過氧化物酶溶(rong)液(二(er)抗(kang)試(shi)劑(ji)盒D),室溫(wen)孵(fu)育(yu)10分(fen)鐘(zhong),PBS三(san)分(fen)鐘(zhong)*三(san)次(ci),蒸(zheng)餾水水(shui)洗(xi)三分鐘(zhong)。

10.每張片(pian)子(zi)滴加(jia)兩滴或者(zhe)100微升(sheng)DAB溶(rong)液,顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)3-10分鐘(zhong)。染(ran)色合適即(ji)可終止染(ran)色,自來(lai)水沖洗(xi)。

11.蘇木(mu)素(su)復(fu)染(ran),1-2分鐘(zhong),細(xi)胞(bao)核變藍(lan)色(se)即(ji)可終止,自(zi)來(lai)水或者(zhe)PBS沖洗(xi)反(fan)藍(lan)(可用0.5%氨(an)水反藍(lan))。

12.1%鹽酸(suan)酒精分(fen)化3秒(miao),自來(lai)水沖洗(xi)三(san)分鐘(zhong)。

13.脫水:70%酒精1分(fen)鐘(zhong)、80%酒精1分(fen)鐘(zhong)、95%酒精2分(fen)鐘(zhong)、無水(shui)乙(yi)醇(chun)4分(fen)鐘(zhong)、二(er)甲(jia)苯(ben)壹(yi)號3分(fen)鐘(zhong)、二(er)甲(jia)苯(ben)二號(hao)3分鐘(zhong)。

14.涼幹片子(zi)後滴加(jia)適量中性樹膠(jiao)封(feng)片,蓋(gai)上(shang)蓋玻(bo)片(pian),小(xiao)心(xin)氣泡(pao)。晾(liang)幹半天即(ji)可。

15.顯微(wei)鏡(jing)下拍照(zhao)。