細(xi)胞(bao)汙染壹般可(ke)分為微生(sheng)物汙染和(he)真(zhen)核生物汙染。其(qi)中(zhong)微生(sheng)物汙染包括真菌(jun)和(he)酵(jiao)母、細(xi)菌(jun)、支(zhi)原(yuan)體(ti)等。而真(zhen)核(he)生物壹般是細(xi)胞(bao)系(xi)間(jian)的(de)交叉(cha)汙染。 細(xi)胞(bao)常見(jian)的(de)汙染情況總(zong)結(jie)如下(xia)：

1、細(xi)菌(jun)汙染：

細(xi)菌(jun)是壹種原(yuan)核(he)細(xi)胞(bao)微生(sheng)物，其(qi)大(da)小以(yi)微米(μm)計(ji)。常見(jian)的(de)汙染細(xi)菌(jun)有革蘭氏(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)和(he)大(da)腸桿菌(jun)、假(jia)單胞(bao)菌(jun)等，革蘭氏(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)中(zhong)白(bai)色葡萄(tao)球菌(jun)等比(bi)較常見(jian)。

壹旦(dan)發(fa)生(sheng)細(xi)菌(jun)汙染較(jiao)易發現(xian)，多數(shu)情況下(xia)培(pei)養(yang)液(ye)短期內(nei)顏(yan)色變黃(huang)，表(biao)明有大(da)量(liang)酸性(xing)物質產(chan)生(sheng)，出(chu)現(xian)明顯混(hun)濁現(xian)象；有時(shi)靜(jing)置的(de)培養(yang)液液(ye)體(ti)初(chu)看不(bu)混濁，但(dan)稍(shao)加(jia)振(zhen)蕩(dang)，就(jiu)有很(hen)多混(hun)濁物漂起(qi)。倒置顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，可(ke)見培養液中有大(da)量(liang)圓球狀(zhuang)顆粒(li)漂浮。必(bi)要(yao)時可(ke)取少量培養液塗(tu)片(pian)染(ran)色檢(jian)查(zha)以(yi)證實細(xi)菌(jun)種(zhong)類(lei)；有的(de)培養(yang)液改(gai)變不(bu)明顯而(er)又疑(yi)有汙染，可(ke)取出(chu)少量培養(yang)液(ye)用普通(tong)肉湯(tang)接(jie)種(zhong)或(huo)用(yong)未(wei)加雙抗(kang)藥物的(de)培養(yang)液接(jie)種(zhong)，也(ye)可(ke)取10ml細(xi)胞(bao)懸液(ye)以(yi)100rpm離心5min，沈(chen)澱中(zhong)加入無(wu)抗(kang)生(sheng)素的(de)培養(yang)液2ml，置於37℃培(pei)養，24h可(ke)得結(jie)果(guo)。汙染後(hou)細(xi)胞(bao)發生(sheng)病(bing)理(li)改(gai)變，胞(bao)內(nei)顆(ke)粒(li)增(zeng)多、增(zeng)粗(cu)，最(zui)後(hou)變圓脫(tuo)落(luo)死(si)亡，造成(cheng)試(shi)驗(yan)失(shi)敗和細(xi)胞(bao)株(系(xi))丟(diu)失(shi)。

看(kan)到(dao)這(zhe)種(zhong)，別(bie)猶豫(yu)了妳的(de)細(xi)胞(bao)被汙染了(le)，那(na)麽(me)怎(zen)麽(me)辦(ban)呢，基(ji)本(ben)原則立(li)馬(ma)扔掉(diao)，別擴(kuo)大(da)汙染，如果(guo)妳的(de)細(xi)胞(bao)真的(de)十分寶貴(gui)，先(xian)用(yong)帶有雙抗(kang)的(de)PBS反(fan)復沖(chong)洗幾遍(bian)，然後(hou)再(zai)培養(yang)液(ye)中(zhong)加入(ru)硫(liu)酸慶大(da)黴su、新黴su（50ug/ml）等，培養(yang)3天(tian)後(hou)換成(cheng)帶有雙抗(kang)的(de)培養(yang)液培(pei)養(yang)。

2、真(zhen)菌(jun)汙染：

是細(xi)胞(bao)培養(yang)過(guo)程(cheng)中最(zui)常見(jian)的(de)壹種，尤其(qi)在(zai)梅雨季節進(jin)行細(xi)胞(bao)培養(yang)更易汙染。汙染培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)的(de)多為(wei)煙曲(qu)黴、黑(hei)曲黴(mei)、毛黴(mei)菌(jun)、孢(bao)子黴(mei)、白(bai)念珠菌(jun)、酵(jiao)母菌(jun)等。黴菌(jun)汙染後(hou)多數(shu)在(zai)培養(yang)液中(zhong)形(xing)成(cheng)白(bai)色(se)或(huo)淺(qian)黃(huang)色漂(piao)浮物。壹般肉(rou)眼可(ke)見，較易被發(fa)現(xian)，短期內(nei)培(pei)養(yang)液(ye)多不(bu)混濁，倒置顯微鏡(jing)下(xia)可(ke)見於細(xi)胞(bao)之間(jian)縱橫(heng)交(jiao)錯(cuo)穿行的(de)絲(si)狀(zhuang)、管狀(zhuang)、及樹(shu)枝狀(zhuang)菌(jun)絲(si)，並懸浮飄(piao)蕩(dang)在(zai)培養(yang)液中(zhong)。很(hen)多菌(jun)絲(si)在(zai)高倍(bei)鏡(jing)可(ke)見到(dao)有鏈(lian)狀(zhuang)排列(lie)的(de)菌(jun)珠(zhu)；念珠菌(jun)或(huo)酵(jiao)母菌(jun)形(xing)態呈(cheng)卵形(xing)，散在(zai)細(xi)胞(bao)周邊和細(xi)胞(bao)之間(jian)生長(chang)。鏡下(xia)看(kan)時(shi)，要(yao)將培養(yang)瓶(ping)用(yong)酒(jiu)精(jing)棉(mian)球擦幹(gan)凈(jing)，以(yi)防(fang)止(zhi)與(yu)瓶外尤其(qi)瓶(ping)底(di)外面(mian)生(sheng)長(chang)的(de)菌(jun)絲(si)相(xiang)混淆(xiao)。真(zhen)菌(jun)汙染後(hou)，細(xi)胞(bao)生長(chang)變慢(man)，但(dan)最(zui)後(hou)由於(yu)營(ying)養耗(hao)盡及(ji)毒(du)性作用(yong)而(er)使細(xi)胞(bao)脫(tuo)落(luo)死(si)亡。

真菌(jun)汙染真(zhen)的(de)不(bu)建(jian)議處(chu)理(li)，因為孢(bao)子容(rong)易飄散，可(ke)能這瓶沒9過(guo)來(lai)，又擴(kuo)大(da)了汙染，建(jian)議預防(fang)為主(zhu)，在(zai)培養(yang)箱的(de)水中(zhong)加入(ru)硫(liu)酸銅，就(jiu)是藍色的(de)那(na)種(zhong)東西。哎，如果(guo)妳非救不(bu)可(ke)，可(ke)以(yi)采用兩(liang)性(xing)黴su B（0.25-2.5），三(san)天(tian)後(hou)換液(ye)加(jia)入含PS的(de)培養(yang)液。

3、支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染：

支(zhi)原(yuan)體(ti)是壹種大(da)小介(jie)於(yu)細(xi)菌(jun)和(he)病(bing)毒(du)之間(最(zui)小直徑(jing)0．2um)並(bing)獨(du)立(li)生(sheng)活的(de)微生(sheng)物。約有1%可(ke)通(tong)過(guo)濾菌(jun)器(qi)。支(zhi)原體(ti)無(wu)細(xi)胞(bao)壁形(xing)態呈(cheng)高度多形(xing)性。可(ke)為圓形(xing)、絲(si)狀(zhuang)或(huo)梨(li)形(xing)。

支原(yuan)體(ti)形(xing)態多變，在(zai)光(guang)境下(xia)不(bu)易看清(qing)內(nei)部(bu)結(jie)構(gou)。電鏡下(xia)觀(guan)察(cha)支(zhi)原體(ti)膜(mo)為三(san)層(ceng)結(jie)構(gou)。其(qi)中(zhong)央有電幹(gan)密(mi)度大的(de)密(mi)集(ji)顆(ke)粒(li)群或(huo)絲(si)狀(zhuang)的(de)中心(xin)束。支(zhi)原體(ti)多吸(xi)附或(huo)散在(zai)於細(xi)胞(bao)表(biao)面和(he)細(xi)胞(bao)之間(jian)。橫斷(duan)面與(yu)細(xi)胞(bao)微絨毛(mao)相(xiang)似，但(dan)微絨毛(mao)電子密(mi)度比(bi)支原(yuan)體(ti)小，且(qie)中(zhong)央無(wu)顆(ke)粒群或(huo)中(zhong)央束。

支(zhi)原體(ti)汙染細(xi)胞(bao)後(hou)，培養液(ye)可(ke)不(bu)發生(sheng)混濁。多數(shu)情況下(xia)細(xi)胞(bao)病(bing)理(li)變化輕微或(huo)不(bu)顯著(zhu)，細(xi)微變化也(ye)可(ke)由於(yu)傳(chuan)代(dai)、換液(ye)而(er)緩解，因此易被忽(hu)視(shi)。但(dan)個別嚴(yan)重(zhong)者，可(ke)致(zhi)細(xi)胞(bao)增(zeng)殖(zhi)緩慢(man)，甚至(zhi)從(cong)培養(yang)器(qi)皿脫(tuo)落(luo)。

如果(guo)懷疑(yi)細(xi)胞(bao)被支(zhi)原體(ti)汙染可(ke)使用支原體(ti)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)進(jin)行檢(jian)測(ce)，如果(guo)確定(ding)是支原體(ti)汙染可(ke)以(yi)選(xuan)擇支(zhi)原體(ti)去除(chu)試劑進(jin)行處(chu)理(li)。

4、黴菌(jun)汙染

　　同真(zhen)菌(jun)感(gan)染壹致(zhi)，因為培(pei)養液(ye)是清(qing)亮(liang)的(de)，所以(yi)黴菌(jun)汙染早(zao)期(qi)難(nan)以(yi)發現(xian)，等發現(xian)時往往已經(jing)為(wei)時過(guo)晚(wan)了。培(pei)養液(ye)中(zhong)慢(man)慢(man)地出(chu)現(xian)絮狀(zhuang)雜質(zhi)，鏡下(xia)可(ke)見呈(cheng)細(xi)絲(si)狀(zhuang)的(de)團狀(zhuang)漂浮物，如同風(feng)中柳絮，壹般不(bu)仔細(xi)看(kan)發覺(jiao)不(bu)出(chu)來(lai)。細(xi)胞(bao)仍可(ke)生長(chang)，但(dan)時(shi)間(jian)壹長(chang)，細(xi)胞(bao)的(de)狀(zhuang)態就變差，不(bu)再(zai)增(zeng)長(chang)。

　　處理(li)方法(fa)：建(jian)議果(guo)斷舍(she)棄該(gai)汙染細(xi)胞(bao)，將環(huan)境*消毒(du)，因為黴(mei)菌(jun)的(de)頑固(gu)可(ke)能會導致(zhi)下(xia)幾(ji)批(pi)細(xi)胞(bao)都(dou)會汙染，所(suo)以(yi)，采用酒(jiu)精*底地(di)擦洗(xi)壹遍CO2孵(fu)箱(xiang)。然(ran)後(hou)再(zai)用新潔爾滅(mie)擦洗(xi)壹遍，把(ba)水(shui)盤裏加(jia)上飽(bao)和(he)量的(de)硫酸銅。千萬(wan)不(bu)可(ke)大意!

5、黑(hei)膠(jiao)蟲汙染

　　開(kai)始(shi)汙染時(shi)對(dui)細(xi)胞(bao)無(wu)影(ying)響，當數(shu)量達(da)到(dao)壹定程(cheng)度時就(jiu)會(hui)對細(xi)胞(bao)產(chan)生(sheng)影(ying)響。400倍顯(xian)微鏡(jing)下(xia)可(ke)見點(dian)狀(zhuang)或(huo)片(pian)狀(zhuang)遊動小體(ti)，培(pei)養(yang)液也(ye)是不(bu)渾(hun)的(de)，壹般不(bu)會太影響，細(xi)胞(bao)還是可(ke)以(yi)用的(de)。常常是細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態良好，且(qie)觀(guan)測(ce)到(dao)的(de)運動(dong)物無(wu)明顯增(zeng)多，且(qie)培(pei)養(yang)液(ye)顏(yan)色、透(tou)明度無(wu)明顯變化，對細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態不(bu)會有明顯影(ying)響，在(zai)細(xi)胞(bao)增(zeng)殖(zhi)旺盛(sheng)之(zhi)後(hou)會自(zi)然消失(shi)，除(chu)更換血(xue)清(qing)外無(wu)須(xu)特(te)殊(shu)處理(li)。

　　處理(li)方法(fa)：可(ke)以(yi)增(zeng)加(jia)細(xi)胞(bao)的(de)種板(ban)密(mi)度，以(yi)提高細(xi)胞(bao)的(de)生存率(lv)，盡(jin)早(zao)處(chu)理(li)細(xi)胞(bao)，越快(kuai)越好。如果(guo)實在(zai)來(lai)不(bu)及了(le)，推薦(jian)使用——黑(hei)膠(jiao)蟲清(qing)除(chu)培養基(ji)