TJ905人(ren)腦(nao)膠(jiao)質(zhi)瘤

公(gong)司產(chan)品僅(jin)供科(ke)研研究(jiu)使(shi)用、不(bu)得用於臨(lin)床診斷(duan)！

1、細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮變圓後加入 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止消化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱細胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸，然後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮變圓後加入培(pei)養(yang)液(ye)終

止消化(hua)，輕輕吹打(da)細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量的凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並(bing)放(fang)置於凍(dong)存管中；

4）先(xian)將細胞(bao)凍(dong)存管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入液(ye)氮(dan)中進(jin)行長(chang)期(qi)保存。使(shi)用程序

降溫(wen)盒(he)可(ke)直接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下(xia)細胞(bao)培(pei)養(yang)凍存處(chu)理(li)僅(jin)供參(can)考，具體操(cao)作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品說(shuo)明(ming)書(shu)為主。將含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存管在 37℃水浴(yu)中迅(xun)速搖晃解(jie)凍，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心3 min，棄(qi)去(qu)上清液(ye)，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹勻(yun)。然後將所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入含(han)適量(liang)培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿(min)中，加入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二天換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上清，用不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離子的PBS潤洗細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液(ye)浸(jin)潤所有(you)細胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於37℃培(pei)養(yang)箱中消化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情(qing)況而(er)定），然後在顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)消化(hua)情況，若細胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養(yang)基終止消化(hua)。輕輕打勻(yun)後裝入無(wu)菌(jun)離心管(guan)中，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上清液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹勻(yun)。

c、將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分(fen)到新的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置於培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時，可(ke)進(jin)行細胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝入無(wu)菌(jun)離心管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心4 min，棄(qi)去(qu)上清液(ye)，用PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細胞(bao)數(shu)量加入無(wu)血清細胞(bao)凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍存管凍存1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍存管做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存管放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入液(ye)氮(dan)灌儲存。記錄凍存管位置以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取。

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細胞(bao)後首(shou)先觀(guan)察(cha)細胞(bao)瓶(ping)是否完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是否有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若有(you)上述現象 發生請(qing)及時和我們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細胞(bao)相關信息，如(ru)細胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用培(pei)養(yang)基、血清比(bi)例(li)、所(suo)需 細胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確保細胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若由(you)於培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致而(er)導(dao)致細胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，責任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自行承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細胞(bao)由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及劇烈(lie)碰(peng)亡破碎形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是正常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精(jing)消毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)可(ke)以(yi)消化(hua)，懸浮細胞(bao)直接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮的培(pei)養(yang)基重懸 細胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中，置於培(pei)養(yang)箱中進(jin)行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相同(tong)條(tiao)件(jian)的培(pei)養(yang)基用於細胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議客(ke)戶(hu)收(shou)到細胞(bao)後前 3 天(tian)各拍(pai)幾張(zhang)細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和我司技(ji)術部(bu)溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於運輸(shu)的(de)原因(yin)，個(ge)別(bie)敏感(gan)細胞(bao)會出(chu)現不(bu)穩定的情況，請(qing)及時和我們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細胞(bao) 的(de)具體情況(kuang)，以(yi)便(bian)我們(men)的技(ji)術人員(yuan)跟蹤回(hui)訪(fang)直至問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細胞(bao)僅(jin)供科(ke)研使(shi)用。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用的(de)培(pei)養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)養(yang)基) 不(bu)能(neng)再用來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換(huan)用按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新配(pei)制(zhi)的培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到細胞(bao)後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。

公(gong)司正在(zai)出(chu)售的產(chan)品：

NEDD5： 神經(jing)前體(ti)細胞(bao)表(biao)達(da)發育下調(tiao)蛋(dan)白(bai)5抗體(ti) 大鼠(shu)骨(gu)髓(sui)瘤細胞(bao);IR983F

SNU-5(人(ren)胃(wei)癌細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 293(轉(zhuan)染腺病毒E1A基因(yin)的(de)人腎上皮細胞(bao)) 大(da)鼠(shu)瘦(shou)素(su)(LEP)ELISA 試劑(ji)盒(he) CD4(Rat Troponin T)  小鼠(shu)CD4分子(zi) 96T

Netrin 4： 軸(zhou)突生(sheng)長(chang)誘(you)向因(yin)子(zi)4抗體(ti) 人胚(pei)腎二(er)倍(bei)體(ti)細胞(bao);HEK-2

IL24 Protein Human 重(zhong)組(zu)人 IL-24 / MDA-7 蛋(dan)白 (His 標簽) 大(da)鼠(shu)嗜(shi)中性(xing)粒(li)細胞(bao)胞(bao)漿(jiang)因(yin)子(zi)2(NCF2)ELISA試劑(ji)盒(he) FASL(Human Factor-related Apoptosis ligand)  人雕(diao)亡相關因(yin)子(zi)配(pei)體(ti) 96T

Nicalin： γ-分(fen)泌(mi)酶組(zu)件(jian)蛋白(bai)NCLN抗體(ti) GST Others Schistosoma japonicum 日本血吸(xi)蟲 Glutathione S-ansferase / GST 桿(gan)狀(zhuang)病毒-昆(kun)蟲細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對照)

Sf-9(昆(kun)蟲細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 人(ren) Ierferon alpha-B / IFNA8 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對照) 人(ren)α羥基脫(tuo)氫酶(αHBDH)ELISA 試劑盒(he) S100B S100B蛋白(bai)抗原 0.5mg

IQCJ： IQCJ蛋(dan)白(bai)抗體(ti) 小氣道上皮細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次方(fang)(1ml)

CCL8 Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小鼠(shu) CCL8 / MCP-2 蛋白(bai) (His & NusA 標簽) 人(ren)α葡萄糖苷(gan)酶(mei)(α-glucosidase)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) S100B(S100 calcium binding protein B)(human, mouse, rat, bovine, Rabbit, chicken) S100B蛋白(bai)多肽(tai) 0.5mg

IGSF1： 抑(yi)制(zhi)素(su)結合(he)蛋白(bai)抗體(ti) NCF2 Others Human 人 NCF-2 / NCF2 / P67phox 桿(gan)狀病毒-昆(kun)蟲細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對照)

人(ren)腎皮層上皮細胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 人α平(ping)滑(hua)肌(ji)肌(ji)動(dong)蛋(dan)白(bai)(α-SMA)ELISA 試(shi)劑盒(he) S-100A1 (S100 calcium-binding protein A1) 鈣結合(he)蛋白(bai)S100A1抗原 0.5mg

TJ905人(ren)腦(nao)膠(jiao)質(zhi)瘤PLAUR Others Human 人(ren) uPAR / CD87 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對照) 大(da)鼠(shu)白細胞(bao)介素(su)6(IL-6)ELISA試劑(ji)盒(he) PLC Gamma1(Human Phospholipase C Gamma1)  人0酯(zhi)酶Cγ鏈 96T

RELM alpha： 抵(di)抗素(su)樣(yang)分(fen)子(zi)α抗體(ti) 小鼠(shu)肝癌(ai)細胞(bao);Hepa 1-6 [Hepa1-6]

CL-0230Tca-8113(人(ren)舌(she)鱗癌細胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2 大(da)鼠(shu)白細胞(bao)介素(su)4(IL-4)ELISA試劑(ji)盒(he) NA(Human neuraminidase)  人神經(jing)酸(suan)酶(mei) 96T

Reprimo： 細胞(bao)質(zhi)內(nei)的(de)糖基化(hua)蛋白抗體(ti) ESAM Others Human 人 ESAM 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對照)

人(ren)腸(chang)微血管(guan)內(nei)皮細胞(bao)cDNAHIMEC cDNA 大(da)鼠(shu)白細胞(bao)介素(su)25(IL-25)ELISA試劑(ji)盒(he) PIPLC(Human phosphoinositide-specific phospholipase C)  人0酯(zhi)酰肌(ji)醇特異性(xing)0酯(zhi)酶C 96T