Walker/LLC-WRC 256大(da)鼠腹水癌細胞

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得用(yong)於(yu)臨床診斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的(de)培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待細胞回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入 5ml 培(pei)養

液(ye)終(zhong)止消化，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養；

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的(de)培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待細胞回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入培(pei)養液(ye)終(zhong)

止消化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細胞凍(dong)存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)中(zhong)進行長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程序

降溫(wen)盒(he)可直接放入-80℃。

二、細胞培(pei)養操(cao)作

1) 復(fu)蘇細胞：以(yi)下細胞培(pei)養凍(dong)存處(chu)理僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步驟以隨貨產(chan)品(pin)說明(ming)書為主。將含有(you)1 mL細胞懸液(ye)的(de)凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將所有(you)細胞懸液(ye)加(jia)入含適量(liang)培(pei)養基(ji)的(de)培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過(guo)夜（或將細胞懸液(ye)加(jia)入10 cm皿中，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜）。第(di)二天換液(ye)並檢查細胞密(mi)度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可進行傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上(shang)清(qing)，用(yong)不含(han)鈣、鎂離子(zi)的(de)PBS潤洗細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中(zhong)，使消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所有(you)細胞，將培(pei)養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消化1-2 min（視細胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細胞消(xiao)化情況(kuang)，若細胞大(da)部分變圓並脫落，迅(xun)速拿回操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止消化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝入無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹(chui)勻。

c、將細胞懸液(ye)按1:2比(bi)例(li)分(fen)到新的(de)含8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細胞凍(dong)存：待(dai)細胞生(sheng)長(chang)狀態(tai)良好(hao)時(shi)，可進行細胞凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收集細胞及(ji)細胞培(pei)養液(ye)，裝入無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細胞計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞數(shu)量(liang)加(jia)入無(wu)血(xue)清(qing)細胞凍(dong)存液(ye)，使細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞懸液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管(guan)做好標(biao)識(shi)。將凍(dong)存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)灌儲存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿取。

公司(si)正在出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：

Hepatitis C Virus RNA-directed RNA polymerase： 丙(bing)型肝(gan)炎病(bing)毒(du)NS4B(65kDa)抗(kang)體(ti) 雜交(jiao)瘤(liu)(B類);Z153A2A5B3A12

IL3 Protein Rat 重(zhong)組(zu)大(da)鼠 IL3 / ierleukin 3 蛋(dan)白 (His 標簽(qian)) 大(da)鼠尿(niao)皮質(zhi)素1(UCN1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) HIF-1 Alpha  大(da)鼠低(di)氧誘導(dao)因子(zi)1α 96T

NGFRAP1： 神(shen)經生長(chang)因子(zi)受(shou)體(ti)相關(guan)蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體(ti) ADRBK1 Others Human 人(ren) GRK2 / ADRBK1 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆蟲細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

II型(xing)膠原酶(含100mL酶解緩沖(chong)液(ye)) 10mL 大(da)鼠型(xing)纖溶酶原激(ji)活因子(zi)受(shou)體(ti)(uPAR)ELISA試劑(ji)盒(he) IL-8/CXCL8(Mouse interleukin 8)  小鼠白(bai)介素8 96T

NRH2： 死(si)亡結(jie)構域(yu)蛋(dan)白(bai)NRH2抗(kang)體(ti) HUVEC細胞，人(ren)臍(qi)靜脈血(xue)管(guan)內(nei)皮細胞 人(ren)肝(gan)細胞正常,HL-7702細胞 CL-0072Daudi(人(ren)淋(lin)巴(ba)瘤(liu)細胞)5×106cells/瓶(ping)×2

Jagged 2： Notch配(pei)體(ti)Jagged 2蛋白(bai)抗(kang)體(ti) RN-c, 大(da)鼠皮質(zhi)神經元(yuan) Y567[VTT C-79094]細胞 B95-8(EBV 轉(zhuan)化的(de)絨(rong)猴白細胞)

TIGIT Others Mouse 小鼠 TIGIT / VSTM3 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 牛0酸(suan)烯(xi)醇式酸(suan)羧激(ji)酶(PCK)ELISA 試劑(ji)盒(he) VSIG4 (V-set and immunoglobulin domain-containing protein 4) VSIG4 T淋(lin)巴(ba)細胞負(fu)調(tiao)節蛋(dan)白(bai)之(zhi)壹(抗(kang)原) 0.5mg

Jarid1C： 組(zu)蛋(dan)白去甲(jia)基(ji)化Jarid1C抗(kang)體(ti) 小鼠源細胞

ZA6細胞，轉(zhuan)S9基(ji)因倉(cang)鼠卵(luan)巢(chao)細胞 WI-38(人(ren)二倍體(ti)胚肺(fei)細胞) 中(zhong)國(guo)倉(cang)鼠卵(luan)巢(chao)細胞K1(亞(ya)系克隆(long));CHO-K1 牛(niu)0酸(suan)果(guo)糖激(ji)酶(PFK)ELISA 試劑(ji)盒(he) WNK4(Ser/Thr-protein kinase WNK4; protein kinase with no lysine 4; protein kinase, lysine –dficient 4) 壹種(zhong)新(xin)的(de)絲(si)酸(suan)/蘇酸(suan)激(ji)酶家(jia)族(zu)成員(yuan)的(de)基(ji)因WNK4(多(duo)肽抗(kang)原) 0.5mg

JMJD1B： 組(zu)蛋(dan)白去甲(jia)基(ji)轉移(yi)酶JMJD1B抗(kang)體(ti) CD8A Others Human 人(ren) CD8A / MAL 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

Walker/LLC-WRC 256大(da)鼠腹水癌細胞SLITRK4： 神(shen)經突觸相關蛋白(bai)SLITRK4抗(kang)體(ti) Acc-2(人(ren)涎(xian)腺(xian)腺(xian)樣囊性癌細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2

EB病(bing)毒(du)轉(zhuan)化的(de)人(ren)B淋(lin)巴(ba)細胞;KMY0923 人(ren)腦(nao)動(dong)脈血(xue)管(guan)內(nei)皮細胞培(pei)養基(ji) 100mL 大(da)鼠Smoothelin蛋(dan)白(SMTN)ELISA試劑(ji)盒(he) IRAP(Human ICE protease-activating factor)  人(ren)ICE蛋(dan)白(bai)酶激(ji)活因子(zi) 96T

SLITRK5： 神(shen)經突觸相關蛋白(bai)SLITRK5抗(kang)體(ti) CL-0181P3X63Ag8(小鼠骨(gu)髓(sui)瘤(liu)細胞)5×106cells/瓶(ping)×2

EC109，人(ren)食(shi)管(guan)癌細胞 大(da)鼠Smad同(tong)源物(wu)7(Smad7)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) NON(Human nonmethylated oligonucleotide0  人(ren)非(fei)甲(jia)基(ji)化寡(gua)核(he)苷酸(suan) 96T

SLITRK6： 神(shen)經突觸相關蛋白(bai)SLITRK6抗(kang)體(ti) EPHB1 Others Cynomolgus 食(shi)蟹(xie)猴 EphB1 / EPHT2 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

三(san)、培(pei)養註意(yi)事項 

1. 收到(dao)細胞後(hou)首(shou)先(xian)觀察細胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養液(ye)是否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁等現象(xiang)，若有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及(ji)時(shi)和我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔細閱(yue)讀(du)細胞說明(ming)書，了解細胞相(xiang)關(guan)信(xin)息，如(ru)細胞形態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需 細胞因子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細胞培(pei)養條(tiao)件(jian)壹致(zhi)，若由於(yu)培(pei)養條(tiao)件(jian)不(bu)壹致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細胞出(chu)現(xian)問題，責任由 客(ke)戶(hu)自(zi)行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦拭細胞瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細胞狀態(tai)。因運輸問題，部分細胞由於(yu)溫(wen)度 變化及(ji)劇烈(lie)碰亡破碎形成(cheng)碎片，是正常現象(xiang)。觀察好細胞狀態(tai)後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可以消(xiao)化，懸浮細胞直(zhi)接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培(pei)養基(ji)重懸 細胞，並(bing)接種(zhong)到(dao)新的(de)培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)進行培(pei)養。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相同(tong)條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養基(ji)用(yong)於(yu)細胞培(pei)養。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細胞照(zhao)片，記錄(lu)細胞狀態(tai)，便(bian)於(yu)和我司(si)技(ji)術(shu)部溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運輸的(de)原因，個(ge)別(bie)敏感(gan)細胞會出(chu)現(xian)不穩定(ding)的(de)情況(kuang)，請及(ji)時(shi)和我們聯(lian)系(xi)，告知(zhi)細胞 的(de)具(ju)體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我們的(de)技術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至問題解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供(gong)科研(yan)使用(yong)。

8. 備註(zhu)：運輸用(yong)的(de)培(pei)養基(ji) (灌液(ye)培(pei)養基(ji)) 不能(neng)再用(yong)來培(pei)養細胞，請換(huan)用(yong)按照(zhao)說明(ming)書細胞培(pei) 養條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養基(ji)來培(pei)養細胞。     收到(dao)細胞後(hou)第(di)壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。