WM-115人(ren)黑(hei)素(su)瘤(liu)細胞(bao)

公司(si)產品僅供科研研究使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨床診(zhen)斷(duan)！

1、細胞(bao)傳代：

1）細胞(bao)生長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察，待細胞(bao)回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化，再(zai)輕輕(qing)吹打細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後將懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸，然後按 1:2 比例進(jin)行分(fen)瓶(ping)傳代，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察，待細胞(bao)回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化，輕(qing)輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後將懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量的凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將細胞(bao)凍(dong)存管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮中進(jin)行長期(qi)保存。使用(yong)程(cheng)序

降溫(wen)盒(he)可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇細胞(bao)：以(yi)下細胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅供參考，具(ju)體操(cao)作步(bu)驟以(yi)隨(sui)貨產品說明(ming)書(shu)為主。將含有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅速搖晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條件下離心3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻。然後將所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適(shi)量培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜（或(huo)將細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第(di)二天換液(ye)並檢(jian)查細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳代：如果細胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可進(jin)行傳代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂離子的PBS潤(run)洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情(qing)況而定），然後在(zai)顯微鏡下觀(guan)察細胞(bao)消(xiao)化情(qing)況，若細胞(bao)大(da)部分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫落(luo)，迅速(su)拿回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止消(xiao)化。輕(qing)輕打(da)勻(yun)後(hou)裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心管(guan)中，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將細胞(bao)懸(xuan)液按1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新的含8 mL培(pei)養(yang)基的新皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待細胞(bao)生長狀態良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行細胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為例；a、收(shou)集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心管(guan)中，1000 rpm條件下離心4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數(shu)量加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍存1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註意凍(dong)存(cun)管做(zuo)好(hao)標識。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管位置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿取。

三(san)、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)首先觀(guan)察細胞(bao)瓶(ping)是否完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏液(ye)、渾濁(zhuo)等現(xian)象，若有(you)上述現(xian)象(xiang) 發(fa)生請及(ji)時(shi)和(he)我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞(bao)說明(ming)書(shu)，了解細胞(bao)相關(guan)信(xin)息(xi)，如細胞(bao)形(xing)態、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比(bi)例、所(suo)需 細胞(bao)因(yin)子等，確(que)保細胞(bao)培(pei)養(yang)條件壹致，若由於(yu)培(pei)養(yang)條件不(bu)壹致而(er)導(dao)致細胞(bao)出現(xian)問(wen)題，責任(ren)由(you) 客戶(hu)自(zi)行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微鏡下觀(guan)察細胞(bao)狀態。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部分(fen)細胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細胞(bao)狀態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮細胞(bao)直接(jie)混勻收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培(pei)養(yang)基重懸 細胞(bao)，並(bing)接(jie)種到(dao)新的培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用(yong)相同(tong)條件的培(pei)養(yang)基用(yong)於(yu)細胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客戶(hu)收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)前 3 天各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細胞(bao)照片，記(ji)錄細胞(bao)狀態，便(bian)於(yu)和我(wo)司(si)技(ji)術部溝通(tong) 交(jiao)流。由(you)於(yu)運輸(shu)的原因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感細胞(bao)會(hui)出現(xian)不(bu)穩定的情(qing)況，請(qing)及時(shi)和(he)我們聯系，告知細胞(bao) 的具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技(ji)術人員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直至(zhi)問題解(jie)決(jue)。

7. 該細胞(bao)僅供科研使用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用(yong)的培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基) 不(bu)能再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換用(yong)按(an)照說明(ming)書(shu)細胞(bao)培(pei) 養(yang)條件新配制(zhi)的培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)第(di)壹次(ci)傳代建議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿(min)。

公司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的產品：

IL12B Protein Mouse 重組(zu)小(xiao)鼠 IL12B / IL-12B 蛋白(bai) 大(da)鼠(shu)腎素(su)(REN)ELISA試劑盒(he) ANP(Human Atrial Natriuretic Peptide)  人心(xin)肽 96T

NFKB p52： 細胞(bao)核(he)因(yin)子/k基因(yin)結(jie)合核因(yin)子 p52/p100抗體(ti) CDKL2 Others Human 人(ren) CDKL2 桿(gan)狀病毒(du)-昆蟲細胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性對(dui)照)

小(xiao)鼠腎(shen)動(dong)脈(mai)平(ping)滑(hua)肌細胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 大(da)鼠(shu)腎上腺(xian)髓質(zhi)素(su)(ADM)ELISA試劑盒(he) SCF/MGF(Mouse Stem cell factor/mast cell growth factor)  小(xiao)鼠幹(gan)細胞(bao)因(yin)子/肥大(da)細胞(bao)生長因(yin)子 96T

Phospho-NFKB2(Ser866+Ser870)： 0酸(suan)化細胞(bao)核(he)因(yin)子/k基因(yin)結(jie)合核因(yin)子p100抗體(ti) MDCK細胞(bao)，狗(gou)腎細胞(bao) 人(ren)結腸癌細胞(bao),RKO細胞(bao) CM-H101新生兒表(biao)皮角(jiao)化細胞(bao)培(pei)養(yang)基100mL

NAALADL1 Others Mouse 小(xiao)鼠 NAALADL1 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性對(dui)照) 大(da)鼠(shu)腎上腺(xian)髓質(zhi)素(su)(ADM)ELISA 試劑盒(he) SDF-1 Beta/CXCL12(Mouse Stromal cell derived factor 1 Beta)  小(xiao)鼠基質(zhi)細胞(bao)衍(yan)生因(yin)子1β 96T

人(ren)腎動(dong)脈(mai)平(ping)滑(hua)肌細胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 人P21蛋白(bai)(P21)ELISA試劑盒(he) STAT6(signal transducers and activators of transduction 6) 信(xin)號(hao)轉(zhuan)導(dao)和(he)轉(zhuan)錄激(ji)活因(yin)子6抗原 0.5mg

IRS1： 胰(yi)島素(su)受體底物-1抗體 白(bai)鰱尾(wei)鰭(qi)細胞(bao)系;SCF 人成纖維細胞(bao)，Hs 578T細胞(bao) Acc-3(涎(xian)腺(xian)腺樣囊性癌(ai)細胞(bao))

IGSF8 Others Mouse 小(xiao)鼠 PGRL / IGSF8 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性對(dui)照) 人P16蛋白(bai)(P16)ELISA試劑盒(he) SULT1E1(Estrogen Sulfotranferase) 雌激(ji)素(su)轉(zhuan)移(yi)酶抗(kang)原 0.5mg

IRS-2： 胰(yi)島素(su)受體底物-2抗體 水(shui)貂肺(fei)上皮細胞(bao);Mv.1.Lu(NBL-7)

F9細胞(bao)，小(xiao)鼠畸(ji)胎瘤(liu)細胞(bao) A549 [A-549](肺(fei)癌細胞(bao)) 人(ren)癌細胞(bao);MDA-MB-453 人(ren)OJ抗體/抗(kang)異亮(liang)酰NA合(he)成酶抗(kang)體(ti)(OJ/IleRS)ELISA 試劑盒(he) SUMO 類泛素(su)蛋白(bai) 0.5mg

WM-115人(ren)黑(hei)素(su)瘤(liu)細胞(bao)RNF45： 環(huan)指(zhi)蛋白(bai)45/自分(fen)泌(mi)運動(dong)因(yin)子受體抗體 EPHB6 Others Human 人 EphB6 / EPHB6 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性對(dui)照)

人(ren)角(jiao)膜(mo)上皮細胞(bao)裂(lie)解物HCEpiCL 大(da)鼠(shu)白(bai)介素(su)4(IL-4)ELISA試劑盒(he) ACP(Human Acid Phosphatase)  人酸(suan)性0酸(suan)酶 96T

ROR alpha： 維相關(guan)孤(gu)兒受體α抗體 恒河猴肺細胞(bao);RM-L1

SV40T轉(zhuan)化人臍(qi)靜(jing)脈內皮細胞(bao);PUMC-HUVEC-T1 人(ren)膀胱(guang)成纖維細胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 大(da)鼠(shu)白(bai)介素(su)4(IL-4)ELISA 試劑盒(he) GPI(Human glucose-6-phosphate isomerase)  人葡(pu)萄糖(tang)60酸(suan)異(yi)構(gou)酶(mei) 96T

RORG： 維相關(guan)孤(gu)兒受體γ抗體 RA, 大(da)鼠(shu)星(xing)形(xing)膠質(zhi)細胞(bao)