WRL68人(ren)正(zheng)常肝細(xi)胞

公司(si)產(chan)品僅供科研研究(jiu)使用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細(xi)胞生長至(zhi)覆(fu)蓋培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞回縮(suo)變(bian)圓後加(jia)入 5ml 培養

液(ye)終止(zhi)消化，再(zai)輕輕吹(chui)打細(xi)胞使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培養基(ji)重(zhong)懸，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行分瓶(ping)傳代(dai)，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱(xiang)中培養；

2、細(xi)胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生長至(zhi)覆(fu)蓋培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞回縮(suo)變(bian)圓後加(jia)入培養液(ye)終

止(zhi)消化，輕輕吹(chui)打細(xi)胞使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞凍存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中進(jin)行長(chang)期保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降溫盒(he)可(ke)直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以下(xia)細(xi)胞培養凍(dong)存(cun)處(chu)理僅供參考，具體操作步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品說(shuo)明(ming)書為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸液(ye)的凍存(cun)管(guan)在 37℃水浴(yu)中迅速搖(yao)晃解凍，加(jia)4 mL培養基(ji)混合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基(ji)後吹(chui)勻。然(ran)後將所有細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入含(han)適量(liang)培養基(ji)的培養瓶(ping)中(zhong)培養過(guo)夜（或(huo)將細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約8 mL培養基(ji)，培養過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳代(dai)：如(ru)果細(xi)胞密度(du)達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去(qu)培養上(shang)清，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消化液(ye)浸(jin)潤(run)所有細(xi)胞，將培養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養箱(xiang)中消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況而定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞消化情況，若(ruo)細(xi)胞大部分變(bian)圓並(bing)脫落(luo)，迅速拿回操作臺(tai)，輕敲幾下(xia)培養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養基(ji)終止(zhi)消化。輕輕打勻後裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養液(ye)後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞懸液(ye)按1:2比(bi)例分到(dao)新的含(han)8 mL培養基(ji)的新皿(min)中或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中培養。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞生長狀態良好時，可(ke)進(jin)行細(xi)胞凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集(ji)細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培養液(ye)，裝入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細(xi)胞計數。

b、根據細(xi)胞數量(liang)加(jia)入無血(xue)清細(xi)胞凍存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸液(ye)，註意凍存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄凍存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次拿取(qu)。

公司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

TE-10(人(ren)食管(guan)癌細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 HCC1428(人(ren)癌細(xi)胞) 大鼠神(shen)經(jing)元(yuan)正(zheng)五聚蛋白Ⅱ(NPTX2)ELISA試(shi)劑盒(he) EM-2(Human endomorphin-2)  人(ren)內(nei)肽(tai)-2 96T

Nanos3： 骨(gu)巢蛋白抗體 人(ren)胚肝二(er)倍(bei)體細(xi)胞;CCC-HEL-1

IL12B Protein Rat 重(zhong)組(zu)大鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (His 標簽(qian)) 大鼠神(shen)經(jing)元(yuan)正(zheng)五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)ELISA試(shi)劑盒(he) TGF- Beta1(Mouse Transforming Growth factor Beta1)  小(xiao)鼠轉化生長因(yin)子(zi)β1 96T

Netrin 5： 軸突(tu)生長誘(you)向因(yin)子(zi)5抗體 MARK3 Others Human 人(ren) MARK3 / CTAK1 / EMK-2 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao))

小(xiao)鼠腎(shen)小管(guan)上(shang)皮細(xi)胞培養基(ji) 100mL 大鼠神(shen)經(jing)元(yuan)衍生孤兒(er)受(shou)體(ti)1(NOR1)ELISA試(shi)劑盒(he) Casp-9  大鼠胱(guang)天(tian)蛋白酶(mei)9 96T

CCL5 Protein Human 重(zhong)組(zu)人(ren) CCL5 / RAES 蛋白 (His & mucin 標簽(qian)) 人(ren)N鈣(gai)黏(nian)蛋白/神(shen)經(jing)鈣(gai)黏(nian)蛋白(N-Cad)ELISA 試(shi)劑盒(he) MAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A) 微(wei)管(guan)相(xiang)關蛋白1A抗原(yuan) 0.5mg

ICAD： Caspase激(ji)活的脫氧(yang)核(he)糖(tang)核(he)酸(suan)酶(mei)抑(yi)制(zhi)劑抗體 PTPN12 Others Human 人(ren) PTPN12 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao))

人(ren)腎(shen)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞培養基(ji) 100mL 人(ren)N端中(zhong)段(duan)骨(gu)鈣(gai)素(N-MID-OT)ELISA 試(shi)劑盒(he) TBX2/T-box2(T-box Protein 2) 新型抑(yi)癌基(ji)因(yin)(多(duo)肽(tai)) 0.5mg

Insulin Receptor alpha： 胰(yi)島(dao)素受體(ti)α抗體 散鱗鏡(jing)鯉尾鰭細(xi)胞;YZ21 人(ren)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞，Hs 578Bst細(xi)胞 HO-8910PM(高轉(zhuan)移卵巢癌細(xi)胞)

FCRL1 Others Mouse 小(xiao)鼠 FCRL1 / FCRH1 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) 人(ren)N端前腦(nao)素(-proBNP)ELISA 試(shi)劑盒(he) TCF7L2(transcription factor 7-like 2) 轉(zhuan)錄(lu)因(yin)子(zi)7類(lei)似物(wu)2抗原(yuan) 0.5mg

WRL68人(ren)正(zheng)常肝細(xi)胞Rab24： ras基(ji)因(yin)相關蛋白Rab24抗體 人(ren)T淋(lin)巴(ba)瘤細(xi)胞Jurkat亞系;Jurkat77

CL-0158MGC80-3(人(ren)胃癌細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2 大鼠白介(jie)素-33(IL-33)ELISA試(shi)劑盒(he) RNASE(Human Ribonuclease)  人(ren)核(he)糖(tang)核(he)酸酶(mei) 96T

RDH10： 脫氫酶(mei)10抗體 EPHB4 Others Human 人(ren) EphB4 / HTK 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao))

人(ren)心(xin)臟(zang)微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮細(xi)胞裂解(jie)物HCMECL 大鼠白介(jie)素33(IL-33)ELISA試(shi)劑盒(he) LPO(Human lipid peroxlde)  人(ren)過(guo)氧(yang)化脂(zhi)質/乳過氧(yang)化物(wu)酶(mei) 96T

RHEB： Ras蛋白腦(nao)組(zu)織同源類(lei)似物(wu)RHEB蛋白抗體 SV40轉化的(de)非洲綠猴(hou)腎(shen)細(xi)胞;COS-1

三、培養註意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後首(shou)先(xian)觀察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否完(wan)好，培養液(ye)是否有漏(lou)液、渾(hun)濁等現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述現象(xiang) 發(fa)生請及(ji)時(shi)和(he)我們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞說(shuo)明(ming)書，了解細(xi)胞相關信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞形態、所用(yong)培養基(ji)、血(xue)清比(bi)例、所需 細(xi)胞因(yin)子(zi)等，確(que)保(bao)細(xi)胞培養條(tiao)件壹致，若(ruo)由於(yu)培養條(tiao)件不(bu)壹致而(er)導(dao)致細(xi)胞出(chu)現問題(ti)，責任(ren)由 客(ke)戶(hu)自行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精擦(ca)拭細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞狀態。因(yin)運輸(shu)問(wen)題(ti)，部分細(xi)胞由於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎(sui)形成碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀察(cha)好細(xi)胞狀態後，75%酒精消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可以(yi)消化，懸浮(fu)細(xi)胞直接(jie)混勻收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的(de)培養基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種到(dao)新的培養瓶(ping)或(huo)培養皿(min)中，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中進(jin)行培養。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同條件的(de)培養基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞培養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後前 3 天(tian)各拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片，記錄細(xi)胞狀態，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司(si)技(ji)術部溝通(tong) 交流。由於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏感細(xi)胞會(hui)出(chu)現不穩(wen)定(ding)的情況，請及(ji)時(shi)和(he)我們聯(lian)系，告知細(xi)胞 的具體情況，以便我(wo)們的技(ji)術人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回訪直至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供科研使用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用(yong)的(de)培養基(ji) (灌液培養基(ji)) 不能(neng)再用(yong)來(lai)培養細(xi)胞，請換(huan)用(yong)按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞培 養條(tiao)件新配制(zhi)的培養基(ji)來(lai)培養細(xi)胞。     收到(dao)細(xi)胞後第(di)壹次傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)。