MUM2B人侵襲性(xing)脈(mai)絡膜(mo)黑(hei)色(se)素(su)瘤(liu)細胞(bao)

公司(si)產(chan)品(pin)僅供科研(yan)研(yan)究(jiu)使用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於臨床診(zhen)斷(duan)！

1、細胞(bao)傳代(dai)：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比例(li)進行(xing)分(fen)瓶傳代(dai)，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍存(cun)：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後加入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消化(hua)，輕輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，並放(fang)置於凍存(cun)管中；

4）先將(jiang)細胞(bao)凍存(cun)管放置於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其移入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中進行(xing)長(chang)期保(bao)存(cun)。使用(yong)程序

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直接(jie)放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍存(cun)處理僅供參考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產品(pin)說(shuo)明書為主(zhu)。將(jiang)含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍存(cun)管在 37℃水浴中迅(xun)速搖晃解凍，加4 mL培(pei)養(yang)基混合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下離心(xin)3 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)含(han)適量培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第二(er)天(tian)換(huan)液並檢查細胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳代(dai)：如果細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂離子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使消化液(ye)浸(jin)潤所(suo)有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視細胞(bao)情況(kuang)而定），然(ran)後在顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分(fen)變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速拿回操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。輕輕(qing)打勻(yun)後裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的新(xin)皿中或者瓶中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍存(cun)：待細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良好時(shi)，可進行(xing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件下離心(xin)4 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加入(ru)無(wu)血清(qing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)液，使細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍存(cun)管做好標識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄凍存(cun)管位置以便(bian)下次(ci)拿(na)取。

公司(si)正(zheng)在出售的(de)產品(pin)：

IL36B Protein Human 重(zhong)組人 IL36B / IL1F8 蛋白(bai) (His 標簽(qian)) 大鼠纖調蛋白(bai)(FMOD)ELISA試(shi)劑(ji)盒 CXCL16(Human CXC-chemokine ligand 16)  人CXC趨化(hua)因子(zi)配(pei)體16 96T

MMP-1： 基質(zhi)金屬蛋(dan)白(bai)酶-1抗體(ti) VEGFA Others Rat 大鼠 VEGF164 / VEGFA 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

小鼠肺(fei)血(xue)管(guan)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 大鼠纖溶(rong)抑制(zhi)因子(zi)/激活(huo)的纖(xian)溶(rong)抑制(zhi)物(TAFI)ELISA試(shi)劑(ji)盒 RBP  大鼠結合(he)蛋白 96T

MMP-1： 基質(zhi)金屬蛋(dan)白(bai)酶-1抗體(ti) NCI-H460[H460]細(xi)胞(bao)，大細胞(bao)肺(fei)癌(ai)細(xi)胞(bao) 人腦神(shen)經(jing)膠質(zhi)瘤(liu)細胞(bao),H4細胞(bao) 小鼠B細胞(bao)雜交瘤(liu)細胞(bao);W6/32

CADM3 Others Rat 大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 人細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 大鼠纖溶(rong)抑制(zhi)因子(zi)/激活(huo)的纖(xian)溶(rong)抑制(zhi)物(TAFI)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CXCR3(Human CXC-chemokine receptor 3)  人CXC趨化(hua)因子(zi)受(shou)體3 96T

C22orf28： 22號(hao)染色(se)體(ti)開(kai)放(fang)閱讀框(kuang)28抗體(ti) 角(jiao)膜(mo)上皮(pi)細胞(bao)培(pei)養(yang)基CEpiCM-prf

CX3CL1 Protein Canine 重(zhong)組狗(gou) Fractalkine / CX3CL1 蛋白(bai) 人澱粉(fen)樣前體(ti)蛋白(bai)(βAPP)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 UTS2R/GPR14(Urotensin II receptor：G Protein Coupled Receptor 14) G蛋(dan)白偶聯受(shou)體14抗(kang)原 0.5mg

C14orf94： 14號(hao)染色(se)體(ti)開(kai)放(fang)閱讀框(kuang)94抗體(ti) NGF Others Human 人 β-NGF / Beta-NGF CHO細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

人淋(lin)巴(ba)血(xue)管(guan)內皮(pi)細胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 人(Amylase)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 GPR30(G Protein Coupled Receptor 30) G蛋(dan)白偶聯受(shou)體30抗(kang)原 0.5mg

HDDC3： 四(si)0酸鳥(niao)苷水解酶(mei)抗體 婆(po)羅(luo)門牛(niu)皮(pi)膚成纖(xian)維(wei)樣細(xi)胞(bao);BOS-4 白血(xue)病(bing)原髓(sui)細(xi)胞(bao)，HL-60細胞(bao) Dami(巨核細胞(bao)白血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao))

MUM2B人侵襲性(xing)脈(mai)絡膜(mo)黑(hei)色(se)素(su)瘤(liu)細胞(bao)GRN Protein Human 重(zhong)組人 Granulin / GRN / Progranulin 蛋白(bai) (His 標簽(qian)) 大鼠多(duo)巴(ba)胺(an)D2受(shou)體(D2R)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 ADH/VP/AVP(Human antidiuretic hormone/vasopressin/arginine vasopressin)  人抗利(li)尿(niao)激素(su)/血管(guan)加壓(ya)素(su)/精酸加壓(ya)素(su) 96T

Phospho-Progesterone Receptor(Ser190)： 0酸化(hua)孕(yun)激素(su)受(shou)體抗(kang)體 LRG1 Others Human 人 LRG1 人細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

NCI-H1299 人非小(xiao)細胞(bao)肺(fei)癌(ai)細(xi)胞(bao) 大鼠多(duo)巴(ba)胺(an)D1受(shou)體(D1R)ELISA試(shi)劑(ji)盒 GAL(Human galanin)  人甘(gan)丙(bing)肽/甘(gan)丙(bing)素(su) 96T

phospho-PI3 Kinase p110 beta(Ser1070)： 0酸化(hua)0脂(zhi)酰肌(ji)醇(chun)激酶(mei)(PI3Kβ)抗體(ti) JEG-3/VP16-TNFa細胞(bao)，人絨(rong)癌細(xi)胞(bao)VP16耐藥(yao)株(zhu)TNFa轉(zhuan)染 人癌細(xi)胞(bao),SK-BR-3細胞(bao) 成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)添加物-2FGS-2

CADM4 Others Mouse 小鼠 CADM4 / IGSF4C / TSLL2 人細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 大鼠多(duo)巴(ba)胺(an)D1受(shou)體(D1R)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 IFN- Gamma  大鼠γ幹擾(rao)素(su) 96T

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後首(shou)先觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養(yang)液是否(fou)有漏(lou)液、渾濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有上述(shu)現象(xiang) 發生(sheng)請及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯系(xi)。

2. 仔細閱讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明書，了(le)解細(xi)胞(bao)相關(guan)信息，如細胞(bao)形態、所用(yong)培(pei)養(yang)基、血清(qing)比(bi)例、所需 細胞(bao)因子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條件壹致，若(ruo)由(you)於培(pei)養(yang)條件不(bu)壹致而導致(zhi)細胞(bao)出現問(wen)題(ti)，責任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因運(yun)輸問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細胞(bao)由(you)於溫(wen)度 變(bian)化及(ji)劇(ju)烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎(sui)片，是正(zheng)常現象(xiang)。觀察(cha)好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞(bao)直接(jie)混勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的(de)培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到(dao)新的培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相同(tong)條(tiao)件(jian)的培(pei)養(yang)基用(yong)於細胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞(bao)後前 3 天(tian)各(ge)拍幾張(zhang)細胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄細胞(bao)狀(zhuang)態，便於和我司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交流(liu)。由(you)於運(yun)輸的(de)原因，個(ge)別(bie)敏(min)感細胞(bao)會出(chu)現不(bu)穩定的情(qing)況，請及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯系(xi)，告知細胞(bao) 的具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以便(bian)我們(men)的技(ji)術人員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該細胞(bao)僅供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備註：運(yun)輸用(yong)的培(pei)養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)養(yang)基) 不(bu)能再用(yong)來培(pei)養(yang)細胞(bao)，請換(huan)用(yong)按照說(shuo)明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條件新(xin)配(pei)制的(de)培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後第壹次傳代(dai)建議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。