MIA-PACA-2人胰(yi)腺癌(ai)細(xi)胞

公司產品(pin)僅(jin)供(gong)科研研(yan)究使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用於臨床(chuang)診斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生長至(zhi)覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終止消化，再(zai)輕輕吹打細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上清，沈(chen)澱細胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例進行分瓶(ping)傳(chuan)代，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱中培養(yang)；

2、細(xi)胞凍存：

1）細(xi)胞生長至(zhi)覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培養(yang)液(ye)終

止消化，輕輕吹打細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並放置於凍存管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍存管(guan)放置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮中進行長期保(bao)存。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養(yang)操作(zuo)

1) 復(fu)蘇細胞：以下(xia)細胞培養(yang)凍(dong)存處理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考，具(ju)體(ti)操作(zuo)步驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產品(pin)說明書(shu)為(wei)主。將(jiang)含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管(guan)在 37℃水浴中迅速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去上清液，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)含適(shi)量(liang)培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過夜(ye)）。第二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢查(zha)細胞密度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細(xi)胞密度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上(shang)清，用不含鈣(gai)、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所有(you)細胞，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置於37℃培養(yang)箱中消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況而定），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞消化情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞大部分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿回(hui)操作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止消化。輕輕打勻(yun)後(hou)裝入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去上清液，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例分(fen)到(dao)新(xin)的含8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置於培養(yang)箱中培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍存：待(dai)細(xi)胞生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可(ke)進行細胞凍存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培養(yang)液(ye)，裝入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去上清液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細胞計數。

b、根(gen)據細胞數量(liang)加(jia)入(ru)無血清細胞凍存液(ye)，使(shi)細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每支凍(dong)存管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍存(cun)管(guan)做好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存管(guan)位置以便下(xia)次(ci)拿取。

公司正(zheng)在出售(shou)的產品(pin)：

大鼠角(jiao)膜內皮細胞培養(yang)基(ji) 100mL 大(da)鼠心(xin)肌(ji)肌(ji)鈣(gai)蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA 試(shi)劑盒(he) ACS  大鼠脂(zhi)酰(xian)合成酶 96T

MG： 雞毒(du)支原(yuan)體抗體 SMMC-7721細(xi)胞，肝癌(ai)細(xi)胞 人羊膜細胞系,Wish細胞 倉(cang)鼠/小(xiao)鼠雜交(jiao)瘤細(xi)胞;145-2C11

NLGN1 Others Mouse 小鼠 Neuroligin 1 / NLGN1 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 大鼠心(xin)房(fang)尿(niao)肽(tai)受體ELISA試(shi)劑盒(he) Obestatin (Human Ghrelin/GHRP)  人肥胖(pang)抑(yi)制(zhi)素(su)ELISA試(shi)劑盒(he) 96T

MtTF1： 線(xian)粒體(ti)轉(zhuan)錄(lu)因子1抗體 人心臟(zang)成纖維(wei)細胞總RNAHCF NA

MDBK (NBL-1)牛腎(shen)細(xi)胞 MDBK (NBL-1) of bovine kidney cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠小(xiao)白(bai)蛋白(PVALB)ELISA試(shi)劑盒(he) PARC(Mouse pulmonary activation regulated chemokine)  小鼠肺(fei)部(bu)活化調(tiao)節趨化因子 96T

Histone H3： 組蛋白H3抗體 IFNG Others Human 人 IFN-gamma / IFNG / γ-IFN CHO細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

人前列(lie)腺成纖維(wei)細胞培養(yang)基(ji) 100mL 人泛素(su)分解(jie)酶(mei)(DUB)ELISA 試(shi)劑盒(he) FOXF1(Forkhead box protein F1) 叉頭(tou)蛋白F1抗原(yuan) 0.5mg

HHV8 ORF K2： 人類皰疹病(bing)毒(du)8抗體 牦牛(niu)皮膚細胞;BMU-S1 單(dan)核(he)細胞巨噬(shi)細(xi)胞，J774A1細胞 Raji(Butt's 淋巴瘤細胞)

FKBP7 Others Human 人 PPIase / FKBP7 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 人泛素(su)蛋白(Ub)ELISA 試(shi)劑盒(he) FOXJ1/HFH-4 peptide 插頭(tou)蛋白J1抗原(yuan) 0.5mg

HHV4/CMV： 人類巨細(xi)胞病(bing)毒(du)抗體 CL-0010786-O(人腎(shen)透明細胞癌(ai)細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2

MIA-PACA-2人胰(yi)腺癌(ai)細(xi)胞MT-4 人急(ji)性(xing)淋巴母細胞白血病(bing)細胞 大鼠法(fa)尼基(ji)二(er)0酸(suan)合(he)酶(mei)(FDPS)ELISA試(shi)劑盒(he) rT3(Human ReverseTri-iodothyronine)  人反(fan)狀(zhuang)腺原(yuan)酸 96T

Patched： Patched/PTCH抗體 293001B細(xi)胞，Sars蛋白表達株 人導管(guan)癌(ai)細(xi)胞,MDA-MB-453細胞 口(kou)腔(qiang)角質細胞培養(yang)基(ji)OKM-prf

KLK3 Others Human 人 KLK3 / PSA / Kallikrein-3 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 大鼠法(fa)尼醇(chun)X受體(FXR)ELISA試(shi)劑盒(he) 6-keto-PGF1a(Human 6-keto-prostaglandin F1a)  人6酮(tong)前(qian)列(lie)腺素(su)F1a 96T

PTGEs： 前列(lie)腺素(su)E合成酶抗體 CM-H028人淋巴血管(guan)內皮細胞培養(yang)基(ji)100mL

A-673 人橫紋肌(ji)瘤(liu)細(xi)胞 A-673 rhabdomyoma cells DMEM培養(yang)基(ji)+10%FBS 大(da)鼠二(er)酰(xian)基(ji)甘油(DAG/DG)ELISA試(shi)劑盒(he) TGF- Beta1  大鼠轉(zhuan)化生長因子β1 96T

三、培養(yang)註意(yi)事項 

1. 收到(dao)細胞後(hou)首(shou)先(xian)觀察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是否有(you)漏液(ye)、渾濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有(you)上述(shu)現(xian)象 發(fa)生請及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細胞說明書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞相關(guan)信息(xi)，如(ru)細胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培養(yang)基(ji)、血清比例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因子等(deng)，確保細(xi)胞培養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由(you)於培養(yang)條(tiao)件(jian)不壹(yi)致而導致細胞出現(xian)問題(ti)，責(ze)任由 客(ke)戶(hu)自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因運輸(shu)問題(ti)，部(bu)分細(xi)胞由於溫(wen)度 變(bian)化及(ji)劇(ju)烈碰亡(wang)破碎形(xing)成碎片，是(shi)正(zheng)常現(xian)象。觀察好(hao)細胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細胞可(ke)以消化，懸(xuan)浮(fu)細胞直(zhi)接混(hun)勻(yun)收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的培養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿(min)中，置於培養(yang)箱中進行培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用(yong)相同(tong)條(tiao)件(jian)的培養(yang)基(ji)用(yong)於細胞培養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍幾張細胞照片，記(ji)錄(lu)細胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和(he)我(wo)司技(ji)術部溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由(you)於運輸(shu)的原(yuan)因，個別(bie)敏感細胞會出現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況，請及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細(xi)胞 的具(ju)體(ti)情況，以便(bian)我(wo)們(men)的(de)技(ji)術人員跟蹤回(hui)訪(fang)直(zhi)至問題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供(gong)科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液(ye)培養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再用來(lai)培養(yang)細(xi)胞，請換(huan)用(yong)按(an)照(zhao)說明書(shu)細(xi)胞培 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配制的(de)培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細(xi)胞。     收到(dao)細胞後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。