B1203L細(xi)胞(bao)

公司產(chan)品(pin)僅(jin)供科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用於(yu)臨床診斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕輕吹打細(xi)胞(bao)使之脫落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基重懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比(bi)例進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳代(dai)，最後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)；

壹(yi)、商品(pin)介(jie)紹：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入培養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹打細(xi)胞(bao)使之脫落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先將細(xi)胞(bao)凍(dong)存管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移入-80℃過夜，24h 後(hou)轉入液氮(dan)中(zhong)進行(xing)長期(qi)保(bao)存。使用程(cheng)序

降溫(wen)盒可直接放(fang)入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下(xia)細(xi)胞(bao)培養(yang)凍(dong)存處理僅(jin)供參考，具體操(cao)作步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書為主。將含有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍(dong)存管(guan)在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均勻。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹勻。然後(hou)將所有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入含適量培(pei)養(yang)基的培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過夜（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培養(yang)過夜）。第二天換液並(bing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如果(guo)細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳代(dai)培養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上清(qing)，用(yong)不含鈣、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所有細(xi)胞(bao)，將培養瓶(ping)置於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況而定(ding)），然後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿回操(cao)作臺(tai)，輕敲幾(ji)下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打勻後(hou)裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培養液後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新的(de)含8 mL培養基的新(xin)皿中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可(ke)進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面 T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養(yang)液，裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根據細(xi)胞(bao)數量加(jia)入無血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存管(guan)放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液氮(dan)灌儲(chu)存。記錄(lu)凍(dong)存管(guan)位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取。

公司正(zheng)在出(chu)售的產(chan)品(pin)：

細(xi)胞(bao)結構(gou)型神(shen)經(jing)元(yuan)壹(yi)氧(yang)化氮合成(cheng)酶(mei)（cNOS/NOS1/nNOS）活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法(fa)定量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

高(gao)純胞(bao)漿(jiang)S100蛋(dan)白(bai)制(zhi)備(bei)試(shi)劑(ji)盒

通用型VZV（VARICELLA ZOSTER）病(bing)毒(du)定(ding)量PCR擴(kuo)增(zeng)檢測試(shi)劑(ji)盒

載玻片(pian)細(xi)胞(bao)CASPASE-8蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)熒(ying)光(guang)顯微(wei)鏡檢測試(shi)劑(ji)盒

植物(wu)B1高(gao)效液(ye)相(xiang)色(se)譜法(fa)定量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

冰凍(dong)切(qie)片(pian)免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)顯微(wei)鏡間(jian)接(jie)檢測試(shi)劑(ji)盒（含壹抗(kang)和(he)熒(ying)光(guang)二抗(kang)）

組(zu)織C-MET激(ji)酶活(huo)性(xing)定量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒（A/B/C）

（SCHMORL）染色(se)試(shi)劑(ji)盒

壹(yi)氧化(hua)氮（NO）終(zhong)點比(bi)色(se)法(fa)定量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)磷脂(zhi)酶B（Phospholipase B）活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法(fa)定量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)BWW培(pei)養液(ye)

體(ti)外非細(xi)胞(bao)系(xi)統細(xi)胞(bao)色(se)素(su)P450亞(ya)酶(mei)CYP2E1（NPH）活(huo)性(xing)

石(shi)蠟(la)切片(pian)組(zu)織線粒(li)體(ti)復合物(wu)IV蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)熒(ying)光(guang)顯微(wei)鏡檢測試(shi)劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)血管(guan)緊(jin)張(zhang)素(su)Ⅰ轉(zhuan)化酶1（ACE1）活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法(fa)定量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)培養(yang)汙(wu)染性(xing)支原(yuan)體M.hyorhinis鑒定(ding)16S rDNA

原(yuan)肌(ji)球蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體(ti)

鈣(gai)結合(he)蛋(dan)白(bai)Calponin 2抗(kang)體(ti)

鞘磷脂(zhi)沈(chen)積病(bing)C1樣蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體(ti)

INO80E蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)

細(xi)胞(bao)雕(diao)亡信號調(tiao)節激(ji)酶2抗(kang)體(ti)

WASF2抗(kang)體(ti)

口(kou)蹄(ti)疫(yi)病毒(du)3ABC抗(kang)體(ti)

B1203L細(xi)胞(bao)APC標(biao)記人CD127 (IL7R)單克(ke)隆抗(kang)體(ti)

鋅(xin)指(zhi)蛋(dan)白(bai)687抗(kang)體(ti)

三(san)、培(pei)養註意事項 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)首先觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完(wan)好(hao)，培(pei)養液(ye)是(shi)否有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁等(deng)現象，若(ruo)有(you)上述(shu)現象 發生請及(ji)時和(he)我們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了解細(xi)胞(bao)相關(guan)信(xin)息(xi)，如細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用培(pei)養基、血清(qing)比(bi)例、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培養(yang)條件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由(you)於(yu)培養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致而導(dao)致細(xi)胞(bao)出現問題，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面，顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運輸問題，部分細(xi)胞(bao)由於(yu)溫度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰(peng)亡破碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞(bao)狀態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直接(jie)混(hun)勻收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培養。

5. 請客戶用(yong)相同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基用於(yu)細(xi)胞(bao)培養(yang)。

6. 建議客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天各拍幾(ji)張細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便(bian)於(yu)和我司技術(shu)部溝通 交流(liu)。由(you)於(yu)運輸的(de)原因(yin)，個(ge)別(bie)敏感細(xi)胞(bao)會出(chu)現不穩定(ding)的(de)情況，請及(ji)時和(he)我們聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具體情況，以便(bian)我們的(de)技術(shu)人員跟蹤回訪直(zhi)至(zhi)問題解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用(yong)的培養基 (灌液(ye)培養基) 不能(neng)再用來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)，請換用按照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞(bao)培 養(yang)條件(jian)新(xin)配制的(de)培(pei)養基來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。