B16-F0細(xi)胞(bao)

公司(si)產品僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重(zhong)懸(xuan)，然後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養；

壹(yi)、商品介(jie)紹(shao)：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後(hou)加入(ru)培(pei)養液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放置於凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮中進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存(cun)處理(li)僅供(gong)參(can)考(kao)，具體操作(zuo)步驟以(yi)隨貨(huo)產品說(shuo)明書為主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹(chui)勻。然後(hou)將(jiang)所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入含適(shi)量培(pei)養基的培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天換(huan)液並檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上(shang)清，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況而(er)定），然後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分(fen)變(bian)圓並脫(tuo)落，迅速(su)拿回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打勻(yun)後裝入(ru)無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養基的新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態良(liang)好(hao)時，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝(zhuang)入無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細(xi)胞(bao)數(shu)量加入無血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意凍(dong)存(cun)管做好(hao)標識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液氮灌儲存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管位(wei)置以(yi)便下次(ci)拿取。

公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售的產品：

組織結構(gou)型(xing)神(shen)經(jing)元壹(yi)氧化(hua)氮合成酶（cNOS/NOS1/nNOS）活(huo)性(xing)比色法定量檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)可(ke)溶(rong)性(xing)總蛋白制備試(shi)劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)VZV（VARICELLA ZOSTER）病(bing)毒(du)定量PCR擴(kuo)增檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

冰(bing)凍(dong)切(qie)片組織CASPASE-8蛋(dan)白表達熒(ying)光(guang)顯(xian)微(wei)鏡檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

細(xi)菌B1高效液相(xiang)色(se)譜法定量檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

冰(bing)凍(dong)切(qie)片免疫(yi)熒(ying)光(guang)顯(xian)微(wei)鏡直(zhi)接(jie)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒（含熒(ying)光(guang)壹(yi)抗）

細(xi)胞(bao)CSK激酶活(huo)性(xing)定量檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒（A/B/C）

全(quan)組織衰老特異(yi)性晚期(qi)脂(zhi)褐素(su)鐵(tie)還(hai)原(yuan)法

動(dong)物(wu)組織羥脯（HYP）比(bi)色(se)法定量檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

組織磷脂酶(mei)B（Phospholipase B）活(huo)性(xing)比色法定量檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液

細(xi)胞(bao)色(se)素(su)P450亞酶CYP3A（END）活(huo)性(xing)比色法定量檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

載玻片(pian)細(xi)胞(bao)線粒(li)體復(fu)合(he)物(wu)IV蛋(dan)白表達NBT顯(xian)色(se)光(guang)學(xue)顯(xian)微(wei)鏡檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

組織血管緊張(zhang)素Ⅰ轉(zhuan)化(hua)酶(mei)1（ACE1）活(huo)性(xing)比色法定量檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)培(pei)養汙染性支(zhi)原(yuan)體(ti)M.orale鑒(jian)定16S rDNA

原(yuan)肌(ji)球蛋白4抗體(ti)

鈣(gai)結合蛋白Calponin抗體(ti)

鞘(qiao)磷(lin)脂(zhi)合成酶1抗體(ti)

INT11蛋(dan)白抗體(ti)

細(xi)胞(bao)雕亡抑制因子3α抗體(ti)

WASP結合蛋白抗體(ti)

口(kou)蹄疫(yi)病毒(du)3D聚合酶(mei)抗體(ti)

B16-F0細(xi)胞(bao)APC標記(ji)人CD127單(dan)克(ke)隆抗體(ti)

鋅指(zhi)蛋(dan)白688抗體(ti)

三、培(pei)養註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先觀察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好(hao)，培(pei)養液是(shi)否(fou)有漏(lou)液(ye)、渾濁等現象，若(ruo)有(you)上(shang)述現象 發生(sheng)請及時和我們聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明書，了(le)解細(xi)胞(bao)相(xiang)關信息(xi)，如細(xi)胞(bao)形(xing)態、所(suo)用(yong)培(pei)養基、血(xue)清比(bi)例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於培(pei)養條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現問題，責(ze)任由 客(ke)戶自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度 變(bian)化及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現象。觀察好(hao)細(xi)胞(bao)狀態後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻收集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培(pei)養基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種到(dao)新(xin)的培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱(xiang)中進(jin)行(xing)培(pei)養。

5. 請客戶用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件(jian)的培(pei)養基用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照片，記錄細(xi)胞(bao)狀態，便(bian)於(yu)和我司(si)技(ji)術(shu)部溝通 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個別敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現不(bu)穩(wen)定的情況，請及時和我們聯系(xi)，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的具(ju)體(ti)情況，以(yi)便我們的技(ji)術(shu)人員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至問題(ti)解決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的培(pei)養基 (灌液(ye)培(pei)養基) 不(bu)能再(zai)用(yong)來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用(yong)按(an)照說明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件(jian)新(xin)配制的培(pei)養基來培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。