BFTC-905細胞

公(gong)司產(chan)品僅供科研研(yan)究使(shi)用、不(bu)得用(yong)於臨床診(zhen)斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液，用 PBS 清洗細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待細胞回縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入 5ml 培養(yang)

液終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕輕(qing)吹打細胞使(shi)之脫落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉移至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比例進行(xing)分瓶(ping)傳代，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

壹、商(shang)品介紹(shao)：

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液，用 PBS 清洗細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待細胞回縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入培養(yang)液終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打細胞使(shi)之脫落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉移至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並(bing)放置於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細胞凍(dong)存(cun)管(guan)放置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉入液氮(dan)中(zhong)進(jin)行長期保存(cun)。使(shi)用程(cheng)序

降(jiang)溫盒可直接(jie)放入-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇細胞：以(yi)下(xia)細胞培(pei)養(yang)凍存(cun)處(chu)理(li)僅供(gong)參(can)考，具(ju)體操(cao)作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品說明(ming)書為主。將含(han)有(you)1 mL細胞懸(xuan)液的(de)凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培養基(ji)混合(he)均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培養基(ji)後吹勻。然(ran)後(hou)將所(suo)有細胞懸(xuan)液加(jia)入含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養過(guo)夜（或將細胞懸(xuan)液加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二天換液並檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如(ru)果細胞密度達 80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上(shang)清，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶中(zhong)，使(shi)消化(hua)液浸潤所(suo)有細胞，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而定(ding)），然後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若細胞大部分變(bian)圓並(bing)脫落(luo)，迅速(su)拿回操作臺(tai)，輕敲(qiao)幾下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養基(ji)終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻後(hou)裝入無菌離心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，補加(jia)1-2 mL培養液後吹勻。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液按(an)1:2比例分到(dao)新的(de)含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長狀(zhuang)態良好(hao)時(shi)，可進(jin)行(xing)細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為例；a、收(shou)集細胞及(ji)細胞培(pei)養(yang)液，裝入無菌離心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，用PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細胞數(shu)量(liang)加(jia)入無血清細胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻，每支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞懸(xuan)液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液氮(dan)灌儲存(cun)。記錄凍存(cun)管(guan)位(wei)置以(yi)便(bian)下次拿(na)取(qu)。

公(gong)司正在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品：

細胞結(jie)構(gou)型內皮(pi)細胞壹氧(yang)化(hua)氮(dan)合成(cheng)酶（cNOS/NOS3/eNOS）活性比色法(fa)定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

植(zhi)物(wu)組織(zhi)可溶(rong)性(xing)膜蛋(dan)白高(gao)純(chun)制備試(shi)劑(ji)盒

體液CMV（CYTOMEGALOVIRUS）病(bing)毒(du)定(ding)性檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

CASPASE-8蛋(dan)白表達西方雜(za)交(jiao)分析(xi)試(shi)劑(ji)盒

B3高(gao)效液相色(se)譜法(fa)定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

TEM電鏡冰凍(dong)切片免疫組織(zhi)化(hua)學(xue)AP酶聯NBT/BCIP基(ji)礎檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

組織(zhi)EGFR激(ji)酶活性定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒（A/B/C）

全(quan)組織(zhi)衰(shuai)老特異(yi)性(xing)晚(wan)期脂褐(he)素高(gao)碘(dian)酸(suan)希爾（PAS）法(fa)

肪酸(suan)化(hua)學(xue)比色法(fa)定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

細胞花生(sheng)四烯酸(suan)（arachidonic acid）酶反應比色法(fa)定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

細胞表(biao)面(mian)蛋(dan)白（surface protein）萃取(qu)試(shi)劑(ji)盒

體外(wai)非細胞系(xi)統細胞色(se)素P450亞酶CYP2B（EFC）活(huo)性(xing)

線粒體(ti)復合物(wu)IV蛋(dan)白表達ELISA定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

細胞血管緊張素Ⅰ轉(zhuan)化(hua)酶1（ACE1）活(huo)性(xing)熒光(guang)共振(zhen)能(neng)量轉移法(fa)（FRET）定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

異(yi)丁(ding)甲(jia)基(ji)細胞脂(zhi)肪誘(you)導(dao)生(sheng)成比色法(fa)定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

原纖維蛋(dan)白2抗(kang)體

鈣介質(zhi)素抗(kang)體(ti)

親環蛋(dan)白（親環(huan)素）E抗體(ti)

IOC4

細胞毒(du)性(xing)受體NK-p30（CD337）抗(kang)體(ti)

WDR91蛋(dan)白抗體(ti)

扣(kou)帶(dai)蛋(dan)白抗體(ti)

BFTC-905細胞APC標記人CD15單克(ke)隆抗體

鋅指蛋(dan)白695抗體(ti)

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細胞後(hou)首先(xian)觀察(cha)細胞瓶(ping)是否(fou)完好，培養液是否(fou)有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象，若有上(shang)述現(xian)象 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細閱讀(du)細胞說(shuo)明(ming)書，了(le)解(jie)細胞相關信息(xi)，如(ru)細胞形(xing)態(tai)、所(suo)用培養基(ji)、血清比例、所(suo)需 細胞因子(zi)等(deng)，確(que)保細胞培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹致(zhi)，若由於培養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞出(chu)現(xian)問題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶(hu)自行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦(ca)拭細胞瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細胞狀(zhuang)態。因運輸問(wen)題(ti)，部分細胞由(you)於(yu)溫度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破碎(sui)形(xing)成(cheng)碎片，是正常(chang)現(xian)象。觀(guan)察(cha)好細胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞直接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮的(de)培養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培養(yang)瓶或(huo)培養皿中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用(yong)相同(tong)條(tiao)件(jian)的(de)培養(yang)基(ji)用於(yu)細胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後(hou)前(qian) 3 天各拍(pai)幾張(zhang)細胞照(zhao)片，記錄細胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和(he)我司(si)技術部溝(gou)通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運輸的(de)原因，個別(bie)敏(min)感細胞會(hui)出(chu)現(xian)不穩定(ding)的(de)情況(kuang)，請及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)，告知細胞 的(de)具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技術人員跟(gen)蹤回訪直至問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供(gong)科研使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸用(yong)的(de)培養(yang)基(ji) (灌液培養基(ji)) 不能(neng)再用來培養細胞，請(qing)換用(yong)按(an)照(zhao)說明(ming)書細胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制的(de)培養(yang)基(ji)來培養細胞。     收(shou)到(dao)細胞後(hou)第(di)壹次(ci)傳代建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。