BEN細胞(bao)

公司產品僅供(gong)科研(yan)研(yan)究(jiu)使用(yong)、不(bu)得用(yong)於臨床診斷！

1、細胞(bao)傳代：

1）細胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細胞(bao)回(hui)縮變圓後加(jia)入 5ml 培(pei)養

液(ye)終止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打細胞(bao)使(shi)之脫落，然後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養基重(zhong)懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比例進(jin)行分(fen)瓶傳代，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養；

壹、商(shang)品介紹(shao)：

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細胞(bao)回(hui)縮變圓後加(jia)入培(pei)養液(ye)終

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打細胞(bao)使(shi)之脫落，然後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於凍存管中(zhong)；

4）先將細胞(bao)凍(dong)存(cun)管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入液(ye)氮中(zhong)進(jin)行長期保存(cun)。使(shi)用(yong)程序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直接(jie)放入(ru)-80℃。

二、細胞(bao)培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下(xia)細胞(bao)培(pei)養凍(dong)存處理(li)僅供(gong)參(can)考，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟以隨貨(huo)產(chan)品說(shuo)明書(shu)為(wei)主。將含有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培養基混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基後吹(chui)勻。然後將(jiang)所有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入含適量(liang)培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第二(er)天(tian)換液(ye)並檢(jian)查(zha)細胞(bao)密度(du)。

2) 細胞(bao)傳代：如(ru)果(guo)細胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代培養。

a、棄(qi)去培養上(shang)清，用(yong)不(bu)含鈣、鎂離(li)子的(de)PBS潤洗細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤所(suo)有(you)細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於37℃培養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然後在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞(bao)消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大部分(fen)變圓並脫落，迅速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養基終止消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻後裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養液(ye)後吹(chui)勻。

c、將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例(li)分(fen)到新(xin)的(de)含8 mL培養基的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)，置(zhi)於培養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態良好時，可(ke)進(jin)行細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清洗壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數量加(jia)入無(wu)血清(qing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使細胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍(dong)存(cun)管凍(dong)存1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存(cun)管放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入液(ye)氮灌儲存(cun)。記錄凍存管位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿取。

公司正在出售的(de)產(chan)品：

體(ti)液(ye)誘(you)導(dao)型(xing)巨噬(shi)細胞(bao)壹(yi)氧(yang)化氮合(he)成酶(mei)（（iNOS /NOS2/mNOS））活性(xing)比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

植物(wu)組(zu)織(zhi)可(ke)溶性(xing)膜(mo)蛋白(bai)粗(cu)提制備(bei)試(shi)劑(ji)盒(he)

組織(zhi)CMV（CYTOMEGALOVIRUS）病毒(du)定性(xing)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

細胞(bao)CASPASE-8蛋白(bai)表(biao)達熒光(guang)定量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

B3比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

（含HRP壹(yi)抗）

細胞(bao)EGFR激(ji)酶(mei)活性(xing)定量(liang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)（A/B/C）

品紅(hong)亞(ya)硫(liu)酸鹽(yan)（FUCHSIN SULFITE）原位(wei)染色試(shi)劑(ji)盒(he)

血清(qing)/血漿肪(fang)酸酶(mei)連續(xu)循(xun)環比(bi)色法(fa)定量(liang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

單酸甘(gan)油脂脂解(jie)酶(mei)（monoacylglycerol lipase）活性(xing)比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

細胞(bao)膜(mo)蛋白(bai)萃(cui)取試劑(ji)盒(he)

細胞(bao)色素P450亞(ya)酶(mei)CYP2B（EFC）活性(xing)熒光(guang)定量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

線粒體復(fu)合(he)物(wu)IV蛋白(bai)免疫共(gong)沈(chen)澱(dian)分(fen)析試劑(ji)盒(he)

體液(ye)血管緊(jin)張素Ⅰ轉(zhuan)化(hua)酶(mei)1（ACE1）活性(xing)熒光(guang)定量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

細胞(bao)脂肪(fang)誘(you)導(dao)生成比(bi)色法(fa)定量(liang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

原纖維(wei)蛋白(bai)1抗(kang)體

鈣結(jie)合(he)線粒體載體蛋白(bai)抗(kang)體

親環蛋白(bai)（親環素）40抗體(ti)

INTS5蛋白(bai)抗(kang)體

細胞(bao)毒(du)性(xing)T細胞(bao)抗(kang)原-4（CD152）抗(kang)體(ti)

WDR68蛋白(bai)抗(kang)體

口蹄疫病毒(du)抗體(ti)

BEN細胞(bao)APC標記人(ren)CD158e1單克隆抗(kang)體

鋅(xin)指蛋白(bai)694抗(kang)體

三、培養註(zhu)意事項(xiang) 

1. 收到(dao)細胞(bao)後首(shou)先觀察(cha)細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好，培養液(ye)是否有(you)漏液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生請(qing)及時和(he)我們(men)聯系。

2. 仔細閱讀細胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細胞(bao)相(xiang)關信息，如(ru)細胞(bao)形(xing)態(tai)、所用(yong)培養基、血清(qing)比例(li)、所需(xu) 細胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保細胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹(yi)致，若(ruo)由於培養條(tiao)件不(bu)壹致而導(dao)致細胞(bao)出(chu)現(xian)問題，責(ze)任由 客戶自(zi)行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞(bao)狀(zhuang)態。因運(yun)輸問題，部分(fen)細胞(bao)由(you)於溫度 變化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破碎形成(cheng)碎片，是(shi)正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好(hao)細胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞(bao)可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培(pei)養基重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到新的(de)培(pei)養瓶(ping)或培(pei)養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於培養箱中(zhong)進(jin)行培養。

5. 請(qing)客戶用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件的(de)培(pei)養基用(yong)於細胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議客戶收(shou)到(dao)細胞(bao)後前 3 天各拍(pai)幾(ji)張細胞(bao)照(zhao)片，記錄細胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於和(he)我司技術部溝(gou)通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於運(yun)輸的(de)原因，個別敏感(gan)細胞(bao)會(hui)出(chu)現不(bu)穩定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及時和(he)我們(men)聯系，告(gao)知(zhi)細胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員跟蹤回(hui)訪(fang)直至問(wen)題解決(jue)。

7. 該細胞(bao)僅供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用(yong)的(de)培(pei)養基 (灌液(ye)培養基) 不(bu)能再用(yong)來培(pei)養細胞(bao)，請(qing)換用(yong)按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配(pei)制的(de)培(pei)養基來培(pei)養細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後第壹(yi)次(ci)傳代建(jian)議 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿(min)。