BICR10細(xi)胞

公司產(chan)品僅(jin)供科研(yan)研究使用、不(bu)得用於臨床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞回縮變(bian)圓後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止(zhi)消化，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)；

壹、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

2、細(xi)胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞回縮變(bian)圓後加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終

止(zhi)消化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並放置於凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中進(jin)行長期保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序(xu)

降溫盒可直(zhi)接(jie)放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以下(xia)細(xi)胞培養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供參(can)考(kao)，具(ju)體操(cao)作步驟(zhou)以隨(sui)貨產(chan)品說(shuo)明(ming)書為(wei)主。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄去(qu)上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻。然(ran)後將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量培(pei)養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二天換(huan)液(ye)並檢查細(xi)胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如果細(xi)胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即可進行傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤洗細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消化液浸(jin)潤所(suo)有(you)細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置(zhi)於37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況而(er)定(ding)），然(ran)後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞消化情況，若(ruo)細(xi)胞大部分變(bian)圓並脫落(luo)，迅速拿(na)回操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消化。輕(qing)輕(qing)打勻後裝入(ru)無(wu)菌離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄去(qu)上清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待細(xi)胞生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時(shi)，可進(jin)行細(xi)胞凍存(cun)。下面 T25 瓶為例(li)；a、收集細(xi)胞及細(xi)胞培養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心4 min，棄去(qu)上清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄盡PBS，進行(xing)細(xi)胞計數。

b、根據(ju)細(xi)胞數量加(jia)入(ru)無(wu)血清(qing)細(xi)胞凍存(cun)液，使細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以便(bian)下次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司(si)正在(zai)出售的產(chan)品：

組(zu)織結(jie)構(gou)型(xing)內皮細(xi)胞壹氧化氮合(he)成酶(mei)（cNOS/NOS3/eNOS）活(huo)性(xing)比色法定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

植物組(zu)織可(ke)溶(rong)性(xing)胞漿蛋(dan)白粗提(ti)制備(bei)試(shi)劑盒

通(tong)用型(xing)CMV（CYTOMEGALOVIRUS）病毒定(ding)量PCR擴增檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

CASPASE-8蛋白免疫共(gong)沈(chen)澱(dian)分(fen)析(xi)試(shi)劑盒

B6比色法定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

TEM電(dian)鏡冰(bing)凍切片(pian)免疫組(zu)織化學(xue)AP酶聯NBT/BCIP

細(xi)胞EPHA1激酶活(huo)性(xing)定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒（A/B/C）

冰凍切片(pian)組(zu)織衰(shuai)老晚期(qi)特(te)異(yi)性(xing)脂褐(he)素(su)高(gao)碘(dian)酸(suan)希(xi)爾(er)（PAS）法

醫(yi)學(xue)蛋白分析試(shi)劑專題

組(zu)織花(hua)生四(si)烯(xi)酸(suan)（arachidonic acid）酶反應(ying)比(bi)色法定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

精漿(jiang)蛋(dan)白（semen plasma protein）萃(cui)取(qu)試(shi)劑盒

細(xi)胞色素(su)P450亞酶CYP3A1（BROD）活(huo)性(xing)熒光定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

細(xi)胞線粒體復合物V蛋白表(biao)達(da)流(liu)式細(xi)胞儀檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

組(zu)織血(xue)管(guan)緊(jin)張(zhang)素(su)Ⅰ轉化酶1（ACE1）活(huo)性(xing)熒光共(gong)振能量轉(zhuan)移(yi)法（FRET）定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

胰島素(su)細(xi)胞脂肪(fang)誘導(dao)生成(cheng)比色法定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

原纖(xian)維(wei)蛋(dan)白樣蛋白DHRD抗體

鈣(gai)介質素(su)重(zhong)組(zu)兔(tu)單(dan)克(ke)隆抗(kang)體

親環蛋白（親環素(su)）PPIA抗體

IP3KC蛋白抗體

細(xi)胞毒性(xing)受(shou)體NK-p44抗體

WD重(zhong)復(fu)蛋(dan)白16抗體

枯(ku)草(cao)桿菌蛋白酶同工(gong)酶1抗體

BICR10細(xi)胞APC標記(ji)人(ren)CD161單(dan)克(ke)隆抗(kang)體

鋅指蛋白696抗體

三、培養(yang)註意事(shi)項(xiang) 

1. 收到細(xi)胞後首先觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有上述(shu)現(xian)象 發(fa)生(sheng)請及時(shi)和我(wo)們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞說(shuo)明(ming)書，了(le)解細(xi)胞相(xiang)關信(xin)息(xi)，如細(xi)胞形態(tai)、所(suo)用培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因子(zi)等(deng)，確保(bao)細(xi)胞培養(yang)條(tiao)件(jian)壹致，若(ruo)由於培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹致而導(dao)致細(xi)胞出現(xian)問題，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶自(zi)行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭細(xi)胞瓶表(biao)面，顯微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸(shu)問題，部分細(xi)胞由於溫度 變(bian)化及劇(ju)烈碰亡破碎形成(cheng)碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精消毒瓶壁將 T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可以消化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直接(jie)混勻收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並接(jie)種(zhong)到新(xin)的培養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱中(zhong)進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用相(xiang)同條(tiao)件的培養(yang)基(ji)用於細(xi)胞培養(yang)。

6. 建議(yi)客戶收到細(xi)胞後前(qian) 3 天各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和(he)我司(si)技(ji)術(shu)部溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於運(yun)輸的原因，個(ge)別(bie)敏(min)感細(xi)胞會(hui)出現(xian)不(bu)穩定(ding)的情況，請(qing)及時(shi)和我(wo)們聯(lian)系，告(gao)知細(xi)胞 的具體情況，以便(bian)我們(men)的技術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直至(zhi)問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供科研(yan)使用。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用的培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培養(yang)基(ji)) 不(bu)能再(zai)用來培養(yang)細(xi)胞，請換(huan)用按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞培 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的培養(yang)基(ji)來培養(yang)細(xi)胞。     收到細(xi)胞後第(di)壹次傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。