C8166細(xi)胞

公(gong)司產品(pin)僅供(gong)科研研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得(de)用於臨床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化，再輕輕吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比(bi)例進行(xing)分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

壹(yi)、商品(pin)介(jie)紹(shao)：

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加(jia)入培(pei)養(yang)液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放置於凍(dong)存(cun)管中；

4）先將(jiang)細(xi)胞凍(dong)存(cun)管放置於-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮中進行(xing)長期保存(cun)。使(shi)用程序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理僅供(gong)參考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步驟以(yi)隨貨(huo)產品(pin)說(shuo)明(ming)書為主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存(cun)管在 37℃水浴(yu)中迅速(su)搖晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混合(he)均勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然後(hou)將(jiang)所有(you)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶中培養(yang)過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二(er)天換(huan)液(ye)並檢(jian)查(zha)細(xi)胞密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離子(zi)的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中，使消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所有(you)細(xi)胞，將(jiang)培養(yang)瓶置於37℃培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大(da)部分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅速(su)拿回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲幾下(xia)培養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。輕輕打勻後(hou)裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新(xin)皿中或者(zhe)瓶中，置於培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長狀態良(liang)好時(shi)，可進(jin)行(xing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為例；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm條件下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據細(xi)胞數(shu)量(liang)加(jia)入無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意凍(dong)存(cun)管做好標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮灌儲存。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管位置以便(bian)下(xia)次(ci)拿取(qu)。

公(gong)司正在(zai)出(chu)售的產品(pin)：

細(xi)胞單(dan)胺氧(yang)化酶A型(xing)（MAO－A）活性(xing)比色法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

紅(hong)細(xi)胞可(ke)溶性(xing)膜蛋(dan)白(bai)（純提(ti)）制(zhi)備試劑(ji)盒(he)

HPV7（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-7）病毒標(biao)準曲(qu)線定量(liang)PCR

CASPASE-10蛋(dan)白免疫(yi)共(gong)沈澱(dian)分(fen)析(xi)試劑(ji)盒(he)

血(xue)液(ye)總氨基(ji)酸含(han)量(liang)熒(ying)光定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

TEM電(dian)鏡(jing)石蠟切(qie)片免疫(yi)組織化學(xue)AP酶聯NBT/BCIP直(zhi)接檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)（含(han)AP壹(yi)抗）

細(xi)胞FYNT激(ji)酶活性(xing)定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)（A/B/C）

動物細(xi)胞周(zhou)期S後(hou)期同(tong)步(bu)（SYNCHRONY）處(chu)理試劑(ji)盒(he)

人(ren)前白(bai)蛋白(bai)標準(zhun)溶液(ye)

酯(zhi)酶（CHE）定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

活力和頂體(ti)形(xing)態雙(shuang)重(zhong)熒(ying)光(guang)染色試劑(ji)盒(he)

體(ti)外非(fei)細(xi)胞系(xi)統細(xi)胞色素P450亞酶2B6（BUPROPION）活性(xing)

細(xi)胞鈣(gai)ATP酶SERCA蛋(dan)白表(biao)達(da)流(liu)式細(xi)胞儀檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

細(xi)胞切(qie)割酶/β分(fen)泌(mi)酶（MENAPSIN 2；β－SECRETASE）活性(xing)

小(xiao)鼠胚(pei)胎(tai)幹細(xi)胞培(pei)養(yang)基(ji)

載脂蛋(dan)白(bai)B-mRNA編輯酶復合(he)物3B抗體(ti)

鈣(gai)調磷(lin)酸酶B亞基(ji)B1抗體(ti)

清(qing)道夫(fu)受(shou)體(ti)B2抗體(ti)

ISLR蛋(dan)白

細(xi)胞分(fen)裂(lie)周(zhou)期蛋白(bai)25B抗體(ti)

X連(lian)鎖(suo)Charcot-Marie-Tooth神(shen)變相關蛋白(bai)抗體(ti)

跨膜(mo)蛋(dan)白16C抗體(ti)

C8166細(xi)胞APC標記(ji)人(ren)CD42b單(dan)克(ke)隆(long)抗體(ti)

鋅指蛋(dan)白(bai)747抗體(ti)

三、培養(yang)註意事項 

1. 收到細(xi)胞後(hou)首先觀(guan)察細(xi)胞瓶是(shi)否完好，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現象，若有(you)上(shang)述(shu)現象 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和我們(men)聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細(xi)胞說(shuo)明(ming)書，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關信息(xi)，如(ru)細(xi)胞形(xing)態、所用培養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例、所需 細(xi)胞因子等(deng)，確(que)保細(xi)胞培(pei)養(yang)條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於培養(yang)條(tiao)件不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞出(chu)現問題，責(ze)任由(you) 客(ke)戶自行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦拭(shi)細(xi)胞瓶表面，顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞狀態。因運(yun)輸(shu)問題，部分(fen)細(xi)胞由(you)於溫(wen)度(du) 變化及(ji)劇(ju)烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是(shi)正常(chang)現象。觀(guan)察好細(xi)胞狀態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置於 37℃培養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可(ke)以消(xiao)化，懸(xuan)浮細(xi)胞直(zhi)接混勻收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接種到新的培(pei)養(yang)瓶或培養(yang)皿(min)中，置於培養(yang)箱(xiang)中進行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相同(tong)條(tiao)件的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用於細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客戶收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)前 3 天(tian)各拍(pai)幾張細(xi)胞照片，記(ji)錄細(xi)胞狀態，便(bian)於和我司(si)技術(shu)部溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由於運(yun)輸(shu)的原因，個別敏(min)感細(xi)胞會出(chu)現不(bu)穩定(ding)的情況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我們(men)聯系，告知(zhi)細(xi)胞 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以便(bian)我們(men)的(de)技術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪直至(zhi)問題解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供(gong)科研使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用的培(pei)養(yang)基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再用來(lai)培養(yang)細(xi)胞，請(qing)換(huan)用按照說(shuo)明(ming)書細(xi)胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件新(xin)配制(zhi)的培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細(xi)胞。     收(shou)到細(xi)胞後(hou)第壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。