SK-MEL-5細胞(bao)

公(gong)司(si)產品僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究使用、不(bu)得(de)用於臨床診(zhen)斷(duan)！

1、細胞(bao)傳(chuan)代：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細胞(bao)回縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液終止消(xiao)化，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞(bao)使之脫落，然後將懸液轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱細胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基重(zhong)懸，然後按 1:2 比例進行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細胞(bao)回縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru)培(pei)養液終

止消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞(bao)使之脫落，然後將懸液轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細胞(bao)凍(dong)存管(guan)放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中(zhong)進行長(chang)期保存。使用(yong)程序(xu)降溫(wen)盒(he)可(ke)直接(jie)放(fang)入-80℃。

壹、商品介(jie)紹(shao)：

二、細胞(bao)培(pei)養操(cao)作

1) 復(fu)蘇細胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存處理(li)僅供參考(kao)，具體(ti)操作步(bu)驟(zhou)以隨貨(huo)產品說(shuo)明(ming)書為主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸液的(de)凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基混合均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後吹勻。然後將所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)含適量培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸液加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第二天(tian)換液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即可進行傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養上(shang)清，用不(bu)含(han)鈣、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液浸(jin)潤所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況而定(ding)），然後在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化情(qing)況，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變(bian)圓並脫落，迅速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養基終止消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打勻後裝(zhuang)入無(wu)菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液後吹勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸液按1:2比例分到新的(de)含(han)8 mL培(pei)養基的(de)新(xin)皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態(tai)良(liang)好(hao)時，可進行細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養液，裝(zhuang)入無(wu)菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上清液，用(yong)PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清細胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞(bao)懸液，註意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管(guan)位置(zhi)以(yi)便下次(ci)拿(na)取(qu)。

三(san)、培(pei)養註意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到細胞(bao)後首先觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否完(wan)好，培(pei)養液是否有(you)漏液、渾濁(zhuo)等現象，若(ruo)有上述(shu)現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和我們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說明書，了(le)解細胞(bao)相關信息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養基、血(xue)清比例、所(suo)需(xu) 細胞(bao)因子等，確保細胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹(yi)致，若由(you)於培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹(yi)致而(er)導(dao)致細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題，責任(ren)由(you) 客戶自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因運輸問題(ti)，部(bu)分細(xi)胞(bao)由於溫(wen)度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破碎(sui)形(xing)成碎片，是正(zheng)常(chang)現象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞(bao)可以消(xiao)化，懸浮細胞(bao)直接(jie)混勻收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的(de)培(pei)養基重(zhong)懸 細胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到新的(de)培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進行培(pei)養。

5. 請(qing)客戶用相同(tong)條(tiao)件的培(pei)養基用(yong)於細胞(bao)培(pei)養。

6. 建議(yi)客戶收(shou)到細胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各拍幾(ji)張細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於和我(wo)司技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由(you)於運輸的原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細胞(bao)會(hui)出(chu)現不(bu)穩(wen)定(ding)的情(qing)況，請及(ji)時和我們聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細胞(bao) 的具體(ti)情況，以便(bian)我(wo)們的(de)技術人員(yuan)跟蹤(zong)回訪直至問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供科(ke)研(yan)使用。

8. 備註：運輸用的(de)培(pei)養基 (灌(guan)液培(pei)養基) 不(bu)能(neng)再用(yong)來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換用(yong)按照(zhao)說(shuo)明書細胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配制的(de)培(pei)養基來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細胞(bao)後第壹次(ci)傳(chuan)代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品：

ELISA 小鼠(shu)粒(li)細(xi)胞(bao)-巨(ju)噬(shi)細胞(bao)集(ji)落刺激(ji)因(yin)子(mouse GM-CSF) 48T/96T 進口(kou)分(fen)裝(zhuang)

Mouse L phenylalanine ammonia lyase (PAL) ELISA Kit 小鼠(shu)L苯(ben)解氨(an)酶(mei)(PAL)ELISA試劑(ji)盒(he)

CLIAKitforLDH(HumanLactateDehydrogenase)ELISAKit人乳(ru)酸脫氫(qing)酶(mei)規(gui)格(ge)：48T/96T

通(tong)用(yong)型N-乙酰(xian)轉(zhuan)移酶(mei)(NAT)活(huo)性高效(xiao)液相層析(xi)法(HPLC)定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)20次(ci)

ELISAKitIFN-γ猴(hou)γ幹(gan)擾素(su)規(gui)格：48T/96T

小鼠(shu)纖(xian)溶抑(yi)制因(yin)子/激活(huo)的纖(xian)溶抑(yi)制物(wu)(TAFI)免疫(yi)試(shi)劑(ji)盒(he) Mouse Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA Kit

粘(zhan)附性大(da)腸桿菌(EAEC)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)(PCR-熒(ying)光(guang)探針(zhen)法) 48T

humanschistosomaELISA試劑(ji)盒(he)人血(xue)吸蟲(schistosoma)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

ELISAKitVCAM-1/CD106小鼠(shu)血(xue)管(guan)內皮細(xi)胞(bao)粘(zhan)附分子1規格(ge)：48T/96T

humancaspase4-apoptosis-relatedcysteinepeptidase,Casp4ELISAKit人哆/哆醇B6激酶(mei)(PDXK)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

大(da)鼠(shu)血(xue)栓(shuan)調(tiao)節蛋白(bai)(TM)ELISA試劑(ji)盒(he) ，英文名： TM ELISA Kit

人肺表(biao)面活(huo)性物(wu)質相關蛋(dan)白(bai)D(SP-D)ELISA檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)HumanPulmonarysurfatca-associatedproteinD,SP-DELISAKit 96T/48T

大(da)鼠(shu)N-乙酰(xian)-β-D-氨(an)基糖(tang)苷(gan)酶(mei)(NAG)免疫(yi)試(shi)劑(ji)盒(he) Rat N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit

CLIAKitforSOD(MouseSuperOxidaseDimase)ELISAKit小鼠(shu)超氧化物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)規(gui)格(ge)：48T/96T

乳(ru)品三(san)聚(ju)胺(an)比色法定(ding)量檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)50次(ci)

腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死因子誘(you)導(dao)蛋白(bai)8樣蛋(dan)白(bai)3/TNFα-IP 8L3抗體(ti)

硫(liu)γ裂解(jie)酶(mei)抗(kang)體(ti)

肉(rou)瘤(liu)抗(kang)原(yuan)1抗體(ti)

MTHFSD蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

線(xian)粒體(ti)復合物(wu)NDUFS3蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

白(bai)細(xi)胞(bao)介素27受體(ti)抗體(ti)

磷酸化Raf激酶(mei)抑(yi)制蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)

SK-MEL-5細胞(bao)CD97抗體(ti)

血型糖(tang)蛋白(bai)A（CD235a）抗(kang)體(ti)