SNU-81細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供科研研究(jiu)使(shi)用、不(bu)得用(yong)於臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品介紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的(de)培養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒(dao)置顯微(wei)鏡下觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液終止消化，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比例(li)進(jin)行分(fen)瓶傳代(dai)，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)培(pei)養箱中培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍存：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的(de)培養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒(dao)置顯微(wei)鏡下觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入(ru)培養液終

止消化，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適量的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置於凍存管中；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍存管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮中進(jin)行長期保(bao)存。使(shi)用程(cheng)序(xu)降(jiang)溫盒可(ke)直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存處理(li)僅(jin)供參考，具(ju)體(ti)操作步驟以(yi)隨貨(huo)產品說明書(shu)為主。將含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍存管在(zai) 37℃水(shui)浴中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍，加4 mL培養基混合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離心(xin)3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基後(hou)吹勻。然後(hou)將所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)含適量培養基的(de)培養瓶中培(pei)養過(guo)夜（或將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基，培養過(guo)夜）。第二天換(huan)液並檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去培養上(shang)清，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂離子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中，使(shi)消化液浸潤所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將培養瓶置於37℃培(pei)養箱中消化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況而定），然(ran)後(hou)在(zai)顯微鏡下觀察(cha)細(xi)胞(bao)消化情(qing)況，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速拿(na)回(hui)操作臺(tai)，輕(qing)敲幾下培養瓶後(hou)加2-3ml培養基終止消化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後(hou)裝入(ru)無菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含8 mL培(pei)養基的(de)新皿(min)中或(huo)者瓶中，置於培(pei)養箱中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行細(xi)胞(bao)凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝入(ru)無菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件下離心(xin)4 min，棄去上清液，用PBS清洗(xi)壹遍，棄盡PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數量加入(ru)無血(xue)清細(xi)胞(bao)凍存液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支(zhi)凍存管凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註(zhu)意凍存管做好(hao)標(biao)識。將凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮灌(guan)儲存。記(ji)錄(lu)凍存管位(wei)置以便(bian)下次(ci)拿(na)取(qu)。

三、培養註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首先觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否完好(hao)，培(pei)養液是(shi)否有漏(lou)液、渾濁(zhuo)等(deng)現象，若有(you)上(shang)述現象 發(fa)生請及時(shi)和我們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說明書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關信(xin)息，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養基、血(xue)清比(bi)例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確保細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若由(you)於培(pei)養條(tiao)件(jian)不(bu)壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於溫(wen)度 變(bian)化及(ji)劇烈碰(peng)亡破碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常現(xian)象。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置於 37℃培(pei)養箱放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消化，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮(xian)的(de)培養基重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培養瓶或培養皿(min)中，置於培(pei)養箱中進(jin)行培養。

5. 請客戶(hu)用相(xiang)同(tong)條(tiao)件的(de)培養基用於細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍幾張細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和我司(si)技術(shu)部(bu)溝通(tong) 交流(liu)。由(you)於運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因(yin)，個(ge)別敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會出現不(bu)穩定的(de)情況，請及時(shi)和我們(men)聯系(xi)，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況，以便(bian)我們(men)的(de)技術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直至(zhi)問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供科研使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培養基 (灌(guan)液培養基) 不(bu)能再用來培養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用按照(zhao)說明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件(jian)新配(pei)制的(de)培養基來培養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個10cm 皿(min)。

公(gong)司(si)正(zheng)在出售(shou)的(de)產品：

Humahyroxine，T4ELISAKit人(ren)甲狀(zhuang)腺(xian)素(su)(T4)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

HumanProteinkinaseA,PKAELISA試(shi)劑(ji)盒(he)人(ren)蛋(dan)白(bai)激酶A(PKA)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

大(da)鼠(shu)別孕烯醇(chun)/3α,5α-四(si)氫孕(yun)(AP/3α,5α-THP)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) ，英(ying)文名： AP/3α,5α-THP ELISA Kit

Mouse alpha glucosidase (alpha -glucosidase) ELISA Kit 小(xiao)鼠(shu)α糖苷(gan)酶(α-glucosidase)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

ELISA 小鼠(shu)雕亡(wang)相關因(yin)子(zi)(mouse Fas) 48T/96T 進(jin)口分(fen)裝

ELISAKitomein小鼠(shu)網膜素(su)規(gui)格：48T/96T

HumanBonemorphogeneticprotein7,BMP-7ELISAKit人(ren)骨成(cheng)型(xing)蛋(dan)白(bai)7(BMP-7)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

人(ren)內臟(zang)脂(zhi)肪特異性絲(si)酸抑制劑(ji)(vaspin)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) 96T/48T 試(shi)劑(ji)盒(he) 組裝/原(yuan)裝

小鼠(shu)(FE)免疫(yi)試(shi)劑(ji)盒(he) Mouse ferritin,FE ELISA Kit

轉基因(yin)植(zhi)物EPSPS基因(yin)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he) 48T

CLIAKitforSK(HumanSeptokinase)ELISAKit人(ren)鏈激酶規格：48T/96T

沙門(men)氏(shi)菌(Salmonella)鑒(jian)定16SrDNAPCR擴增(zeng)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)20次(ci)

ELISAKitALK人(ren)間變(bian)性淋(lin)巴瘤激酶規格：48T/96T

大(da)鼠(shu)血(xue)管(guan)生成(cheng)素(su)受體Tie1(ANG-R-Tie1)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) 96T/48T 試(shi)劑(ji)盒(he) 組裝/原(yuan)裝

人(ren)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)信(xin)號(hao)轉導抑制因(yin)子(zi)3(SOCS-3)免(mian)疫(yi)試(shi)劑(ji)盒(he) Human SOCS-3 ELISA Kit

重組非洲(zhou)豬(zhu)瘟(wen)p72蛋(dan)白(bai)

過(guo)氧化物酶-2單(dan)克隆(long)抗(kang)體

乳腺腫瘤自(zi)身(shen)抗(kang)原(yuan)LMO4重(zhong)組(zu)兔(tu)單(dan)克隆(long)抗(kang)體

NADPH氧化酶活化(hua)蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體

線粒體(ti)核糖(tang)體蛋(dan)白(bai)S18C抗(kang)體

半(ban)胺(an)酸蛋(dan)白(bai)-12抗(kang)體

磷酸化白(bai)介素(su)-1受體相關激酶1抗(kang)體

SNU-81細(xi)胞(bao)COREST蛋(dan)白(bai)抗(kang)體

巖藻(zao)糖(tang)轉(zhuan)移酶1抗(kang)體