TC-YIK細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使用、不(bu)得用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

壹、商(shang)品(pin)介(jie)紹：

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置顯微鏡下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓後加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸液轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重懸，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例進行(xing)分(fen)瓶傳代(dai)，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置顯微鏡下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓後加入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸液轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並放置於凍(dong)存(cun)管中；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管放置於-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉入(ru)液氮中進(jin)行(xing)長期(qi)保存。使用程(cheng)序降溫(wen)盒(he)可(ke)直接放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理僅(jin)供(gong)參考(kao)，具體(ti)操作(zuo)步驟以(yi)隨貨產品(pin)說(shuo)明(ming)書為(wei)主。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液的凍(dong)存(cun)管在 37℃水浴中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合均勻(yun)。在1000 rpm條件下離(li)心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸液加入(ru)含(han)適量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第二天(tian)換液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如果(guo)細(xi)胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂離子的(de)PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化液浸(jin)潤(run)所有細(xi)胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶置於37℃培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然後在顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作臺，輕(qing)敲幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸液按(an)1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新皿中或(huo)者瓶中，置於培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好時，可(ke)進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶為例；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹遍，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計數。

b、根(gen)據細(xi)胞(bao)數量(liang)加入(ru)無(wu)血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管做好標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入(ru)液氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管位置以(yi)便(bian)下(xia)次拿(na)取。

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後首先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是否(fou)完(wan)好，培(pei)養(yang)液是否(fou)有漏液、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有上述(shu)現(xian)象 發(fa)生請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說明(ming)書，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相關信息，如細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所用培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比例、所需 細(xi)胞(bao)因子等，確保細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於培(pei)養(yang)條(tiao)件不壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現(xian)問題，責(ze)任(ren)由(you) 客戶(hu)自(zi)行(xing)承擔。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶表面，顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸問題，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈碰(peng)亡破碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片，是正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶壁將 T25 瓶置於 37℃培(pei)養(yang)箱放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直接混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮的培(pei)養(yang)基(ji)重懸 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中，置於培(pei)養(yang)箱中進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同(tong)條件的培(pei)養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司(si)技術(shu)部(bu)溝通 交流(liu)。由(you)於運(yun)輸的原因(yin)，個別敏感細(xi)胞(bao)會出(chu)現(xian)不穩定的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們的技術(shu)人員跟(gen)蹤回(hui)訪直至問題解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌液培(pei)養(yang)基(ji)) 不能再用來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換用按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件新配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後第(di)壹次(ci)傳代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公(gong)司(si)正(zheng)在出售(shou)的產品(pin)：

Alpha lactalbumin alpha lactalbumin (alpha -La) ELISA Kit α乳清(qing)蛋(dan)白α乳清(qing)蛋(dan)白(α-La)ELISA試劑盒(he)

大鼠半(ban)乳凝素8(GAL8)ELISA試劑盒(he) ，英文(wen)名： GAL8 ELISA Kit

Hamstermaixmetalloproteinase9/GelatinaseB,MMP-9ELISAK 倉(cang)鼠基質(zhi)金(jin)屬(shu)9/明(ming)膠酶(mei)B(MMP-9/GelatinaseB)ELISA試劑盒(he) 96T/48T 進口(kou)分(fen)裝

CLIAKitforColIV(HumanCollageypeIV)ELISAKIT人Ⅳ型膠原規(gui)格(ge)：48T/96T

細(xi)胞(bao)乙酰(xian)羧化酶(mei)(ACETYL-COACARBOXYLASE)活性比(bi)色法定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)20次

人繆勒管抑(yi)制(zhi)物質(zhi)/抗繆(mou)勒管激素(MIS/AMH)ELISA 試劑盒(he) 96T/48T 試劑盒(he) 組裝/原裝

小(xiao)鼠胎(tai)球(qiu)蛋(dan)白A(Fetuin A)免疫試劑盒(he) Mouse Fetuin A ELISA Kit

羊特(te)定(ding)基因序列(lie)(Ovine)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)(PCR-熒光探針(zhen)法) 48T

Humansorbitoldehydrogenase,SDHELISA試劑盒(he)人脫(tuo)氫(qing)酶(mei)(SDH)ELISA試劑盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

ELISAKitCA小(xiao)鼠酶(mei)規(gui)格(ge)：48T/96T

ELISAKitAFP人甲種胎兒(er)球(qiu)蛋(dan)白/甲胎(tai)蛋(dan)白規(gui)格(ge)：48T/96T

大鼠血管內皮(pi)細(xi)胞(bao)生長(chang)因(yin)子B(VEGF-B)ELISA 試劑盒(he) 96T/48T 試劑盒(he) 組裝/原裝

人氧化酶(mei)Ⅵα亞(ya)基多(duo)肽1(COX6A1)免疫試劑盒(he) Human cytochrome c oxidase subunit VIa polypeptide 1,COX6A1 ELISA kit

谷酸合成(cheng)酶(mei)(GOGAT)測試盒(he) 紫(zi)外(wai)分(fen)光光度法 50管/48樣(yang)

RatOncostatin-M,OSMELISA試劑盒(he)大鼠抑(yi)瘤素M(OSM)ELISA試劑盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

周期(qi)素D3兔(tu)單(dan)克隆(long)抗體(ti)

海(hai)鰓海(hai)腎(shen)螢(ying)光素酶(mei)重組兔(tu)單(dan)克隆(long)抗體(ti)

三核苷(gan)酸重復蛋(dan)白6B抗體(ti)

NDFIP2抗體(ti)

線粒(li)體(ti)硫氧還蛋(dan)白2抗體(ti)

半乳糖凝集素相關蛋(dan)白GRP抗體(ti)

磷酸化腸(chang)道內富含(han)的(de)Kruppel樣(yang)因子5抗體(ti)

TC-YIK細(xi)胞(bao)CTDSPL2蛋(dan)白抗(kang)體(ti)

氧固醇(chun)結(jie)合蛋(dan)白樣(yang)5抗體(ti)