YD-10B細(xi)胞(bao)

公(gong)司產(chan)品僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不得用於(yu)臨床診(zhen)斷！

壹、商品介(jie)紹：

1、細胞傳代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微鏡下(xia)觀(guan)察，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止消化(hua)，再(zai)輕輕吹打(da)細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱細胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行分(fen)瓶(ping)傳代，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微鏡下(xia)觀(guan)察，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止消化(hua)，輕輕吹打(da)細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並放置(zhi)於凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先將(jiang)細胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉入(ru)液氮(dan)中進(jin)行長(chang)期(qi)保存。使(shi)用程(cheng)序(xu)降溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復(fu)蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理僅(jin)供參(can)考(kao)，具(ju)體操作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品說(shuo)明書(shu)為(wei)主。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心3 min，棄去(qu)上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將所(suo)有(you)細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適量培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第二天(tian)換液並檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如(ru)果細胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上清，用不含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液浸潤(run)所有(you)細胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中消化(hua)1-2 min（視細胞情況(kuang)而定），然(ran)後(hou)在顯微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細胞大部(bu)分變(bian)圓並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止消化(hua)。輕輕打勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細胞(bao)生長(chang)狀態(tai)良(liang)好時(shi)，可(ke)進(jin)行細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細胞(bao)及細胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心4 min，棄去(qu)上清液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數量加(jia)入(ru)無血(xue)清細胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細胞懸液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管(guan)做好標識(shi)。將凍(dong)存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位置(zhi)以(yi)便(bian)下次拿(na)取。

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好，培(pei)養(yang)液是(shi)否有漏液(ye)、渾濁等(deng)現象(xiang)，若有上述(shu)現象(xiang) 發(fa)生請及時(shi)和(he)我(wo)們聯系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書(shu)，了解細胞(bao)相關(guan)信息，如(ru)細(xi)胞形(xing)態(tai)、所用培(pei)養(yang)基、血(xue)清比例、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確保細胞培(pei)養(yang)條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若由於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件不壹致而導致細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，責(ze)任由 客(ke)戶(hu)自(zi)行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因運(yun)輸問(wen)題(ti)，部(bu)分細(xi)胞(bao)由於(yu)溫度 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈碰亡破碎形(xing)成碎(sui)片，是(shi)正常現象(xiang)。觀(guan)察好細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可以(yi)消化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養(yang)基重(zhong)懸 細(xi)胞(bao)，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中進(jin)行培(pei)養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用相(xiang)同條(tiao)件的(de)培(pei)養(yang)基用於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建議客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張細胞(bao)照片，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於(yu)和我(wo)司技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運(yun)輸的原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感細(xi)胞會(hui)出(chu)現不穩定的(de)情況(kuang)，請(qing)及時(shi)和(he)我(wo)們聯系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的(de)具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便(bian)我們的技術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基) 不能再(zai)用來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換用按(an)照說明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件新(xin)配(pei)制的培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公司正在出售(shou)的產(chan)品：

通用型番茄瘡(chuang)痂(jia)病(bing)辣(la)椒(jiao)斑點病菌(Xahomonascampesispv.vesicatoria;Xcv)試(shi)劑(ji)盒(he)20次

CLIAKitforIRF(HumanierferoegulatoryFactor)ELISAKit人(ren)幹擾素調節(jie)因子(zi)規(gui)格：48T/96T

NGAL大鼠(shu)中性粒細(xi)胞明(ming)膠(jiao)酶(mei)相(xiang)關(guan)脂(zhi)質運(yun)載蛋白規(gui)格：48T/96T

大鼠(shu)白三烯(xi)E4(LTE4)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) 96T/48T 試(shi)劑(ji)盒(he) 組(zu)裝(zhuang)/原裝

人卵泡(pao)抑(yi)素(FS)免(mian)疫(yi)試(shi)劑(ji)盒(he) Human Follistatin,FS ELISA Kit

Humaarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISA試(shi)劑(ji)盒(he)人抗(kang)酸(suan)性0酸酶(mei)5b(ACP-5b)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

ELISAKi-3小鼠(shu)神經(jing)營(ying)養(yang)因(yin)子(zi)3規(gui)格：48T/96T

Humanargininevasopressin,AVPELISAKit人(ren)精(jing)加(jia)壓素(AVP)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

人(ren)螺(luo)旋(xuan)肽(tai)(Helical Peptide)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) 96T/48T 試(shi)劑(ji)盒(he) 組(zu)裝(zhuang)/原裝

小鼠(shu)(SS)免(mian)疫(yi)試(shi)劑(ji)盒(he) Mouse Somatostatin,SS ELISA Kit

大鼠(shu)CD44分(fen)子(zi)(CD44)免(mian)疫(yi)試(shi)劑(ji)盒(he) Rat cluster Of differeiation,CD44 ELISA Kit

CLIAKitforSE(Humanstaphylococcusaureuseerotoxins)ELISAKit人(ren)金(jin)葡菌腸毒素規(gui)格：48T/96T

素真(zhen)菌(jun)/酵(jiao)母(mu)細胞(bao)蛋白結合(he)凝膠(jiao)遷移電(dian)泳分析(xi)試(shi)劑(ji)盒(he)20次

ELISAKitCKMB人(ren)激動異構酶/細(xi)胞(bao)分(fen)裂素MB規(gui)格：48T/96T

大鼠(shu)血(xue)管(guan)緊張素(1-7)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) 96T/48T 試(shi)劑(ji)盒(he) 組(zu)裝(zhuang)/原裝

周(zhou)期素依(yi)賴(lai)性激酶7重(zhong)組(zu)兔(tu)單克隆(long)抗體(ti)

荷(he)爾(er)蒙敏(min)感脂(zhi)肪酶(mei)抗(kang)體

三羧酸載體(ti)蛋白SFXN1抗體

NF-kappa-B抑(yi)制(zhi)子(zi)epsilon抗(kang)體(ti)

腺(xian)病毒(du)六(liu)鄰體(ti)蛋白抗體(ti)

胞(bao)漿支鏈(lian)氨(an)基(ji)酸(suan)酸轉氨(an)酶(mei)抗(kang)體

磷酸化(hua)蛋白激酶C(T500)抗(kang)體(ti)

YD-10B細胞C型凝集(ji)素4家族(zu)E抗(kang)體(ti)

液泡(pao)蛋白分選(xuan)蛋白VPS13A抗體(ti)