YMB-1細(xi)胞

公(gong)司產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研研究使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於臨(lin)床診斷！

壹、商品(pin)介紹(shao)：

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕(qing)輕吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重(zhong)懸，然(ran)後按(an) 1:2 比例進行分(fen)瓶傳(chuan)代，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)培(pei)養箱中培(pei)養；

2、細胞(bao)凍存：

1）細胞(bao)生長(chang)至覆蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化，輕(qing)輕吹(chui)打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適量(liang)的凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將細胞(bao)凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮中進行長(chang)期保(bao)存。使用(yong)程(cheng)序(xu)降(jiang)溫(wen)盒(he)可直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養操作

1) 復(fu)蘇細胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存(cun)處理僅(jin)供(gong)參(can)考，具(ju)體操作步(bu)驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產品(pin)說明(ming)書為(wei)主(zhu)。將含有1 mL細(xi)胞懸液(ye)的凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅速(su)搖(yao)晃解(jie)凍，加4 mL培(pei)養基混(hun)合均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心3 min，棄去上清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹勻。然(ran)後將(jiang)所有細胞懸液(ye)加入(ru)含適量(liang)培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶中培(pei)養過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第二(er)天(tian)換液(ye)並(bing)檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄去培(pei)養上清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣、鎂(mei)離子的PBS潤洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中，使消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所有細胞，將培(pei)養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情(qing)況而(er)定(ding)），然(ran)後在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化情(qing)況，若細(xi)胞大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓並(bing)脫落(luo)，迅速(su)拿(na)回操作臺，輕敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養基終止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕打勻後裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心管(guan)中，1000 rpm離心5 min，棄去上清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按1:2比(bi)例分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養基的(de)新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中培(pei)養。 3) 細胞(bao)凍存：待細(xi)胞生長(chang)狀態良好(hao)時(shi)，可(ke)進行細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集細胞及細(xi)胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝入(ru)無菌(jun)離心管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心4 min，棄去上清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍，棄盡PBS，進行細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據細(xi)胞(bao)數量(liang)加入(ru)無血(xue)清細(xi)胞凍(dong)存液(ye)，使細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每支凍存管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做好(hao)標(biao)識(shi)。將凍存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液(ye)氮灌儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取(qu)。

三、培(pei)養註(zhu)意(yi)事(shi)項 

1. 收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀察細(xi)胞(bao)瓶是否完(wan)好(hao)，培(pei)養液(ye)是否有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們聯系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細胞相(xiang)關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培(pei)養基、血(xue)清比(bi)例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因子等，確(que)保(bao)細胞培(pei)養條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現問(wen)題，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態。因運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分(fen)細胞由於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰亡破碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮細(xi)胞直接混(hun)勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新鮮的(de)培(pei)養基重(zhong)懸 細(xi)胞，並(bing)接種到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中進行培(pei)養。

5. 請(qing)客戶用(yong)相(xiang)同條(tiao)件的(de)培(pei)養基用(yong)於細(xi)胞培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客戶收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各拍(pai)幾張細(xi)胞照片，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀態(tai)，便於和(he)我(wo)司技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由(you)於運(yun)輸(shu)的原因，個別敏(min)感(gan)細胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩定(ding)的(de)情(qing)況，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們聯系，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具(ju)體情(qing)況，以便(bian)我們(men)的(de)技(ji)術人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤回訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題解(jie)決。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供(gong)科(ke)研使用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的培(pei)養基 (灌液(ye)培(pei)養基) 不(bu)能再(zai)用(yong)來培(pei)養細胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按照說明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配(pei)制的培(pei)養基來培(pei)養細胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。

公(gong)司正(zheng)在出售的產(chan)品(pin)：

石(shi)蠟(la)切片組(zu)織GSK-3BETA蛋(dan)白(bai)表達NBT顯色(se)光(guang)學(xue)顯微鏡(jing)檢測(ce)試劑盒(he)10/20次(ci)

Mouseβ-galactosidase,βGALELISAKit小鼠(shu)β半(ban)乳(ru)糖(tang)苷(gan)酶(mei)(βGAL)ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

HumanProteoglycan,PGELISA試劑盒(he)人(ren)蛋白(bai)聚(ju)糖(tang)(PG)ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

HumaNFαconveingenzyme,TACEELISAKit人(ren)壞(huai)死(si)因子α轉化酶(mei)(TACE)ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

大(da)鼠(shu)白三(san)烯D4(LTD4)ELISA試劑盒(he) ，英(ying)文(wen)名(ming)： LTD4 ELISA Kit

番(fan)茄(qie)特(te)定(ding)基因序列(lie)(PG)檢測(ce)試劑盒(he) 48T

Huma-cellacelymphoblasticleukemiaaigen,TALLA-1ELISA試劑盒(he)人(ren)T細(xi)胞(bao)急(ji)性淋巴(ba)母細胞白(bai)血(xue)病(bing)相(xiang)關(guan)抗原(TALLA-1/CD231)ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

ELISAKitNSE小鼠(shu)神(shen)經特(te)異性烯醇(chun)化(hua)酶(mei)規格(ge)：48T/96T

HumanArginase,ArgELISAKit人(ren)精酶(mei)(Arg)ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

人(ren)輪(lun)狀(zhuang)病(bing)毒抗原(RV Ag)ELISA 試劑盒(he) 96T/48T 試劑盒(he) 組(zu)裝(zhuang)/原裝

人(ren)細胞(bao)角(jiao)蛋白(bai)18(CK-18)免(mian)疫(yi)試劑盒(he) Human CK-18 ELISA Kit

谷(gu)酰胺(an)合(he)成酶(mei)(GS)測(ce)試盒(he) 可(ke)見分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法(fa) 50管(guan)/24樣

RatovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISA試劑盒(he)大鼠(shu)卵(luan)清(qing)蛋(dan)白(bai)特(te)異性IgE(OVAsIgE)ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

humanHypotheticalproteinLOC677168ELISA試劑盒(he)人(ren)假定(ding)蛋(dan)白(bai)LOC677168ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

Humanmailysin,MATELISAKit人(ren)基質裂(lie)解(jie)蛋白/基質溶(rong)素(su)(MAT)ELISA試劑盒(he)規格(ge)：96T/48T

周(zhou)期素(su)依賴性激(ji)酶(mei)8抗體

核(he)DNA結(jie)合(he)蛋(dan)白C1D抗體

三(san)羧(suo)酸(suan)載(zai)體樣蛋白3抗體

NFKB激(ji)活蛋(dan)白1抗體

腺(xian)病(bing)毒早(zao)期E1A蛋(dan)白(bai)抗體

胞(bao)脫氨(an)酶(mei)抗體

磷(lin)酸(suan)化(hua)蛋(dan)白(bai)激(ji)酶(mei)C/p-PKC ε抗體

YMB-1細胞C型凝集素結構(gou)域(yu)家族12成(cheng)員(yuan)A抗體

液(ye)泡蛋(dan)白分(fen)選受體SORCS2抗體