NCI-H661細(xi)胞

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供(gong)科研研究(jiu)使(shi)用、不得用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷！

壹(yi)、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞回縮(suo)變圓後加入 5ml 培(pei)養

液終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然後將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞回縮(suo)變圓後加入培(pei)養液終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然後將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍(dong)存管放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其(qi)移入-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)中(zhong)進(jin)行長(chang)期保存。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫盒(he)可直(zhi)接放入-80℃。

二、細(xi)胞培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下(xia)細(xi)胞培(pei)養凍(dong)存處(chu)理僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具體(ti)操(cao)作步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產品說(shuo)明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存管在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅速(su)搖晃解凍(dong)，加4 mL培(pei)養基(ji)混合均勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心3 min，棄去上清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹勻。然後(hou)將(jiang)所(suo)有細(xi)胞懸(xuan)液加入含適(shi)量(liang)培(pei)養基(ji)的(de)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液加入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜）。第(di)二天換(huan)液並檢查(zha)細(xi)胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細(xi)胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養上(shang)清(qing)，用不含鈣(gai)、鎂離子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸潤(run)所(suo)有細(xi)胞，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情況而定），然後(hou)在(zai)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情況，若細(xi)胞大(da)部分(fen)變圓並脫落，迅速拿回操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻後裝(zhuang)入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液後吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新(xin)皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待細(xi)胞生長狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時，可進(jin)行細(xi)胞凍(dong)存。下面 T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心4 min，棄去上清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄盡PBS，進(jin)行細(xi)胞計數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞數(shu)量(liang)加入無血清(qing)細(xi)胞凍(dong)存液，使(shi)細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每(mei)支凍(dong)存管凍(dong)存1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註(zhu)意凍(dong)存管做(zuo)好(hao)標識。將(jiang)凍(dong)存管放入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管位置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取。

公(gong)司(si)正在出售的(de)產(chan)品：

組(zu)織樣(yang)品組(zu)織S（CATHEPSIN S）活性(xing)熒光(guang)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

載(zai)玻片細(xi)胞組(zu)蛋(dan)白(bai)熒光顯(xian)微鏡檢測(ce)試(shi)劑盒

pGEX＋目的(de)基(ji)因

石(shi)蠟(la)切(qie)片組(zu)織(zhi)CYTOCHROME C蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)NBT顯(xian)色光學顯微鏡檢測(ce)試(shi)劑盒

組(zu)織O鏈接硫(liu)酸酯化(hua)糖(tang)胺(an)多糖(tang)（O-sGAG）含量(liang)阿爾(er)新(xin)藍(lan)（alcian blue）比(bi)色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

胞(bao)漿(jiang)超氧(yang)化物歧(qi)化(hua)酶（Cu/Zn SOD）分(fen)離試(shi)劑盒

總活性(xing)酶連續循(xun)環比(bi)色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

C1-ESTERASE

細(xi)胞甘肽合成酶活性(xing)比(bi)色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

通用型(xing)EBV（EPSTEIN-BARR）病(bing)毒定(ding)量(liang)PCR擴(kuo)增檢測(ce)試(shi)劑盒

石(shi)蠟(la)切(qie)片組(zu)織(zhi)CASPASE-2蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)熒光(guang)顯(xian)微鏡檢測(ce)試(shi)劑盒

乳(ru)制品尿(niao)素(su)比(bi)色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

細(xi)胞免疫(yi)熒(ying)光(guang)顯(xian)微鏡間(jian)接檢測(ce)試(shi)劑盒（含熒(ying)光(guang)二抗(kang)）

組(zu)織ROCK-II激酶活性(xing)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒（A/B/C）

BrdU標記(ji)法(fa)組織(zhi)冰凍(dong)切(qie)片細(xi)胞繁(fan)殖(zhi)熒光(guang)顯(xian)微鏡檢測(ce)試(shi)劑盒

中(zhong)心體(ti)蛋(dan)白(bai)63抗(kang)體(ti)

酰(xian)胺(an)水解酶抗體(ti)

溶(rong)質(zhi)載(zai)體(ti)家(jia)族(zu)22成(cheng)員(yuan)13抗(kang)體(ti)

MCEE蛋(dan)白(bai)抗體(ti)

細(xi)胞周(zhou)期後期促進(jin)蛋(dan)白(bai)亞(ya)基(ji)10抗(kang)體(ti)

白(bai)蛋(dan)白(bai)（內參(can)）單克隆(long)抗(kang)體(ti)

磷(lin)酸化CD156b抗(kang)體(ti)

NCI-H661細(xi)胞CD23/FcεRII抗(kang)體(ti)

血(xue)管(guan)緊(jin)張(zhang)素(su)轉(zhuan)換(huan)酶ACE1抗體(ti)

三(san)、培(pei)養註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)首(shou)先(xian)觀察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否完(wan)好(hao)，培(pei)養液是(shi)否有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象，若有上述(shu)現象 發(fa)生請及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解細(xi)胞相關信(xin)息，如(ru)細(xi)胞形態、所(suo)用培(pei)養基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需 細(xi)胞因(yin)子等，確(que)保細(xi)胞培(pei)養條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若由(you)於(yu)培(pei)養條(tiao)件(jian)不壹致而導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現問(wen)題，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面，顯微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸問(wen)題，部分(fen)細(xi)胞由(you)於(yu)溫度 變化及劇烈(lie)碰亡破碎形成碎片，是(shi)正常現象。觀察好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接混勻收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養基(ji)重懸 細(xi)胞，並(bing)接種到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)進(jin)行培(pei)養。

5. 請客(ke)戶(hu)用相同條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養基(ji)用於(yu)細(xi)胞培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司技(ji)術部溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸的(de)原因(yin)，個(ge)別敏感(gan)細(xi)胞會(hui)出現不穩定的(de)情況，請及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告(gao)知細(xi)胞 的(de)具體(ti)情況，以便(bian)我(wo)們(men)的(de)技(ji)術(shu)人員(yuan)跟蹤回訪(fang)直(zhi)至問題解決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供(gong)科研使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培(pei)養基(ji) (灌(guan)液培(pei)養基(ji)) 不能(neng)再用來(lai)培(pei)養細(xi)胞，請換(huan)用按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)細(xi)胞培(pei) 養條(tiao)件(jian)新(xin)配制的(de)培(pei)養基(ji)來培(pei)養細(xi)胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)第(di)壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。