NCI-H647細(xi)胞(bao)

公司(si)產(chan)品僅(jin)供科(ke)研研究使用、不(bu)得用於臨(lin)床診斷(duan)！

壹(yi)、商品介紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液(ye)終止(zhi)消化，再輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後按 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分瓶傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養液(ye)終

止(zhi)消化，輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉入液(ye)氮中(zhong)進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使用程序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作

1) 復(fu)蘇細(xi)胞(bao)：以下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存(cun)處理(li)僅(jin)供參(can)考，具體(ti)操作步驟以隨貨(huo)產品說明(ming)書(shu)為主。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上清液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養基(ji)的培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過(guo)夜（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜）。第二天換(huan)液(ye)並檢(jian)查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養上清，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中(zhong)，使消化液(ye)浸潤所有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分變圓並脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿回(hui)操作臺，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。輕輕打(da)勻後(hou)裝(zhuang)入無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)按1:2比例(li)分到(dao)新(xin)的含8 mL培(pei)養基(ji)的新皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態良(liang)好時(shi)，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝入無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上清液(ye)，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計數。

b、根據細(xi)胞(bao)數量(liang)加(jia)入(ru)無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管(guan)做好標識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放入-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液(ye)氮灌儲(chu)存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管(guan)位置(zhi)以(yi)便下次(ci)拿取。

公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產品：

細(xi)胞(bao)組織S（CATHEPSIN S）活(huo)性熒光定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

細(xi)胞(bao)組蛋(dan)白(bai)流(liu)式細(xi)胞(bao)儀檢測(ce)試劑盒(he)

pLKO.1-TRC＋siRNA

冰凍(dong)切(qie)片組(zu)織CYTOCHROME C蛋白(bai)表達NBT顯色(se)光學顯微(wei)鏡檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

細(xi)胞(bao)O鏈接(jie)硫(liu)酸酯(zhi)化糖(tang)胺多糖(tang)（O-sGAG）含量(liang)阿(e)爾新藍(lan)（alcian blue）比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

超氧化物(wu)歧(qi)化酶(mei)（SOD）活(huo)性酶(mei)動(dong)力比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)（含標準(zhun)樣）

細(xi)胞(bao)脂(zhi)酰合成酶(mei)（ACYL COA SYNTHETASE）

組織（THROMBIN）活(huo)性熒光定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

植物(wu)甘(gan)肽還(hai)原(yuan)酶(mei)活(huo)性比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

體(ti)液(ye)EBV（EPSTEIN-BARR）病毒(du)定(ding)性檢測(ce)試劑盒(he)

冰凍(dong)切(qie)片組(zu)織CASPASE-2蛋白(bai)表達熒光顯微(wei)鏡檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

飲料(liao)尿素比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

細(xi)胞(bao)免疫(yi)熒光顯微(wei)鏡基(ji)礎(chu)檢測(ce)試劑盒(he)（無壹(yi)抗(kang)和二抗(kang)）

細(xi)胞(bao)ROCK-II激(ji)酶(mei)活(huo)性定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)（A/B/C）

BrdU標記法(fa)載玻(bo)片(pian)細(xi)胞(bao)繁殖(zhi)熒光顯微(wei)鏡檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

中(zhong)心體(ti)蛋白(bai)55kDa抗(kang)體(ti)

酰胺(an)水(shui)解酶(mei)GLS2單克隆抗(kang)體(ti)

溶(rong)質載體(ti)家(jia)族(zu)22成員10抗(kang)體(ti)

MCCC2蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

細(xi)胞(bao)周(zhou)期(qi)蛋白(bai)依賴性激(ji)酶(mei)抑(yi)制劑2D抗(kang)體(ti)

巴爾得-別德(de)爾綜(zong)合征相(xiang)關蛋(dan)白(bai)9抗(kang)體(ti)

磷酸化CBX5抗(kang)體(ti)

NCI-H647細(xi)胞(bao)CD23/FcεRII單克隆抗(kang)體(ti)

血管(guan)緊(jin)張(zhang)素(su)轉(zhuan)換(huan)酶(mei)2抗(kang)體(ti)

三、培(pei)養註(zhu)意事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完好，培(pei)養液(ye)是(shi)否(fou)有漏(lou)液(ye)、渾濁等(deng)現(xian)象，若有上述現(xian)象 發(fa)生(sheng)請及時(shi)和我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說明(ming)書(shu)，了(le)解細(xi)胞(bao)相(xiang)關信息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態、所用培(pei)養基(ji)、血(xue)清比例(li)、所需 細(xi)胞(bao)因子等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題，責(ze)任由(you) 客戶自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xi)胞(bao)瓶表面，顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀態。因(yin)運輸問(wen)題，部(bu)分細(xi)胞(bao)由於(yu)溫(wen)度(du) 變化及(ji)劇烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常現(xian)象。觀察(cha)好細(xi)胞(bao)狀態後(hou)，75%酒精消毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可以(yi)消化，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混(hun)勻收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮的培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養。

5. 請客(ke)戶用相(xiang)同條(tiao)件的培(pei)養基(ji)用於細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議(yi)客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照片(pian)，記錄細(xi)胞(bao)狀態，便於和我司(si)技術部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由於(yu)運(yun)輸的原(yuan)因(yin)，個別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出現(xian)不(bu)穩定(ding)的情(qing)況，請(qing)及(ji)時(shi)和我們聯(lian)系(xi)，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的具體(ti)情(qing)況，以(yi)便我們(men)的技術人(ren)員跟蹤回訪(fang)直(zhi)至問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供科(ke)研使用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的培(pei)養基(ji) (灌(guan)液(ye)培(pei)養基(ji)) 不(bu)能再用來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新配制的培(pei)養基(ji)來培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。