NCI-H2009細胞(bao)

公(gong)司產(chan)品(pin)僅供科研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得用於臨床(chuang)診斷！

壹(yi)、商品(pin)介紹：

1、細胞(bao)傳代(dai)：

1）細胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下觀察，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後加入(ru) 5ml 培(pei)養

液終止消(xiao)化，再輕輕吹打細胞(bao)使之脫落，然後將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分瓶傳(chuan)代(dai)，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細胞(bao)凍存(cun)：

1）細胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下觀察，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後加入(ru)培(pei)養液終

止消(xiao)化，輕輕吹打細胞(bao)使之脫落，然後將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於凍存(cun)管中(zhong)；

4）先將(jiang)細胞(bao)凍存(cun)管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉入(ru)液(ye)氮(dan)中進(jin)行長(chang)期保(bao)存(cun)。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫盒(he)可直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞(bao)培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理僅供參考，具(ju)體操(cao)作步驟(zhou)以隨貨產品說明(ming)書(shu)為(wei)主。將(jiang)含(han)有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍存(cun)管在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養基混(hun)合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養基後吹勻(yun)。然後將(jiang)所有細胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)含(han)適量(liang)培(pei)養基的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培養過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培養(yang)過夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並檢(jian)查細胞(bao)密度(du)。

2) 細胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果細胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中，使消(xiao)化液浸(jin)潤所有細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於37℃培養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視細胞(bao)情況(kuang)而定(ding)），然後在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下觀察細胞(bao)消化情況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分變圓並脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿回(hui)操(cao)作臺，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養基終止消(xiao)化。輕輕打勻後裝入(ru)無(wu)菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養液後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養基的(de)新(xin)皿(min)中或(huo)者瓶中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細胞(bao)生長(chang)狀態良好時(shi)，可進(jin)行細胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集細胞(bao)及細胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細胞(bao)數(shu)量(liang)加入(ru)無(wu)血清細胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使細胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍存(cun)管做(zuo)好標識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管位(wei)置(zhi)以便下(xia)次(ci)拿取(qu)。

公(gong)司正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：

血液(ye)對氧(yang)磷酶1（PON1）芳酯酶活(huo)性比(bi)色(se)法定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

特(te)定(ding)微型(xing)RNA（miRNA）擴增(zeng)引物(wu)合(he)成

蘭花(hua)Lndeman培養(yang)基

JNK/SAPK蛋白(bai)表(biao)達西方(fang)雜(za)交(jiao)分析試劑盒

通用型(xing)密執(zhi)安(an)棒狀桿(gan)菌壞腐(fu)亞種(zhong)（Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus；Cms）基因(yin)檢(jian)測(ce)試劑盒

體液(ye)D-糖激酶法定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

血液(ye)結合(he)（酯化）酶連(lian)續循環(huan)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

組(zu)織樣品組(zu)織型(xing)纖維(wei)蛋白(bai)溶酶原(yuan)激活(huo)劑（tPA）活(huo)性化學發(fa)光(guang)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

血液(ye)還原(yuan)型(xing)甘(gan)肽（GSH）濃(nong)度(du)熒光(guang)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

細菌抗生素(su)（青(qing)）敏感性DISC彌散(san)（KIRBY-BAUER）檢(jian)測(ce)試劑盒

石蠟切(qie)片組(zu)織BAX蛋白(bai)表(biao)達NBT顯(xian)色光(guang)學(xue)顯(xian)微鏡(jing)檢(jian)測(ce)試劑盒

果菜(cai)類(lei)植(zhi)酸(suan)比(bi)色(se)法定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

通用型(xing)基因(yin)甲(jia)基化程(cheng)度(du)定量(liang)分析試劑盒

細胞(bao)PKCδ激酶活(huo)性定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒（A/B/C）

通用型(xing)細胞(bao)周(zhou)期流式細胞(bao)分析試劑盒

致死(si)因(yin)子惡(e)性腦(nao)瘤(liu)樣蛋白(bai)1抗體(ti)

谷(gu)受體(ti)2D抗體(ti)

溶血磷脂酸受體(ti)蛋白(bai)3/EDG7抗體(ti)

MAMSTR蛋白(bai)抗(kang)體

細胞(bao)質多(duo)聚(ju)腺(xian)苷酸結合(he)蛋白(bai)3抗體(ti)

氨(an)基己糖苷酶D抗體(ti)

磷酸化µ-型(xing)阿(e)片受體(ti)抗(kang)體

NCI-H2009細胞(bao)CCZ1蛋白(bai)抗(kang)體

選(xuan)擇(ze)性剪(jian)接因(yin)子3B亞基2抗體(ti)

三、培(pei)養註意(yi)事(shi)項 

1. 收到細胞(bao)後首(shou)先觀察細胞(bao)瓶是(shi)否完好，培養(yang)液是(shi)否有漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等現象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述現象(xiang) 發(fa)生請及(ji)時(shi)和(he)我們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀細胞(bao)說明(ming)書(shu)，了解(jie)細胞(bao)相關(guan)信(xin)息，如(ru)細胞(bao)形態、所用培(pei)養(yang)基、血清(qing)比(bi)例(li)、所需 細胞(bao)因(yin)子等(deng)，確保(bao)細胞(bao)培養(yang)條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由於培養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題，責(ze)任由 客(ke)戶(hu)自(zi)行承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭(shi)細胞(bao)瓶表(biao)面，顯(xian)微鏡(jing)下觀察細胞(bao)狀態。因(yin)運(yun)輸問(wen)題，部(bu)分細胞(bao)由於溫度(du) 變化及劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎形成碎片，是(shi)正常現(xian)象。觀察好細胞(bao)狀態後，75%酒精消毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞(bao)可以消(xiao)化，懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻收集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮的(de)培養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)瓶或(huo)培養皿(min)中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行培(pei)養。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相同條件(jian)的(de)培養(yang)基用於細胞(bao)培養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到細胞(bao)後前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細胞(bao)照片，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀態，便(bian)於和(he)我司技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由(you)於運(yun)輸的(de)原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏感細胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情況(kuang)，請及(ji)時(shi)和(he)我們聯系(xi)，告知細胞(bao) 的(de)具(ju)體情況(kuang)，以便(bian)我們的(de)技術(shu)人員跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至(zhi)問題解(jie)決(jue)。

7. 該細胞(bao)僅供科研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用的(de)培養(yang)基 (灌液(ye)培養(yang)基) 不(bu)能(neng)再用來(lai)培(pei)養細胞(bao)，請換(huan)用按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)細胞(bao)培 養(yang)條件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基來培(pei)養細胞(bao)。     收到細胞(bao)後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿(min)。