NCI-H1993細(xi)胞(bao)

公(gong)司產品僅(jin)供(gong)科研(yan)研究(jiu)使用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷！

壹(yi)、商品介(jie)紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒(dao)置顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加入 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞(bao)使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行分瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養箱中培(pei)養；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生長至(zhi)覆蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒(dao)置顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加入培(pei)養液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕輕(qing)吹打(da)細胞(bao)使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，並(bing)放置於凍存管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入液氮中(zhong)進行長期保存。使用(yong)程序

降溫盒(he)可直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二、細胞(bao)培(pei)養操作

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存處(chu)理(li)僅供參(can)考，具體(ti)操作步驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產(chan)品說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將含(han)有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍存管在(zai) 37℃水浴(yu)中迅(xun)速(su)搖晃解凍，加(jia)4 mL培(pei)養基混合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心3 min，棄(qi)去上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後吹勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有細胞(bao)懸(xuan)液加入含適量(liang)培(pei)養基的培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入10 cm皿中，加(jia)入約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第(di)二天換(huan)液(ye)並(bing)檢查細胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如果細(xi)胞(bao)密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可進行傳代(dai)培(pei)養。

a、棄去培(pei)養上清，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中，使(shi)消(xiao)化液浸潤(run)所有細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置於37℃培(pei)養箱中消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞(bao)消(xiao)化情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回操作臺，輕敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕輕(qing)打(da)勻後裝入無(wu)菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去上(shang)清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液後吹勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比例(li)分(fen)到新的含8 mL培(pei)養基的新皿中或者(zhe)瓶(ping)中，置於培(pei)養箱中培(pei)養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生長狀態(tai)良好時，可進行細胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養液，裝入無(wu)菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心4 min，棄(qi)去上(shang)清液，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入無(wu)血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混勻，每(mei)支凍(dong)存管凍(dong)存1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註意凍存管做(zuo)好標識。將(jiang)凍(dong)存管放入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入液氮灌(guan)儲(chu)存。記錄(lu)凍存管位(wei)置以便下(xia)次拿(na)取。

公(gong)司正(zheng)在(zai)出售(shou)的產品：

組織對氧磷(lin)酶(mei)1（PON1）芳(fang)酯(zhi)酶活性比(bi)色法(fa)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒

微(wei)型RNA（miRNA）同(tong)位(wei)素(su)探針制(zhi)備(bei)試(shi)劑(ji)盒

蘭(lan)花Vacin & Went培(pei)養基

細(xi)胞(bao)JNK/SAPK蛋白表(biao)達熒(ying)光定量(liang)檢測試劑(ji)盒

通用(yong)型密(mi)執(zhi)歲棍(gun)狀桿菌(jun)（Clavibacter michiganensis subsp.michiganenesis；Cmm）基(ji)因檢測試劑(ji)盒

血(xue)液(ye)D-糖(tang)激(ji)酶法(fa)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒

組織結(jie)合（酯(zhi)化）酶連(lian)續(xu)循(xun)環熒光定量(liang)檢測試劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)組織型纖維蛋白溶(rong)酶原(yuan)激(ji)活劑(ji)（tPA）活性化學發(fa)光法(fa)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)還原(yuan)型甘肽(tai)（GSH）濃(nong)度(du)熒(ying)光定量(liang)檢測試劑(ji)盒

通用(yong)型LB細(xi)菌(jun)培(pei)養液

冰(bing)凍(dong)切片(pian)組織BAX蛋白表(biao)達NBT顯(xian)色光學顯微鏡(jing)檢測試劑(ji)盒

稻米類(lei)植酸(suan)比色法(fa)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒

M. gastri RFLP基(ji)因分析(xi)試劑(ji)盒

組織PKCγ激(ji)酶(mei)活性定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒（A/B/C）

重(zhong)組逆轉(zhuan)錄(lu)病(bing)毒(du)穩態(tai)表達細(xi)胞(bao)克隆(long)凍(dong)存試劑(ji)盒

致(zhi)盲(mang)基因LCA5樣(yang)蛋白抗體(ti)

谷(gu)受(shou)體(ti)2C抗體(ti)（N端）

溶(rong)血磷(lin)脂酸(suan)受(shou)體(ti)蛋白2抗體(ti)

MAMDC2蛋白抗體(ti)

細(xi)胞(bao)質多聚腺苷酸(suan)結(jie)合蛋白2抗體(ti)

氨(an)基(ji)丁酸(suan)轉運蛋白VGAT抗體(ti)

磷(lin)酸(suan)核糖(tang)焦(jiao)磷酸(suan)合成(cheng)酶相關蛋白2抗體(ti)

NCI-H1993細(xi)胞(bao)CCDC44/卷(juan)曲螺旋(xuan)結(jie)構域蛋白44抗體(ti)

選擇(ze)性剪(jian)接(jie)因子(zi)3B亞(ya)基(ji)14抗體(ti)

三、培(pei)養註意事項 

1. 收到細(xi)胞(bao)後(hou)首先觀(guan)察細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好，培(pei)養液是(shi)否(fou)有漏液、渾濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有上述現象(xiang) 發(fa)生請及(ji)時和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了解細胞(bao)相關信(xin)息，如細胞(bao)形(xing)態、所用(yong)培(pei)養基、血清比(bi)例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子(zi)等(deng)，確(que)保細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹(yi)致(zhi)而導致(zhi)細胞(bao)出(chu)現問題，責任由 客(ke)戶自(zi)行承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞(bao)狀態(tai)。因運輸問題(ti)，部分細胞(bao)由於(yu)溫度(du) 變(bian)化及劇(ju)烈碰(peng)亡破碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察好細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養箱放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可以消(xiao)化，懸(xuan)浮細胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻收集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新鮮的培(pei)養基重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並(bing)接(jie)種到新的培(pei)養瓶(ping)或培(pei)養皿中，置於培(pei)養箱中進行培(pei)養。

5. 請客戶用(yong)相同條(tiao)件的培(pei)養基用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議客戶收到細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照片，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於和我司(si)技術(shu)部溝通 交流(liu)。由於(yu)運輸的原因，個別(bie)敏(min)感細胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩(wen)定的情況(kuang)，請(qing)及時和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知細胞(bao) 的具體(ti)情(qing)況(kuang)，以便我們(men)的技術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問題(ti)解決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用(yong)的培(pei)養基 (灌液培(pei)養基) 不能(neng)再用(yong)來(lai)培(pei)養細胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按(an)照說明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新配(pei)制(zhi)的培(pei)養基來培(pei)養細胞(bao)。     收到細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹(yi)次傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。