NCI-H2023細胞

公(gong)司(si)產品僅供科研研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品介紹(shao)：

1、細胞傳代：

1）細胞生長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察，待(dai)細胞回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕吹打(da)細胞使之(zhi)脫落，然後將(jiang)懸(xuan)液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱(dian)細胞用(yong) 1-2ml 培養基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察，待(dai)細胞回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入(ru)培(pei)養液終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕吹打細胞使之(zhi)脫落，然後將(jiang)懸(xuan)液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管中(zhong)；

4）先將細胞凍(dong)存(cun)管放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過夜(ye)，24h 後轉入液氮中(zhong)進行(xing)長(chang)期(qi)保存。使(shi)用(yong)程序

降溫(wen)盒(he)可直接放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培養(yang)操作

1) 復(fu)蘇細胞：以下細胞培養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理僅(jin)供參(can)考(kao)，具體操(cao)作步(bu)驟以隨貨產品說明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將含(han)有1 mL細胞懸液的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培養基(ji)混合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄去上清液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所(suo)有細胞懸液加入(ru)含(han)適量培(pei)養基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞懸液加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入約8 mL培養(yang)基(ji)，培養過(guo)夜(ye)）。第二(er)天(tian)換液並檢查(zha)細胞密度(du)。

2) 細胞傳代：如(ru)果細胞密度(du)達(da) 80%-90%，即可進行(xing)傳代培養。

a、棄去培(pei)養上清，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液浸潤(run)所(suo)有細胞，將培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而定），然後在(zai)顯(xian)微鏡下觀(guan)察細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細胞大部分(fen)變圓(yuan)並脫落，迅(xun)速拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕打勻後裝入無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上清液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸液按1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新(xin)皿中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待細胞生長(chang)狀態良好時(shi)，可進行(xing)細胞凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集(ji)細胞及細胞培養(yang)液，裝入無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄去上清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍(bian)，棄盡PBS，進行(xing)細胞計(ji)數。

b、根據(ju)細胞數量加(jia)入無血清細胞凍(dong)存(cun)液，使細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管做好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入液氮灌(guan)儲存。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管位置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司(si)正在(zai)出售(shou)的(de)產(chan)品：

組(zu)織對(dui)氧(yang)磷(lin)酶(mei)1（PON1）內酯酶(mei)活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法定量檢測試劑(ji)盒(he)

特(te)定成熟微型RNA（miRNA）分(fen)子合(he)成(cheng)

蘭花(hua)Malmgen培養(yang)基(ji)

JNK/SAPK蛋白免(mian)疫(yi)共沈(chen)澱(dian)分(fen)析試劑(ji)盒(he)

通用(yong)型青枯菌(jun)/茄科雷(lei)爾氏菌(jun)（Ralstonia solanacearum；Rs）

細胞D-糖氧(yang)化(hua)法定量檢測試劑(ji)盒(he)

甘油(you)（glycerol）含量(liang)酶連續(xu)循(xun)環(huan)反應(ying)比色(se)法

血(xue)液組(zu)織纖維型(xing)蛋白溶(rong)酶原激活(huo)劑(ji)（tPA）活(huo)性(xing)化(hua)學發(fa)光(guang)法定量檢測試劑(ji)盒(he)

組(zu)織還原型甘肽(tai)（GSH）濃度(du)熒光(guang)定量檢測試劑(ji)盒(he)

細菌(jun)抗生素(su)（氨卞(bian)青）敏(min)感(gan)性(xing)DISC彌(mi)散(san)（KIRBY-BAUER）檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

細胞BAX蛋白表(biao)達(da)比色(se)法定量檢測試劑(ji)盒(he)

麥(mai)類植物植酸比色法定量檢測試劑(ji)盒(he)

CACNA1G基(ji)因(yin)甲(jia)基(ji)化(hua)程度(du)定量分(fen)析試劑(ji)盒(he)

組(zu)織PKCδ激(ji)酶活(huo)性(xing)定量檢測試劑(ji)盒(he)（A/B/C）

細胞周(zhou)期(qi)藍(lan)色(se)熒(ying)光(guang)流(liu)式細胞分(fen)析試劑(ji)盒(he)

致死(si)因(yin)子惡性腦瘤樣蛋白2抗體(ti)

谷受(shou)體2抗(kang)體

溶血磷(lin)脂(zhi)酸(suan)酰基(ji)轉移酶(mei)D抗(kang)體

MAN1C1蛋白抗(kang)體

細胞質多(duo)聚(ju)腺(xian)苷(gan)酸結(jie)合(he)蛋白4抗體(ti)

氨基(ji)甲(jia)酸乙酰轉移酶(mei)抗體(ti)

磷(lin)酸(suan)化(hua)14-3-3 α/β/ζ抗(kang)體

NCI-H2023細胞CD101抗(kang)體

選擇性剪(jian)接因(yin)子3B亞基(ji)3抗體

三(san)、培養(yang)註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞後首(shou)先(xian)觀(guan)察細胞瓶(ping)是否完好，培(pei)養(yang)液是否有漏(lou)液、渾(hun)濁等現(xian)象(xiang)，若有上述(shu)現象 發(fa)生請及時(shi)和我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔細閱(yue)讀細胞說明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細胞相關信息，如(ru)細胞形態、所(suo)用(yong)培養基(ji)、血清比(bi)例(li)、所(suo)需 細胞因(yin)子等，確(que)保(bao)細胞培養(yang)條(tiao)件壹致，若由(you)於(yu)培養(yang)條(tiao)件不(bu)壹(yi)致而(er)導(dao)致細胞出現(xian)問題，責任(ren)由 客戶自行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭(shi)細胞瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下觀(guan)察細胞狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題，部分(fen)細胞由於(yu)溫(wen)度(du) 變化(hua)及劇(ju)烈碰亡(wang)破(po)碎形成(cheng)碎片，是正常(chang)現(xian)象。觀(guan)察好細胞狀態後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞直接混勻收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或培養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培(pei)養。

5. 請客戶用(yong)相同條(tiao)件的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於細胞培養(yang)。

6. 建議客戶收到(dao)細胞後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細胞照片，記(ji)錄(lu)細胞狀態，便(bian)於和我司(si)技術(shu)部溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原因(yin)，個(ge)別敏(min)感(gan)細胞會出(chu)現不(bu)穩(wen)定的(de)情(qing)況(kuang)，請及時(shi)和我(wo)們(men)聯系(xi)，告知(zhi)細胞 的(de)具(ju)體(ti)情況(kuang)，以便(bian)我們(men)的(de)技(ji)術(shu)人員跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直至問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該細胞僅供(gong)科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌液培養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再用(yong)來(lai)培養(yang)細胞，請換用(yong)按照說明(ming)書(shu)細胞培 養(yang)條(tiao)件新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細胞。     收到(dao)細胞後第壹次(ci)傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿。