NCI-H1781細(xi)胞

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷！

壹(yi)、商(shang)品(pin)介(jie)紹(shao)：

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒置(zhi)顯微鏡下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回縮(suo)變圓後加入 5ml 培(pei)養

液終止(zhi)消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後將懸液轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養基重懸，然後按(an) 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒置(zhi)顯微鏡下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回縮(suo)變圓後加入培(pei)養液終

止(zhi)消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後將懸液轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞凍存(cun)管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後轉入液氮中(zhong)進行(xing)長(chang)期(qi)保(bao)存。使(shi)用(yong)程序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養操作

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以下細(xi)胞培(pei)養凍存(cun)處(chu)理僅(jin)供(gong)參考，具(ju)體操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨貨產品(pin)說明(ming)書為主。將含有1 mL細(xi)胞懸液的凍存(cun)管在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解凍，加4 mL培(pei)養基混合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養基後吹(chui)勻。然後將所有(you)細(xi)胞懸液加入含適(shi)量培(pei)養基的培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過夜（或將細(xi)胞懸液加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並檢(jian)查細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如果細(xi)胞密度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄去培(pei)養上清(qing)，用(yong)不含鈣、鎂離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中，使(shi)消(xiao)化液浸潤(run)所有(you)細(xi)胞，將培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況而(er)定(ding)），然後在顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞消化(hua)情(qing)況，若細(xi)胞大部(bu)分變圓並脫落(luo)，迅速(su)拿回操作臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養基終止(zhi)消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後(hou)裝入無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上清(qing)液，補加1-2 mL培(pei)養液後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞懸液按(an)1:2比例(li)分到新(xin)的含8 mL培(pei)養基的新(xin)皿中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀態(tai)良(liang)好(hao)時，可進行(xing)細(xi)胞凍存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞及細(xi)胞培(pei)養液，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數量(liang)加入無(wu)血清(qing)細(xi)胞凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞懸液，註意(yi)凍存(cun)管做(zuo)好(hao)標識。將凍存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管位(wei)置(zhi)以便(bian)下次(ci)拿(na)取。

公(gong)司(si)正(zheng)在出售的產(chan)品(pin)：

細(xi)胞堿(jian)性焦磷(lin)酸(suan)酶（Alkaline Pyrophosphatase）活(huo)性比色法定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒(he)

總微型(xing)RNA（miRNA）電(dian)泳(yong)法分離試(shi)劑(ji)盒(he)

植(zhi)物(wu)彌(mi)散吲(yin)哚(duo)-3-（IAA）比色法定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒(he)（包(bao)括(kuo)萃(cui)取(qu)）

細(xi)胞IKB-ALPHA蛋白表達熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒(he)

通用型(xing)總番(fan)茄斑(ban)萎(wei)病(bing)毒（Total Tospo Virus；TOSPO）基因檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

組(zu)織(zhi)糖(tang)原(yuan)化學(xue)水(shui)解比色法定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒(he)

組(zu)織(zhi)遊(you)離(li)酶連(lian)續(xu)循(xun)環(huan)比色法定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒(he)

優(you)球(qiu)蛋白溶(rong)解時間（ELT）檢(jian)測(ce)試劑盒(he)

體液還(hai)原(yuan)型(xing)甘(gan)肽(tai)（GSH）濃(nong)度(du)比色法定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒(he)

細(xi)菌(jun)TSA瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)板

冰(bing)凍切(qie)片(pian)組(zu)織(zhi)BAD蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測(ce)試劑盒(he)

果糖待測(ce)樣品(pin)處(chu)理試(shi)劑盒(he)

C. parapsilosis RFLP基因分析試(shi)劑(ji)盒(he)

組(zu)織(zhi)PHKG2激(ji)酶活(huo)性定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒(he)（A/B/C）

真(zhen)菌(jun)/酵(jiao)母(mu)細(xi)胞β-半乳(ru)糖(tang)苷(gan)酶活(huo)性化學發光(guang)法定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒(he)

指(zhi)甲髕(bin)骨綜(zong)合征(zheng)相(xiang)關(guan)蛋白NPS1抗(kang)體

孤兒核受體TAK1抗(kang)體

溶(rong)酶體絲(si)DPP2抗(kang)體

MAB21L1蛋白抗(kang)體

細(xi)胞粘(zhan)附(fu)分子(zi)3抗(kang)體

艾滋病(bing)Rev結(jie)合(he)蛋白2抗(kang)體

磷(lin)酸(suan)二酯酶8B抗(kang)體

NCI-H1781細(xi)胞CARD9抗(kang)體

嗅覺(jiao)受體家(jia)族(zu)5亞基1抗(kang)體

三(san)、培(pei)養註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後首(shou)先觀察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養液是否(fou)有漏液、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若有(you)上述現(xian)象 發(fa)生(sheng)請(qing)及時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞說明(ming)書，了解細(xi)胞相(xiang)關(guan)信息(xi)，如(ru)細(xi)胞形(xing)態(tai)、所用(yong)培(pei)養基、血清(qing)比例(li)、所需 細(xi)胞因子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞培(pei)養條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若由於(yu)培(pei)養條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現問(wen)題，責(ze)任由 客(ke)戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭細(xi)胞瓶(ping)表面，顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀態(tai)。因運(yun)輸問(wen)題，部(bu)分細(xi)胞由於(yu)溫度(du) 變化(hua)及劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞狀態(tai)後，75%酒(jiu)精消毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞可以消(xiao)化，懸浮(fu)細(xi)胞直接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培(pei)養基重懸 細(xi)胞，並接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的培(pei)養瓶(ping)或培(pei)養皿中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培(pei)養。

5. 請客(ke)戶用(yong)相(xiang)同條(tiao)件(jian)的培(pei)養基用於(yu)細(xi)胞培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶收(shou)到(dao)細(xi)胞後前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運輸的原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏感(gan)細(xi)胞會(hui)出現不(bu)穩定(ding)的情(qing)況，請及時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)，告知細(xi)胞 的具(ju)體情(qing)況，以便(bian)我們(men)的技(ji)術人員(yuan)跟蹤(zong)回訪直至問(wen)題解決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備註：運(yun)輸用(yong)的培(pei)養基 (灌液培(pei)養基) 不能(neng)再用(yong)來(lai)培(pei)養細(xi)胞，請換(huan)用(yong)按(an)照說明(ming)書細(xi)胞培(pei) 養條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制的培(pei)養基來(lai)培(pei)養細(xi)胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。