NCI-H1770細(xi)胞

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供科(ke)研研究使用(yong)、不(bu)得(de)用於臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

壹(yi)、商品介紹(shao)：

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓後加入 5ml 培(pei)養

液終止消(xiao)化，再(zai)輕輕吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然後將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後放入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養箱中培養；

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓後加入培(pei)養液終

止消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然後將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管(guan)中；

4）先將(jiang)細(xi)胞凍(dong)存管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入-80℃過夜，24h 後轉入液氮中(zhong)進行(xing)長(chang)期(qi)保(bao)存。使(shi)用程序

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以下(xia)細(xi)胞培(pei)養凍(dong)存處(chu)理(li)僅供(gong)參考(kao)，具體操(cao)作步(bu)驟以隨(sui)貨產品說(shuo)明(ming)書(shu)為主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的凍(dong)存管(guan)在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養基(ji)混合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻。然(ran)後將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞懸(xuan)液加入含(han)適(shi)量培(pei)養基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中培(pei)養過夜（或將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液加入10 cm皿(min)中，加入約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培養過夜）。第二(er)天換液並檢查(zha)細(xi)胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細(xi)胞密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培養上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離子的PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消(xiao)化液浸潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培養(yang)箱中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情(qing)況(kuang)而定(ding)），然後在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大(da)部分變圓並脫落，迅速(su)拿回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養基(ji)終止消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打勻後裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例(li)分到新的含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的新皿中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於培(pei)養箱中培養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞生長(chang)狀態良(liang)好(hao)時，可(ke)進行(xing)細(xi)胞凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養液，裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞計(ji)數。

b、根(gen)據細(xi)胞數量(liang)加入無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞凍(dong)存液，使細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做好標識(shi)。將(jiang)凍(dong)存管(guan)放入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入液氮灌(guan)儲存。記(ji)錄凍(dong)存管(guan)位置以便下(xia)次(ci)拿(na)取。

公(gong)司正在出售的產(chan)品：

植(zhi)物(wu)NADP依賴(lai)性(xing)甘油(you)醛(quan)-3-磷酸脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（NADP-Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase；NADP-GAPDH）活(huo)性(xing)光譜(pu)法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

微(wei)型RNA（miRNA）試劑(ji)專(zhuan)題(ti)

植(zhi)物(wu)結合吲哚-3-（IAA）比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒（包括(kuo)萃取）

細(xi)胞IKB-ALPHA蛋白(bai)表(biao)達比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

通用型番(fan)茄(qie)斑萎病毒(du)（Tomato Spotted Wilt Virus；TSWV）

細(xi)胞糖(tang)原化學水(shui)解(jie)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

細(xi)胞遊(you)離酶連續循環(huan)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

原(yuan)時(shi)間（PT）檢測(ce)試劑(ji)盒

組(zu)織(zhi)還(hai)原(yuan)型甘(gan)肽（GSH）濃(nong)度比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

細(xi)菌(jun)MUELLER HINTON瓊脂平(ping)板(ban)

載(zai)玻片細(xi)胞BAD蛋白(bai)表(biao)達NBT顯色(se)光學顯微(wei)鏡(jing)檢(jian)測試劑(ji)盒

植(zhi)物(wu)果糖(tang)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

C. guilliermondii RFLP基(ji)因分析(xi)試劑(ji)盒

細(xi)胞PHKG2激(ji)酶(mei)活(huo)性(xing)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒（A/B/C）

動(dong)物(wu)組織β-半(ban)乳(ru)糖(tang)苷酶活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

指(zhi)(趾)關(guan)節(jie)粘(zhan)連NOG蛋白(bai)抗體(ti)

孤(gu)兒核受(shou)體(ti)TAK1 單克隆(long)抗體(ti)

溶(rong)酶(mei)體(ti)磷脂酶(mei)3抗體(ti)

L-組(zu)脫(tuo)羧(suo)酶抗體(ti)

細(xi)胞粘(zhan)附分子2抗體(ti)

艾(ai)杜糖(tang)-2-硫(liu)酸酯酶抗體(ti)

磷酸二(er)酯酶8A抗體(ti)

NCI-H1770細(xi)胞CARD9單克隆(long)抗體(ti)

嗅(xiu)覺受體(ti)家(jia)族(zu)2亞基(ji)4抗體(ti)

三(san)、培(pei)養(yang)註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收到細(xi)胞後首(shou)先觀(guan)察細(xi)胞瓶(ping)是否完(wan)好(hao)，培養(yang)液是否有(you)漏(lou)液、渾濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象 發(fa)生請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細(xi)胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞相關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞形(xing)態、所(suo)用培養基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需 細(xi)胞因子等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞培(pei)養條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而導致細(xi)胞出(chu)現問(wen)題(ti)，責任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒精擦(ca)拭細(xi)胞瓶(ping)表面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞狀(zhuang)態。因運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部分細(xi)胞由(you)於溫(wen)度 變化及(ji)劇烈碰(peng)亡破(po)碎形(xing)成碎片，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後，75%酒精消(xiao)毒瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培養(yang)箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可(ke)以消(xiao)化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接(jie)混勻收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並接(jie)種到新的培(pei)養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)皿中(zhong)，置於培養箱中進行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用(yong)相同(tong)條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用於細(xi)胞培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞後前 3 天各拍幾張細(xi)胞照(zhao)片，記(ji)錄細(xi)胞狀(zhuang)態，便於(yu)和(he)我(wo)司技術部溝通 交流。由(you)於運(yun)輸(shu)的原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞會出現(xian)不穩(wen)定(ding)的情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的(de)具體(ti)情(qing)況(kuang)，以便我(wo)們的技術人員跟蹤回(hui)訪直(zhi)至問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液培養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用來(lai)培養(yang)細(xi)胞，請(qing)換用按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞培(pei) 養條(tiao)件(jian)新配制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細(xi)胞。     收到細(xi)胞後第壹(yi)次傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。