NCI-H1755細胞

公司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供科(ke)研(yan)研究(jiu)使用(yong)、不得(de)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷！

壹(yi)、商品(pin)介(jie)紹：

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察，待(dai)細胞回縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終止消(xiao)化，再輕輕吹(chui)打細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)細胞用 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳代(dai)，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)；

2、細(xi)胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察，待(dai)細胞回縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru)培養(yang)液(ye)終

止消(xiao)化，輕輕吹(chui)打細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放(fang)置(zhi)於凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮中(zhong)進行(xing)長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使用(yong)程序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供參(can)考(kao)，具體(ti)操(cao)作步(bu)驟以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主。將含(han)有1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培養(yang)基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將所(suo)有細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)含(han)適(shi)量(liang)培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基，培養(yang)過(guo)夜(ye)）。第二天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細(xi)胞密(mi)度。

2) 細胞傳代(dai)：如果(guo)細(xi)胞密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有細胞，將培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況而(er)定），然(ran)後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化情況，若細胞大部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速拿回操(cao)作臺，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養(yang)基終(zhong)止消(xiao)化。輕輕打勻(yun)後(hou)裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培養(yang)基的(de)新(xin)皿中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時，可(ke)進行(xing)細胞凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細胞及(ji)細胞培養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄盡PBS，進行(xing)細胞計數(shu)。

b、根據(ju)細胞數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血清(qing)細胞凍存(cun)液(ye)，使細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便下(xia)次拿取。

公司(si)正在(zai)出售的(de)產(chan)品(pin)：

真(zhen)菌(jun)/酵(jiao)母NADP依賴性(xing)甘油(you)醛(quan)-3-磷酸脫氫酶（NADP-Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase；NADP-GAPDH）活(huo)性(xing)光譜(pu)法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

RNA酶(mei)溶(rong)液(ye)（RNA酶(mei)保(bao)護(hu)分析(xi)）

植(zhi)物(wu)遊離(li)吲(yin)哚-3-（IAA）比(bi)色(se)法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)（包括(kuo)萃(cui)取）

石蠟切(qie)片組(zu)織(zhi)IKB-ALPHA蛋(dan)白(bai)表(biao)達NBT顯(xian)色(se)光(guang)學(xue)顯微鏡檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

通用(yong)型草環(huan)斑(ban)病毒(du)（Tobacco Ringspot Virus；TRSV）

S腺(xian)苷(gan)同型半（SAH或(huo)AdoHcy）酶(mei)連(lian)續(xu)循(xun)環(huan)比(bi)色(se)法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

血液(ye)總酶(mei)連(lian)續(xu)循(xun)環(huan)比(bi)色(se)法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

白(bai)陶土部分凝(ning)血活酶(mei)時間(jian)（KPTT）檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

血液(ye)還原型甘肽(tai)（GSH）濃(nong)度比(bi)色(se)法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

細(xi)菌(jun)色(se)肉(rou)湯

石蠟切(qie)片組(zu)織(zhi)BAD蛋(dan)白(bai)表(biao)達熒光(guang)顯(xian)微鏡檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

面(mian)食果(guo)糖比(bi)色(se)法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

C. krusei RFLP基因(yin)分析(xi)試(shi)劑(ji)盒(he)

組(zu)織(zhi)PDK1激(ji)酶(mei)活性(xing)定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)（A/B/C）

動(dong)物(wu)細(xi)胞β-半乳糖苷(gan)酶活(huo)性(xing)比色(se)法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

植(zhi)物(wu)延長(chang)蛋(dan)白(bai)（擬(ni)南芥）

孤兒(er)核受(shou)體(ti)PAR1抗(kang)體(ti)

溶(rong)酶(mei)體(ti)累(lei)積病(bing)相關蛋白(bai)/口(kou)吃(chi)相(xiang)關(guan)蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)

L選擇素(su)抗(kang)體(ti)

細(xi)胞粘(zhan)附分子1抗(kang)體(ti)

癌(ai)癥亮(liang)拉(la)鏈(lian)下(xia)調(tiao)因(yin)子1樣蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

磷酸二酯酶7抗(kang)體(ti)

NCI-H1755細(xi)胞Cappuccino蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)

嗅(xiu)覺(jiao)受(shou)體(ti)家(jia)族(zu)10亞基J3抗(kang)體(ti)

三、培養(yang)註(zhu)意事項 

1. 收到(dao)細胞後首(shou)先觀(guan)察細(xi)胞瓶(ping)是否(fou)完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是否(fou)有漏液(ye)、渾濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象 發生(sheng)請及(ji)時和我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說明書，了(le)解細(xi)胞相關信息(xi)，如(ru)細胞形態、所(suo)用(yong)培養(yang)基、血清(qing)比例(li)、所(suo)需 細胞因(yin)子等，確保(bao)細胞培養(yang)條(tiao)件壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於培養(yang)條(tiao)件不壹致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現(xian)問題，責任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭(shi)細胞瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題，部(bu)分細胞由於溫(wen)度 變(bian)化及(ji)劇烈碰(peng)亡破(po)碎(sui)形成碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常現(xian)象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞可以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直接混(hun)勻(yun)收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新(xin)鮮的(de)培養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條件的(de)培養(yang)基用(yong)於細(xi)胞培養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞照片，記(ji)錄(lu)細胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和我(wo)司(si)技術部(bu)溝(gou)通 交流。由(you)於運輸的(de)原因(yin)，個別敏(min)感細(xi)胞會出現(xian)不穩(wen)定的(de)情(qing)況，請及(ji)時和我(wo)們(men)聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的(de)具體(ti)情(qing)況，以(yi)便我(wo)們(men)的(de)技(ji)術人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪直至(zhi)問題解決。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備註(zhu)：運輸用(yong)的(de)培養(yang)基 (灌液(ye)培養(yang)基) 不(bu)能再(zai)用(yong)來培養(yang)細(xi)胞，請換(huan)用按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)細胞培 養(yang)條(tiao)件新(xin)配制的(de)培養(yang)基來培養(yang)細(xi)胞。     收到(dao)細胞後第壹次傳代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代(dai)就是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿。