MLMA細胞(bao)

公(gong)司產(chan)品僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不得用於臨(lin)床(chuang)診斷！

壹、商(shang)品介紹(shao)：

1、細胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆蓋培養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培養瓶中的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消(xiao)化，再(zai)輕輕吹(chui)打細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沈澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養基重懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例進行分(fen)瓶傳代(dai)，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中培養；

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生長至覆蓋培養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培養瓶中的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終

止消(xiao)化，輕輕吹(chui)打細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放置於凍(dong)存(cun)管中；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中進行長期保存(cun)。使(shi)用程(cheng)序

降(jiang)溫(wen)盒可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養(yang)操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下細胞(bao)培養(yang)凍(dong)存(cun)處理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具體操作(zuo)步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品說明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水浴中迅速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合均(jun)勻。在1000 rpm條件下離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養瓶中培養過夜(ye)（或(huo)將細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養基(ji)，培養過(guo)夜(ye)）。第(di)二天(tian)換液並檢查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果細胞(bao)密度達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳代(dai)培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清，用不含鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消化液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將培(pei)養瓶置於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定），然後在顯微(wei)鏡(jing)下觀察細胞(bao)消化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾下培養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消(xiao)化。輕輕打勻後裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上(shang)清液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比例分(fen)到新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿(min)中或者瓶中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時，可(ke)進行細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶為(wei)例；a、收集細胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養(yang)液，裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件下離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，用PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清細胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管做(zuo)好標識(shi)。將凍(dong)存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置以(yi)便(bian)下次拿(na)取(qu)。

公(gong)司正(zheng)在出售的(de)產(chan)品：

真(zhen)菌(jun)/酵(jiao)母(mu)細(xi)胞(bao)鹽還(hai)原酶活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法定量檢測(ce)試劑(ji)盒(he)

RT－PCR試(shi)劑專題(ti)

植物(wu)組(zu)織(zhi)微(wei)粒體分(fen)離試(shi)劑盒

石蠟切(qie)片組(zu)織(zhi)GSK-3BETA蛋(dan)白表(biao)達(da)熒光顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢測(ce)試劑(ji)盒(he)

通(tong)用型羊(yang)關節炎腦炎(yan)病毒(du)（Arthritis Encephalitis Virus）

環境鉀(jia)離子(zi)（K）濃(nong)度化學(xue)比(bi)色法定量檢測(ce)試劑(ji)盒(he)

細(xi)胞(bao)多巴胺（dopamine）比(bi)色法定量檢測(ce)試劑(ji)盒(he)

冰凍(dong)切(qie)片氧化8-氧(yang)鳥(niao)苷(gan)（8-oxo-G）熒光染(ran)色測(ce)定試劑(ji)盒(he)

Hollande固(gu)著液

產(chan)氣莢(jia)膜(mo)梭(suo)菌(jun)α毒(du)素(su)（Clostridium perfringens cpa）鑒(jian)定16S rDNA PCR擴(kuo)增(zeng)檢測(ce)試劑(ji)盒(he)

細(xi)胞(bao)PDGF-A蛋(dan)白表(biao)達(da)流(liu)式細(xi)胞(bao)儀檢測(ce)試劑(ji)盒(he)

血(xue)液乳糖含量(liang)酶連(lian)續(xu)反應(ying)光譜法定量檢測(ce)試劑(ji)盒(he)

植物(wu)結(jie)構域(yu)重排甲基(ji)轉(zhuan)移(yi)酶（Domain Rearranged Methylase；DRM）活(huo)性(xing)酶連(lian)續(xu)循(xun)環比色(se)法定量檢測(ce)試劑(ji)盒(he)

細(xi)胞(bao)JNK1激(ji)酶活(huo)性(xing)定量檢測(ce)試劑(ji)盒(he)（A/B/C）

CD336

脂肪(fang)酸(suan)轉(zhuan)運(yun)蛋(dan)白6抗(kang)體

睪(gao)丸發(fa)育相(xiang)關蛋(dan)白抗(kang)體

人微(wei)管相關蛋(dan)白Tau-4抗(kang)體

LSM12蛋(dan)白抗(kang)體

細(xi)胞(bao)外(wai)基(ji)質(zhi)磷(lin)酸化抗(kang)體

埃(ai)茲蛋(dan)白抗(kang)體

淋(lin)巴細胞(bao)抗原(yuan)75（CD205）重組(zu)兔單(dan)克隆(long)抗(kang)體

MLMA細胞(bao)B淋(lin)巴細胞(bao)白血(xue)病前體蛋(dan)白轉(zhuan)錄(lu)因子(zi)1抗體

嗅(xiu)覺受(shou)體5AU1抗(kang)體

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首(shou)先觀察細胞(bao)瓶是否(fou)完(wan)好，培養(yang)液是否有(you)漏液、渾濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及時(shi)和我們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細胞(bao)說明(ming)書(shu)，了(le)解細(xi)胞(bao)相關信(xin)息，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用培養基、血(xue)清比例、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因子(zi)等，確保細胞(bao)培養(yang)條件壹致(zhi)，若由(you)於培(pei)養(yang)條件不壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，責任由 客戶(hu)自(zi)行承(cheng)擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面，顯微(wei)鏡(jing)下觀察細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸問題(ti)，部(bu)分(fen)細胞(bao)由於溫(wen)度(du) 變化及劇烈碰(peng)亡破碎形(xing)成(cheng)碎片，是正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察好細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精消毒瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可以(yi)消化，懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)直接(jie)混勻收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮(xian)的(de)培(pei)養基重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種到新的(de)培(pei)養瓶或培(pei)養(yang)皿(min)中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中進行培養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用相同條件(jian)的(de)培(pei)養基用於細(xi)胞(bao)培養(yang)。

6. 建議客戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾張細胞(bao)照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和(he)我司(si)技(ji)術(shu)部溝通(tong) 交流(liu)。由於運(yun)輸的(de)原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏感細胞(bao)會出現(xian)不(bu)穩(wen)定的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及時(shi)和我們(men)聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技(ji)術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直至問題(ti)解(jie)決。

7. 該細胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培(pei)養基 (灌(guan)液培養基) 不(bu)能(neng)再(zai)用來培養細胞(bao)，請(qing)換用按照(zhao)說明(ming)書(shu)細胞(bao)培 養(yang)條件新配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養基來(lai)培(pei)養細胞(bao)。     收到細(xi)胞(bao)後第(di)壹次(ci)傳代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。