MMAc•SF細(xi)胞

公司產(chan)品僅供科研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

壹、商品(pin)介紹：

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至覆蓋培養(yang)瓶的 80%面積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止消化，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使之脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉移至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸，然後(hou)按(an) 1:2 比例進(jin)行分(fen)瓶傳代，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至覆蓋培養(yang)瓶的 80%面積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入培養(yang)液終(zhong)

止消化，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使之脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉移至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞，並(bing)放置於(yu)凍存(cun)管中；

4）先(xian)將細(xi)胞凍(dong)存(cun)管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其移入-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮中進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使用程序

降溫(wen)盒可直接放入-80℃。

二、細(xi)胞培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇細(xi)胞：以(yi)下(xia)細(xi)胞培(pei)養(yang)凍存(cun)處理僅(jin)供(gong)參(can)考，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟以隨(sui)貨(huo)產(chan)品說明書為主(zhu)。將含(han)有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基混合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將所(suo)有細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜（或將細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜）。第二天換液並(bing)檢查(zha)細(xi)胞密度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞密度達(da) 80%-90%，即可進行傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去培養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶中，使消(xiao)化(hua)液浸潤(run)所有細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶置於(yu)37℃培養(yang)箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況(kuang)而(er)定），然後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大部(bu)分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫落，迅(xun)速(su)拿回操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基終(zhong)止消化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液按1:2比例分(fen)到新的含(han)8 mL培養(yang)基的新(xin)皿(min)中或者(zhe)瓶中，置於(yu)培養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可進行細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xi)胞及細(xi)胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄盡PBS，進行(xing)細(xi)胞計數(shu)。

b、根(gen)據細(xi)胞數(shu)量(liang)加(jia)入無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)液，使細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管做好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存(cun)管放入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮灌儲(chu)存(cun)。記錄凍存(cun)管位(wei)置以便下次拿取。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的產(chan)品：

藻類(lei)細(xi)胞鹽還原(yuan)酶(mei)活性(xing)比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

兩步(bu)法(fa)RT－PCR試劑(ji)盒(he)

植(zhi)物組(zu)織膜(mo)性囊(nang)泡(pao)（vacuole）分(fen)離試(shi)劑(ji)盒(he)

載玻(bo)片細(xi)胞GSK-3BETA蛋(dan)白(bai)表達NBT顯(xian)色(se)光(guang)學(xue)顯(xian)微(wei)鏡檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

通用型(xing)沙眼衣(yi)原(yuan)體(ti)（Chlamydia）基因(yin)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

食物(wu)鉀(jia)離(li)子（K）濃度(du)化(hua)學(xue)比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

組織多巴胺（dopamine）比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

石蠟(la)切片氧化(hua)8-氧鳥(niao)苷(gan)（8-oxo-G）熒(ying)光染色(se)測(ce)定試劑(ji)盒(he)

Acetic alcohol固(gu)著液

產氣莢(jia)膜(mo)梭菌(jun)腸(chang)毒素（Clostridium perfringens cpe）鑒定16S rDNA PCR擴(kuo)增檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

載玻(bo)片細(xi)胞PDGF-A蛋(dan)白(bai)表達熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

體(ti)液乳(ru)糖(tang)含量(liang)酶(mei)連續(xu)反應光譜(pu)法(fa)定量(liang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

細(xi)胞組(zu)蛋(dan)白(bai)H3-K4甲基化(hua)比色法(fa)定量(liang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

組織JNK1激酶(mei)活性(xing)定量(liang)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)（A/B/C）

EDTA二鉀(jia)血液抗凝液

脂(zhi)肪細(xi)胞分(fen)化因(yin)子24抗體(ti)

睪丸分(fen)化過(guo)程轉錄因子MRO抗體(ti)

單克隆抗體(ti)

LSM14A蛋(dan)白(bai)抗體(ti)

細(xi)胞外基質(zhi)糖(tang)蛋(dan)白(bai)MMRN2抗體(ti)

癌(ai)/睪丸抗原(yuan)105抗體(ti)

淋巴細(xi)胞抗原(yuan)Ly6D抗體(ti)

MMAc·SF細(xi)胞B淋巴細(xi)胞白(bai)血(xue)病前(qian)體(ti)蛋(dan)白(bai)轉(zhuan)錄因子2抗體(ti)

嗅覺(jiao)受(shou)體(ti)5B3抗體(ti)

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶是否完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否有漏液、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有上(shang)述現(xian)象 發生請及時和我們聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞說明書，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關信(xin)息(xi)，如細(xi)胞形(xing)態(tai)、所用培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比例、所(suo)需 細(xi)胞因(yin)子等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞培(pei)養(yang)條(tiao)件壹致，若(ruo)由(you)於(yu)培養(yang)條(tiao)件不(bu)壹致而(er)導致細(xi)胞出現(xian)問題，責任(ren)由 客(ke)戶(hu)自行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞瓶表面，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因運輸問題，部(bu)分(fen)細(xi)胞由(you)於(yu)溫(wen)度 變化及劇(ju)烈碰亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎片，是正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶壁將 T25 瓶置於(yu) 37℃培養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞可以消化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接混勻收(shou)集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養(yang)基重(zhong)懸 細(xi)胞，並(bing)接種到新的培(pei)養(yang)瓶或培養(yang)皿(min)中，置於(yu)培養(yang)箱中進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用相(xiang)同條(tiao)件的培(pei)養(yang)基用於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天各拍幾張細(xi)胞照(zhao)片，記錄細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和我司技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交流(liu)。由於(yu)運輸的原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏(min)感細(xi)胞會出現(xian)不(bu)穩定的情(qing)況(kuang)，請及時和我們聯系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞 的具(ju)體(ti)情況(kuang)，以(yi)便我們的技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟蹤回訪直(zhi)至問題解(jie)決。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使用。

8. 備(bei)註：運輸用的培(pei)養(yang)基 (灌液培養(yang)基) 不(bu)能(neng)再用來(lai)培養(yang)細(xi)胞，請換(huan)用按(an)照說明書細(xi)胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件新(xin)配制的培(pei)養(yang)基來(lai)培養(yang)細(xi)胞。     收(shou)到細(xi)胞後(hou)第(di)壹次傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿(min)。