M-NFS-60細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產品(pin)僅供科研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

壹、商品(pin)介紹(shao)：

1、細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養瓶的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培養液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀察，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後加入(ru) 5ml 培養

液終(zhong)止消化(hua)，再輕輕(qing)吹打細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養基(ji)重懸，然後按 1:2 比例進行分(fen)瓶傳代(dai)，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養瓶的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培養液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀察，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後加入(ru)培養液終(zhong)

止消化(hua)，輕輕吹(chui)打細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞(bao)，並放置(zhi)於凍(dong)存管中(zhong)；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進行長期保存。使(shi)用(yong)程序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二、細胞(bao)培養操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培養凍存處(chu)理(li)僅供參考，具體(ti)操(cao)作步(bu)驟以隨貨產品(pin)說(shuo)明書為主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細胞(bao)懸液的(de)凍(dong)存管在 37℃水浴中(zhong)迅速搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培養基(ji)混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，加1-2 mL培養基(ji)後吹勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所(suo)有(you)細胞(bao)懸液加入(ru)含適量(liang)培養基(ji)的(de)培養瓶中(zhong)培養過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約8 mL培養基(ji)，培養過夜(ye)）。第二天換液並檢(jian)查細胞(bao)密(mi)度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細胞(bao)密(mi)度達 80%-90%，即可(ke)進行傳(chuan)代(dai)培養。

a、棄(qi)去(qu)培養上清，用(yong)不含鈣、鎂離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶中(zhong)，使(shi)消化(hua)液浸潤所(suo)有(you)細胞(bao)，將(jiang)培養瓶置(zhi)於37℃培養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情(qing)況(kuang)而定），然後在顯微(wei)鏡下(xia)觀察細胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變圓並脫落(luo)，迅速拿回(hui)操作(zuo)臺，輕敲幾下培養瓶後加2-3ml培養基(ji)終止消化(hua)。輕輕打(da)勻後裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，補(bu)加1-2 mL培養液後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液按(an)1:2比例分(fen)到(dao)新的(de)含8 mL培養基(ji)的(de)新皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態良好(hao)時(shi)，可(ke)進行細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xi)胞(bao)及細胞(bao)培養液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞(bao)計數。

b、根(gen)據細胞(bao)數(shu)量(liang)加入(ru)無(wu)血清細胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存管凍(dong)存1mL細胞(bao)懸液，註(zhu)意(yi)凍存管做好(hao)標識。將(jiang)凍(dong)存管放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍存管位(wei)置(zhi)以便(bian)下次拿取。

公(gong)司(si)正在出(chu)售的(de)產品(pin)：

真(zhen)菌(jun)/酵(jiao)母(mu)細胞(bao)亞鹽還(hai)原(yuan)酶(mei)總活(huo)性(xing)比色(se)法(fa)定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

直接細(xi)胞(bao)克(ke)隆兩步(bu)法(fa)逆(ni)轉錄(lu)PCR試(shi)劑盒

植物(wu)葉片(pian)原(yuan)生(sheng)質(zhi)細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)試(shi)劑盒

石(shi)蠟(la)切片(pian)組織(zhi)GSK-3BETA蛋白表(biao)達NBT顯色(se)光學顯微(wei)鏡檢(jian)測試(shi)劑盒

通用(yong)型(xing)羊約(yue)尼(ni)氏病(bing)/副(fu)結(jie)核(he)分(fen)枝(zhi)桿(gan)菌（Mycobacterium paratuberculosis /Johne’s disease）基(ji)因檢(jian)測試(shi)劑盒

細菌(jun)鉀(jia)離(li)子(zi)（K）濃(nong)度化(hua)學比色(se)法(fa)定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

細胞(bao)半乳(ru)糖(tang)總(zong)含量(liang)酶(mei)連(lian)續循環(huan)反(fan)應(ying)比色(se)法(fa)定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

細胞(bao)內(nei)氧(yang)化(hua)8-氧(yang)脫(tuo)氧(yang)鳥(niao)苷（8-oxo-dG）比色(se)法(fa)測定試(shi)劑盒

Bouin固著(zhe)液

小腸結(jie)腸(chang)炎(yan)耶爾(er)森氏菌(jun)（Yersinia enterocolitica）鑒(jian)定

石(shi)蠟(la)切片(pian)組織(zhi)PDGF-A蛋白表(biao)達熒光顯微(wei)鏡檢(jian)測試(shi)劑盒

糖類(lei)D-半乳(ru)糖(tang)含量(liang)光譜法(fa)定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

石(shi)蠟(la)切片(pian)組蛋白H3-K4甲基(ji)化(hua)免疫組(zu)化(hua)定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

組織(zhi)JNK2激酶(mei)活性(xing)定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒（A/B/C）

EDTA鈉(na)血液抗(kang)凝液

脂肪(fang)細胞(bao)膜(mo)相關蛋白抗(kang)體(ti)

睪丸核(he)蛋白NUT抗體(ti)

人血管(guan)內(nei)皮(pi)生(sheng)長因子(zi)單(dan)克隆(long)抗(kang)體(ti)

LSM4蛋白抗(kang)體(ti)

細胞(bao)外信號(hao)調節(jie)激酶(mei)5抗體(ti)

癌(ai)/睪丸抗(kang)原(yuan)11.9抗(kang)體(ti)

淋巴細(xi)胞(bao)趨(qu)化(hua)因子CCL21/Exodus 2抗體

M-NFS-60細胞(bao)B淋巴細(xi)胞(bao)白血病(bing)前(qian)體(ti)蛋白轉錄(lu)因(yin)子4抗體

嗅(xiu)覺受體5D14抗(kang)體

三、培養註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後首(shou)先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否(fou)完好(hao)，培養液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上述(shu)現(xian)象(xiang) 發生請及時和我們聯系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關信(xin)息(xi)，如(ru)細胞(bao)形(xing)態、所(suo)用(yong)培養基(ji)、血清比例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確保細(xi)胞(bao)培養條件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由於培養條件(jian)不壹致而導致細胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責任由(you) 客(ke)戶(hu)自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯微(wei)鏡下(xia)觀察細胞(bao)狀(zhuang)態。因運(yun)輸(shu)問(wen)題，部(bu)分(fen)細胞(bao)由(you)於溫(wen)度 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈碰(peng)亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒精(jing)消毒瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細胞(bao)可(ke)以消化(hua)，懸浮細胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻(yun)收集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的(de)培養基(ji)重懸 細胞(bao)，並接種到(dao)新的(de)培養瓶或(huo)培養皿中(zhong)，置(zhi)於培養箱(xiang)中(zhong)進行培養。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同條件(jian)的(de)培養基(ji)用(yong)於細(xi)胞(bao)培養。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態，便於和(he)我(wo)司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交流。由於運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因(yin)，個別敏(min)感細胞(bao)會(hui)出(chu)現(xian)不穩(wen)定的(de)情(qing)況(kuang)，請及時和我們聯系，告知(zhi)細胞(bao) 的(de)具體(ti)情(qing)況(kuang)，以便(bian)我們的(de)技(ji)術人員跟蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該細胞(bao)僅供科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培養基(ji) (灌(guan)液培養基(ji)) 不能再(zai)用(yong)來(lai)培養細胞(bao)，請換用(yong)按(an)照(zhao)說(shuo)明書細胞(bao)培 養條件(jian)新配制(zhi)的(de)培養基(ji)來培養細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後第壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。