MeWo細胞

公(gong)司(si)產(chan)品僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使用、不得(de)用於臨(lin)床診斷(duan)！

壹、商(shang)品介(jie)紹：

1、細胞傳代(dai)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗細胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使之(zhi)脫落，然後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱細胞用 1-2ml 培養基重(zhong)懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培養箱中(zhong)培養；

2、細胞凍存：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗細胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入培(pei)養液終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使之(zhi)脫落，然後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並放(fang)置於(yu)凍存管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍存管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮中(zhong)進行(xing)長期(qi)保存。使用程序

降溫盒(he)可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二、細胞培養操作(zuo)

1) 復蘇細胞：以下細胞培養凍存處理(li)僅供參考(kao)，具體(ti)操作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產品說明(ming)書(shu)為(wei)主。將含有1 mL細胞懸液的凍(dong)存管在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基混合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將所(suo)有(you)細胞懸液加(jia)入含(han)適量培(pei)養基的培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培養過夜（或將(jiang)細胞懸液加(jia)入10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過夜）。第(di)二天(tian)換液(ye)並(bing)檢(jian)查細胞密(mi)度。

2) 細胞傳代(dai)：如(ru)果細胞密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去培養上(shang)清(qing)，用不含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤洗細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使消化(hua)液浸(jin)潤所有細胞，將培養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞消化(hua)情況(kuang)，若細胞大部分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫落，迅(xun)速拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾下培養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝入無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸液按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養基的新(xin)皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培養箱中(zhong)培養。 3) 細胞凍存：待細胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好時，可(ke)進行(xing)細胞凍存。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細胞及細胞培養液，裝入無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細胞計數。

b、根據細胞數量加(jia)入無血(xue)清(qing)細胞凍存液，使細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管凍(dong)存1mL細胞懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管做(zuo)好標識(shi)。將(jiang)凍存管放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮灌儲存。記錄凍存管位(wei)置以便(bian)下次(ci)拿(na)取。

公司(si)正在出售(shou)的產(chan)品：

組織(zhi)NADPH還(hai)原酶(mei)（NADPH Cytochrome C Reductase）活性(xing)

DNA清(qing)除試(shi)劑(ji)盒

植物細胞原生(sheng)質體(ti)轉(zhuan)染試劑(ji)盒

細胞GSK-3ALPHA蛋白表(biao)達熒(ying)光(guang)定(ding)量檢測試(shi)劑(ji)盒

通用型魚傳(chuan)染性胰(yi)腺(xian)壞疽病（Infectious Pancreatic Necrosis；IPN）基因(yin)檢測試(shi)劑(ji)盒

血(xue)液N-乙酰-β-D-氨(an)基糖(tang)苷酶(mei)（NAG）活性(xing)比色(se)法定量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒

組織(zhi)腎素(su)（renin）熒(ying)光(guang)共(gong)振能(neng)量(liang)轉(zhuan)移(yi)法（FRET）定量(liang)檢測試(shi)劑(ji)盒

氧化(hua)8-羥(qiang)基鳥苷（8-OHG）ELISA分析(xi)試劑(ji)盒

乙醇福(fu)爾馬(ma)林固(gu)著(zhe)液(ye)（Formalin-Alcoholic）

耶爾(er)森氏菌(jun)屬（Yersinia）鑒定

冰凍(dong)切片組織(zhi)P38蛋白表(biao)達NBT顯色(se)光學(xue)顯微鏡(jing)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒

蛋類羥(qiang)丁(ding)酸(suan)待測樣(yang)品處理(li)試劑(ji)盒

DNA甲(jia)基轉(zhuan)移(yi)酶(mei)-1（DNMT-1）活性(xing)酶(mei)連(lian)續(xu)循(xun)環(huan)比色(se)法

組織(zhi)IKKα激(ji)酶(mei)活性(xing)定量檢測試(shi)劑(ji)盒（A/B/C）

血(xue)影細胞膜(mo)尼(ni)羅紅(hong)熒(ying)光(guang)染色(se)試劑(ji)盒

脂(zhi)肪(fang)酸(suan)結合蛋白9抗體(ti)

調節細胞雕(diao)亡誘(you)導(dao)和腫瘤抑(yi)制(zhi)基因(yin)抗體(ti)

人(ren)乳(ru)頭瘤(liu)病毒(du)16型L2抗體(ti)

LRRC41蛋白抗體(ti)

細胞外基質蛋白FRAS1抗體(ti)

κ-酪蛋白抗體(ti)

淋(lin)巴(ba)細胞功能(neng)相(xiang)關(guan)抗原-3抗體(ti)

MeWo細胞BUP小(xiao)鼠(shu)單(dan)抗

嗅覺(jiao)受(shou)體(ti)52W1抗體(ti)

三、培(pei)養註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細胞瓶(ping)是否完(wan)好，培養液是否有(you)漏液、渾(hun)濁等現象，若有上(shang)述(shu)現(xian)象 發生(sheng)請及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細胞說明(ming)書(shu)，了(le)解細胞相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如細胞形態、所(suo)用培養基、血(xue)清(qing)比例(li)、所需 細胞因(yin)子(zi)等，確(que)保(bao)細胞培養條件(jian)壹致(zhi)，若由(you)於培(pei)養條件(jian)不(bu)壹致(zhi)而(er)導(dao)致細胞出現(xian)問題，責(ze)任由(you) 客戶(hu)自(zi)行承擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭細胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞狀(zhuang)態。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部分細胞由(you)於溫(wen)度 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰亡破碎形成碎片，是正常(chang)現(xian)象。觀(guan)察(cha)好細胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸浮細胞直(zhi)接(jie)混勻(yun)收(shou)集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養基重(zhong)懸(xuan) 細胞，並接(jie)種到新(xin)的培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿中(zhong)，置於(yu)培養箱中(zhong)進行(xing)培養。

5. 請客戶(hu)用相(xiang)同(tong)條件(jian)的培(pei)養基用於細胞培養。

6. 建議客戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍幾張細胞照片，記錄細胞狀(zhuang)態，便(bian)於和(he)我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流。由(you)於運(yun)輸的原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感細胞會出現(xian)不穩(wen)定的情(qing)況(kuang)，請及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知細胞 的具(ju)體(ti)情況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟蹤回(hui)訪直(zhi)至問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅供科(ke)研(yan)使用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用的培(pei)養基 (灌液培(pei)養基) 不(bu)能(neng)再(zai)用來(lai)培養細胞，請換(huan)用按照說明(ming)書(shu)細胞培 養條件(jian)新(xin)配制(zhi)的培(pei)養基來(lai)培養細胞。     收(shou)到(dao)細胞後(hou)第(di)壹次(ci)傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。