MKN7細(xi)胞

公(gong)司(si)產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研研究(jiu)使用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷！

壹、商(shang)品介紹：

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至覆蓋培養瓶的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液終(zhong)止消化(hua)，再輕輕(qing)吹打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培養基重(zhong)懸，然(ran)後按(an) 1:2 比例進行(xing)分瓶傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細(xi)胞凍存：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至覆蓋培養瓶的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru)培養液終(zhong)

止消化(hua)，輕輕(qing)吹打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍存管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍存管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進行(xing)長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程序

降(jiang)溫盒(he)可直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下(xia)細(xi)胞培養凍存處理(li)僅供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體操(cao)作步驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品說明書為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍存管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍，加4 mL培養基混合均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培養基後(hou)吹勻。然(ran)後將所(suo)有(you)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)含(han)適量培養基的(de)培養瓶中(zhong)培養過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約8 mL培養基，培養過夜(ye)）。第(di)二(er)天換液(ye)並(bing)檢查細(xi)胞密度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞密度達(da) 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳代培養。

a、棄(qi)去(qu)培養上清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中(zhong)，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤(run)所有(you)細(xi)胞，將培養瓶置(zhi)於(yu)37℃培養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況而(er)定），然(ran)後在(zai)顯微鏡下觀察細(xi)胞消化(hua)情況，若(ruo)細(xi)胞大(da)部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕(qing)敲幾下(xia)培養瓶後(hou)加2-3ml培養基終(zhong)止消化(hua)。輕輕(qing)打勻後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養液後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例分(fen)到(dao)新的(de)含(han)8 mL培養基的(de)新皿中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞凍存：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時，可進行(xing)細(xi)胞凍存。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞及細(xi)胞培養液，裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據細(xi)胞數(shu)量加入(ru)無(wu)血(xue)清細(xi)胞凍存液，使(shi)細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支(zhi)凍存管凍存1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍存管做好標(biao)識(shi)。將凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存管位置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售的(de)產品：

植(zhi)物(wu)谷(gu)氨酰(xian)半合成酶(mei)（glutamyl systeine synthetase）活性(xing)比色(se)法(fa)定量檢測試劑盒

純化(hua)RNA樣(yang)品儲(chu)存(cun)液(ye)

植(zhi)物(wu)組(zu)織(zhi)可(ke)溶(rong)性(xing)總(zong)蛋白(bai)制備(bei)試劑盒

載(zai)玻片(pian)細(xi)胞GSK-3BETA蛋(dan)白(bai)表達(da)熒(ying)光(guang)顯微鏡檢測試劑盒

通用(yong)型(xing)羊進行(xing)性肺(fei)炎（Ovine progressive pneumonia）

血(xue)液鉀(jia)離(li)子（K）濃度化(hua)學比色(se)法(fa)定量檢測試劑盒

體(ti)液無(wu)機(ji)磷/遊(you)離(li)磷酸(suan)根離(li)子比色(se)法(fa)定量檢測試劑盒

細(xi)胞內(nei)氧(yang)化(hua)8-氧(yang)鳥(niao)苷(gan)（8-oxo-G）流式(shi)細(xi)胞分(fen)析試劑盒

Zinc固(gu)著(zhe)液(ye)

大(da)腸彎曲桿菌(jun)（Campylobacter coli）鑒(jian)定

P38蛋(dan)白(bai)免(mian)疫(yi)共沈(chen)澱(dian)分(fen)析試劑盒

食物(wu)乳(ru)糖含(han)量酶(mei)連(lian)續反應(ying)光(guang)譜(pu)法定量檢測試劑盒

植(zhi)物(wu)染色(se)質甲(jia)基化(hua)酶(mei)（chromomethylase）活性(xing)酶(mei)連(lian)續循(xun)環(huan)

細(xi)胞IRAK4激(ji)酶(mei)活性(xing)定量檢測試劑盒（A/B/C）

CD56-PE

脂肪(fang)酸(suan)酰胺水(shui)解(jie)酶(mei)2抗體(ti)

睪丸雕亡(wang)基因(yin)抗體(ti)

人(ren)輕鏈單(dan)克(ke)隆(long)抗體(ti)

LSM10相(xiang)關(guan)蛋白(bai)抗體(ti)

細(xi)胞外(wai)基(ji)質底(di)物(wu)反應(ying)蛋(dan)白(bai)2抗體(ti)

阿(e)片(pian)樣(yang)物(wu)質結合蛋白(bai)/細(xi)胞粘(zhan)附分(fen)子樣(yang)蛋白(bai)抗體(ti)

淋(lin)巴(ba)細(xi)胞抗原(yuan)6重(zhong)復位點蛋(dan)白(bai)G6F抗體(ti)

MKN7細(xi)胞B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞白(bai)血病(bing)/淋(lin)巴(ba)瘤(liu)11/鋅指蛋(dan)白(bai)856抗體(ti)

嗅覺(jiao)受體5AU12抗體(ti)

三、培養註(zhu)意事項 

1. 收到(dao)細(xi)胞後(hou)首(shou)先觀察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否完(wan)好，培養液是(shi)否有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁等現(xian)象，若(ruo)有(you)上(shang)述現象 發(fa)生(sheng)請(qing)及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息，如細(xi)胞形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培養基、血(xue)清比例、所(suo)需 細(xi)胞因(yin)子等，確(que)保(bao)細(xi)胞培養條件壹致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培養條件不(bu)壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞出(chu)現問(wen)題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶自行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微鏡下觀察細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸(shu)問題，部分細(xi)胞由(you)於(yu)溫度(du) 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀察好細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消毒瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可(ke)以(yi)消化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接(jie)混勻收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培養基重(zhong)懸 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培養瓶或(huo)培養皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培養。

5. 請(qing)客戶用(yong)相(xiang)同條件的(de)培養基用(yong)於(yu)細(xi)胞培養。

6. 建議(yi)客戶收到(dao)細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天各拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司(si)技術(shu)部溝通 交流。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因(yin)，個別敏(min)感(gan)細(xi)胞會出(chu)現不(bu)穩定的(de)情況，請(qing)及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告知細(xi)胞 的(de)具體情(qing)況，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的(de)技術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤回(hui)訪直(zhi)至問題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供(gong)科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸(shu)用(yong)的(de)培養基 (灌(guan)液培養基) 不(bu)能再用(yong)來(lai)培養細(xi)胞，請(qing)換用(yong)按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞培 養條件新配(pei)制的(de)培養基來(lai)培養細(xi)胞。     收到(dao)細(xi)胞後(hou)第(di)壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。