MKPL-1細(xi)胞(bao)

公司產品(pin)僅供(gong)科研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於臨床(chuang)診斷！

壹、商(shang)品(pin)介紹：

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕(qing)輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重懸，然(ran)後按(an) 1:2 比例進(jin)行(xing)分(fen)瓶傳代，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入培(pei)養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放(fang)置於凍存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍存(cun)管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過夜，24h 後轉入液(ye)氮(dan)中(zhong)進行長期保(bao)存(cun)。使用(yong)程(cheng)序

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直接(jie)放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存(cun)處理僅供(gong)參考(kao)，具體(ti)操作(zuo)步(bu)驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產品(pin)說明書(shu)為主。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培養基混(hun)合均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入含適(shi)量(liang)培養基的培養瓶(ping)中(zhong)培養過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養基，培養過(guo)夜）。第二天(tian)換液(ye)並檢(jian)查細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如果細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳代培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置於37℃培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定），然(ran)後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓並脫(tuo)落(luo)，迅速拿回操(cao)作臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後裝入無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例分(fen)到(dao)新(xin)的含8 mL培養基的新(xin)皿中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置於培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生長狀態(tai)良好(hao)時，可(ke)進行(xing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝入無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入無血清細(xi)胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍存(cun)管做好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄凍存(cun)管位(wei)置以(yi)便下次(ci)拿(na)取(qu)。

公司正在出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

植(zhi)物鹽還(hai)原(yuan)酶活性比色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

mRNA純(chun)化樹(shu)脂再生試劑盒(he)

多糖(tang)/多酚(fen)植(zhi)物組織蛋白制(zhi)備(bei)預處理試(shi)劑(ji)盒

冰(bing)凍切片組織GSK-3BETA蛋白表達(da)熒光顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢測試劑(ji)盒(he)

通用(yong)型(xing)羊(yang)布氏(shi)桿(gan)菌（Brucella abortus ）基因(yin)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

體(ti)液(ye)鉀(jia)離(li)子(zi)（K）濃(nong)度(du)化學比色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

環境無機(ji)磷(lin)/遊(you)離(li)磷(lin)酸根離子(zi)比色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

氧化8-氧鳥(niao)苷(gan)（8-oxo-G）ELISA分(fen)析(xi)試劑盒(he)

Formol sublimate固(gu)著(zhe)液(ye)

蠟質(zhi)芽(ya)孢桿(gan)菌（Bacillus cereus）鑒(jian)定

P38蛋白表達(da)ELISA定量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)培(pei)養基乳糖(tang)含量(liang)酶連續反應(ying)光譜法(fa)定量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

比色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒

組(zu)織IRAK4激(ji)酶活性定量(liang)檢測(ce)試劑(ji)盒（A/B/C）

CD69

脂(zhi)肪(fang)酸轉運蛋白5抗(kang)體

睪(gao)丸(wan)發(fa)育(yu)蛋白SPATA16抗(kang)體

人(ren)微(wei)管相(xiang)關(guan)蛋白Tau-4單克隆(long)抗(kang)體

LSM11蛋白抗(kang)體

細(xi)胞(bao)外(wai)基質(zhi)金(jin)屬(shu)誘(you)導因(yin)子抗(kang)體

阿片樣物質(zhi)生長因(yin)子受體(ti)樣蛋白1抗(kang)體

淋(lin)巴細(xi)胞(bao)抗(kang)原(yuan)75（CD205）抗(kang)體

MKPL-1細(xi)胞(bao)B淋(lin)巴細(xi)胞(bao)白血病(bing)/淋(lin)巴瘤(liu)11B抗(kang)體

嗅覺(jiao)受體(ti)5AU17抗(kang)體

三(san)、培養註(zhu)意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好，培養液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏液(ye)、渾(hun)濁等現(xian)象，若(ruo)有上述(shu)現(xian)象 發(fa)生請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信息，如細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養基、血清比例、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件(jian)壹致(zhi)，若由於培養條(tiao)件(jian)不(bu)壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問題，責任(ren)由 客戶自(zi)行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸(shu)問題，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由於溫(wen)度(du) 變化及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡破碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片，是正常現(xian)象。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於 37℃培養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的培(pei)養基重懸 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種到(dao)新(xin)的培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中(zhong)，置於培養箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培養。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相(xiang)同條件(jian)的培(pei)養基用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議(yi)客戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照片，記錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和(he)我(wo)司技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由於運輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏感細(xi)胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩定的情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的技術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤回訪直至問題解決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供(gong)科研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養基 (灌液(ye)培(pei)養基) 不(bu)能再用(yong)來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)，請(qing)換用(yong)按(an)照說明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件(jian)新(xin)配制(zhi)的(de)培(pei)養基來培養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第壹次(ci)傳代建議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個10cm 皿。