LU65B細胞(bao)

公司產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)研研究(jiu)使用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於臨床診斷(duan)！

壹、商(shang)品(pin)介(jie)紹：

1、細胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆蓋培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)下觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後(hou)加入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打細胞(bao)使(shi)之脫落，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸，然後(hou)按 1:2 比例進行(xing)分瓶(ping)傳代，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生(sheng)長至覆蓋培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)下觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後(hou)加入(ru)培養(yang)液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹打細胞(bao)使(shi)之脫落，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先將細胞(bao)凍(dong)存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中進行(xing)長期保(bao)存。使用(yong)程(cheng)序

降溫(wen)盒可直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下細胞(bao)培養(yang)凍(dong)存處理僅供(gong)參考(kao)，具體操(cao)作步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主。將含有1 mL細(xi)胞懸液(ye)的(de)凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速搖(yao)晃解凍(dong)，加4 mL培養(yang)基混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將所有細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量(liang)培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過夜（或將細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基，培養(yang)過夜）。第(di)二(er)天換液(ye)並檢查(zha)細(xi)胞密度。

2) 細胞傳代：如果(guo)細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳代培養(yang)。

a、棄去培養(yang)上清，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤所有細(xi)胞，將培養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情況(kuang)而定(ding)），然後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打勻後(hou)裝入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將細胞(bao)懸液(ye)按1:2比例分到(dao)新(xin)的含8 mL培養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中或者瓶中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生長狀態(tai)良(liang)好時(shi)，可進行(xing)細胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為例；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及細胞培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上清液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞(bao)計數。

b、根據細胞(bao)數(shu)量加入(ru)無血(xue)清細胞(bao)凍(dong)存液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞(bao)懸液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲存。記錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

組織(zhi)3－羥－3－甲戊二(er)酰（HMG－COA）還(hai)原酶(mei)活性間接比色法

PCR反應試劑專題(ti)

大量(liang)腺(xian)病(bing)毒(du)沈澱(dian)法(fa)純(chun)化(hua)試(shi)劑盒

IL蛋(dan)白(bai)表達西(xi)方(fang)雜(za)交(jiao)分(fen)析試劑盒

細胞(bao)牛(niu)病毒(du)性腹(fu)瀉(xie)病毒(du)II型（Bovine Viral Diarrhoea Virus -2；BVDV-2）定(ding)量PCR擴(kuo)增(zeng)檢測試(shi)劑盒

細胞(bao)高(gao)密度脂蛋(dan)白(bai)（HDL-Cholesterol）酶(mei)連(lian)續(xu)循(xun)環比色法定(ding)量檢測試(shi)劑盒

細胞(bao)組(zu)蛋(dan)白(bai)乙酰轉(zhuan)移(yi)酶(mei)（HAT）總(zong)活性熒光(guang)定(ding)量檢測試(shi)劑盒

組織(zhi)內(nei)蛋(dan)白(bai)氧(yang)化(hua)（羰基(ji)化(hua)；carbonyl）熒光(guang)檢測試(shi)劑盒

抗原保(bao)護(hu)固著(zhe)液(ye)（10％中性(xing)Formalin 固著(zhe)液(ye)）

細菌過氧(yang)化(hua)氫酶(mei)檢測試(shi)劑盒

石蠟切(qie)片(pian)組織PARP蛋(dan)白(bai)表達NBT顯色光(guang)學(xue)顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢測試(shi)劑盒

牛乳(ru)體細胞(bao)分(fen)離試劑(ji)盒

大鼠(shu)ERβ基因(yin)甲基(ji)化(hua)檢測試(shi)劑盒

細胞(bao)CDK7/CYCLIN H激(ji)酶(mei)活性定(ding)量檢測試(shi)劑盒（A/B/C）

單核白(bai)細(xi)胞(bao)/淋巴細胞分離(li)試(shi)劑(ji)盒

脂多糖(tang)誘(you)導(dao)腫瘤(liu)壞(huai)死因(yin)子α抗體

高(gao)分(fen)子量激(ji)肽(tai)原輕鏈抗體

人類(lei)皰(pao)疹病毒(du)8抗體

LIX1抗體

細胞(bao)色素氧(yang)化(hua)酶(mei)裝(zhuang)配(pei)因(yin)子PET112抗體

γ-谷氨(an)酰轉(zhuan)肽(tai)酶(mei)7輕鏈抗體

鏈激(ji)酶(mei)抗體

LU65B細胞BOLA1蛋(dan)白(bai)抗體

嗅覺(jiao)受體51A7抗體

三、培養(yang)註意事項 

1. 收到(dao)細(xi)胞後(hou)首先觀(guan)察細(xi)胞瓶(ping)是否完好(hao)，培養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述現(xian)象 發(fa)生請(qing)及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解細胞(bao)相關(guan)信(xin)息(xi)，如細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用(yong)培養(yang)基、血(xue)清比例、所需(xu) 細胞因(yin)子等，確保(bao)細(xi)胞培養(yang)條件(jian)壹致(zhi)，若由(you)於(yu)培養(yang)條件(jian)不(bu)壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞(bao)出(chu)現(xian)問題(ti)，責任由 客(ke)戶自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下觀(guan)察細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸(shu)問題(ti)，部分(fen)細胞(bao)由於溫度 變化(hua)及劇烈(lie)碰(peng)亡破碎形成(cheng)碎片，是正(zheng)常現(xian)象。觀(guan)察好(hao)細胞(bao)狀態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置(zhi)於 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞可以(yi)消化(hua)，懸浮細(xi)胞直(zhi)接混勻(yun)收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培養(yang)基重(zhong)懸 細胞(bao)，並接種到新(xin)的(de)培養(yang)瓶或培養(yang)皿(min)中，置於(yu)培養(yang)箱(xiang)中進行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的(de)培養(yang)基用(yong)於(yu)細(xi)胞培養(yang)。

6. 建議客(ke)戶收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)前 3 天各(ge)拍(pai)幾張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我(wo)司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運輸(shu)的原因(yin)，個別敏(min)感(gan)細胞(bao)會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的情況(kuang)，請(qing)及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細胞(bao) 的具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的技術人員跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直至問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供(gong)科(ke)研使用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的(de)培養(yang)基 (灌液(ye)培養(yang)基) 不(bu)能再用來培養(yang)細胞(bao)，請(qing)換用(yong)按照說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培 養(yang)條件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基來(lai)培養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞後(hou)第(di)壹次(ci)傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個10cm 皿(min)。