LU65C細(xi)胞(bao)

公司(si)產(chan)品僅(jin)供科(ke)研研究使用、不得用於(yu)臨床診(zhen)斷！

壹(yi)、商(shang)品介(jie)紹：

1、細胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入 5ml 培養(yang)

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再輕輕吹打細胞(bao)使之脫落，然後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然後(hou)按 1:2 比例(li)進(jin)行分(fen)瓶(ping)傳代，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入培養(yang)液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹打細胞(bao)使之脫落，然後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞(bao)，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍存(cun)管(guan)中；

4）先將細胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移(yi)入-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)中進行長期(qi)保(bao)存(cun)。使用程序

降(jiang)溫(wen)盒可直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二、細胞(bao)培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理僅(jin)供參(can)考，具(ju)體(ti)操作步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產品說(shuo)明書(shu)為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水浴(yu)中迅速搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹勻。然後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入含(han)適(shi)量培養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過夜（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入10 cm皿中，加入約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過夜）。第二(er)天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢查細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即可進(jin)行傳代培養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上(shang)清(qing)，用不含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子的PBS潤(run)洗(xi)細胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中，使消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫落，迅速拿(na)回(hui)操作臺，輕敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按1:2比例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態良好時(shi)，可進(jin)行細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據細(xi)胞(bao)數(shu)量加入無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管(guan)做好標(biao)識。將凍存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下次拿(na)取。

公司(si)正(zheng)在出售(shou)的產(chan)品：

血液(ye)3－羥(qiang)－3－甲(jia)戊二(er)酰（HMG－COA）還(hai)原酶(mei)活性(xing)間接(jie)比(bi)色法

10倍(bei)PCR緩沖(chong)液(ye)

重(zhong)組(zu)腺(xian)病毒(du)效(xiao)價(jia)溶(rong)斑(ban)測定試劑盒

IL蛋白(bai)免疫共(gong)沈(chen)澱(dian)分(fen)析(xi)試劑盒

組織牛(niu)病毒(du)性(xing)腹瀉(xie)病毒(du)II型（Bovine Viral Diarrhoea Virus -2；BVDV-2）定量PCR擴增(zeng)檢(jian)測試劑盒

組織高密(mi)度(du)脂蛋白（HDL-Cholesterol）酶(mei)連續(xu)循(xun)環比色法定(ding)量檢測(ce)試劑盒

組織組(zu)蛋(dan)白乙(yi)酰轉(zhuan)移(yi)酶(mei)（HAT）總活性(xing)熒光(guang)定(ding)量檢測(ce)試劑盒

血液(ye)蛋(dan)白氧(yang)化（羰(tang)基(ji)化；carbonyl）熒光(guang)檢(jian)測(ce)試劑盒

免疫熒光(guang)樣(yang)品固(gu)著液(ye)（Michel固(gu)著液(ye)）

細菌(jun)鹽(yan)還(hai)原酶(mei)總活性(xing)比色法定(ding)量檢測(ce)試劑盒

細胞(bao)PARP蛋白(bai)表(biao)達比(bi)色法定(ding)量檢測(ce)試劑盒

牛(niu)乳體(ti)細胞(bao)總分(fen)離(li)試劑盒

小鼠(shu)MLH1基因(yin)甲(jia)基(ji)化檢(jian)測(ce)試劑盒

組織CDK7/CYCLIN H激(ji)酶(mei)活性(xing)定量檢測(ce)試劑盒（A/B/C）

多核(he)白(bai)細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)試劑盒

脂閥(fa)結(jie)構蛋白1單(dan)克隆(long)抗(kang)體(ti)

高分(fen)子量神經(jing)絲蛋白抗(kang)體(ti)

人類(lei)皰(pao)疹(zhen)病毒(du)8抗(kang)體(ti)/皰(pao)疹(zhen)病毒(du)8型

Lix1樣蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)

細胞(bao)生(sheng)長調(tiao)節(jie)蛋白CGREF1抗(kang)體(ti)

γ-谷氨(an)酰轉(zhuan)肽(tai)酶(mei)7重(zhong)鏈(lian)抗(kang)體(ti)

鏈酶(mei)親和(he)素抗(kang)體(ti)

LU65C細胞(bao)BOLA2蛋白抗(kang)體(ti)

嗅(xiu)覺(jiao)受體(ti)51B2抗(kang)體(ti)

三、培養(yang)註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否(fou)完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是(shi)否有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等現(xian)象(xiang)，若有(you)上(shang)述現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細胞(bao)形(xing)態、所用培養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等(deng)，確(que)保(bao)細胞(bao)培養(yang)條件(jian)壹(yi)致(zhi)，若由於(yu)培養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導致細胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題，責(ze)任(ren)由 客戶(hu)自(zi)行承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分(fen)細胞(bao)由於(yu)溫度 變(bian)化及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎形(xing)成碎(sui)片(pian)，是正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)可以(yi)消(xiao)化，懸浮(fu)細胞(bao)直(zhi)接(jie)混(hun)勻收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮的培養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的培養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿中，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中進行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用相同(tong)條件(jian)的培養(yang)基(ji)用於(yu)細胞(bao)培養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天各(ge)拍幾張細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司技(ji)術部(bu)溝通 交流。由於(yu)運輸的原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏感(gan)細胞(bao)會出(chu)現(xian)不穩(wen)定的情(qing)況(kuang)，請及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技(ji)術人員跟蹤回(hui)訪(fang)直至問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該細胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研使用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的培養(yang)基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不能再用來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)，請換(huan)用按照說(shuo)明書(shu)細胞(bao)培 養(yang)條件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第壹(yi)次傳代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。