HCC1143細胞(bao)

公(gong)司(si)產品僅供科(ke)研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品(pin)介(jie)紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再輕(qing)輕(qing)吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱細胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸，然後(hou)按(an) 1:2 比例(li)進行分瓶傳代(dai)，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞(bao)，並(bing)放(fang)置(zhi)於凍(dong)存管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存管(guan)放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中進行長(chang)期(qi)保存。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存處(chu)理僅供參(can)考，具體(ti)操(cao)作步驟以隨(sui)貨(huo)產品說明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的凍(dong)存管(guan)在 37℃水浴中迅速搖(yao)晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合均勻。在(zai)1000 rpm條件下離(li)心3 min，棄去(qu)上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所有(you)細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜（或將細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第二天換(huan)液(ye)並(bing)檢查細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即可進行傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上清，用不(bu)含鈣、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸潤所(suo)有(you)細胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於37℃培(pei)養(yang)箱中消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定），然後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡下觀察(cha)細胞(bao)消化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分變圓並(bing)脫(tuo)落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打勻後(hou)裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比例(li)分到新的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中或者(zhe)瓶中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生長(chang)狀態(tai)良好(hao)時，可進行細胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件下離(li)心4 min，棄去(qu)上清液，用PBS清洗壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標識。將(jiang)凍(dong)存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管(guan)位置(zhi)以便下次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司(si)正在出(chu)售的(de)產品：

細(xi)胞(bao)半-13（CASPASE-13）活(huo)性(xing)比色法定量(liang)檢測試劑(ji)盒

10%蛋(dan)白電泳(yong)分(fen)離(li)預制膠(jiao)溶(rong)液(ye)

果(guo)蠅(ying)細胞(bao)凍(dong)存試劑(ji)盒

HISTONE H3蛋(dan)白免(mian)疫共沈(chen)澱分析(xi)試劑(ji)盒

植(zhi)物(wu)源性(xing)食(shi)品(pin)山(shan)核(he)桃(tao)（pecan）基(ji)因檢測試劑(ji)盒

10倍TBS濃縮(suo)緩沖溶液(ye)

組織(zhi)糖原磷(lin)酸(suan)化酶(mei)a（GLYCOGEN PHOSPHORYLASE）活性

細胞(bao)內氧化應(ying)激活(huo)性氧（ROS）高(gao)質綠(lv)色(se)熒(ying)光測定試劑(ji)盒

冰凍(dong)切片(pian)澱粉樣蛋(dan)白（AMYLOID）染(ran)色試劑(ji)盒

HVA高(gao)效(xiao)液(ye)相色(se)譜(pu)電化學定量(liang)檢測試劑(ji)盒

?細胞(bao)COLLAGEN III蛋(dan)白表(biao)達熒(ying)光定量(liang)檢測試劑(ji)盒

嬰兒(er)配方食(shi)品(pin)U（S-Methylmethionine）比色法定量(liang)檢測試劑(ji)盒

載玻(bo)片(pian)細(xi)胞(bao)COLLAGEN I蛋(dan)白表(biao)達熒(ying)光顯微(wei)鏡檢測試劑(ji)盒

體液(ye)基質金屬（MMP-9）明(ming)膠(jiao)法比色定量(liang)檢測試劑(ji)盒

動物(wu)細胞(bao)/組織(zhi)高(gao)質純化線(xian)粒(li)體分(fen)離(li)試劑(ji)盒

粘脂蛋(dan)白3抗體

肝癌(ai)新基(ji)因3蛋(dan)白抗體

缺氧誘(you)導(dao)基因1蛋(dan)白/HIGD1A抗體

KIAA0195蛋(dan)白抗體

細胞(bao)角蛋(dan)白5+6抗體

α-L巖藻(zao)糖苷酶(mei)抗體

辣椒(jiao)素受(shou)體樣蛋(dan)白1抗體

HCC1143細(xi)胞(bao)ATP依(yi)賴RNA解(jie)旋(xuan)酶(mei)DDX41抗體

鋅(xin)指(zhi)蛋(dan)白ZBTB6抗體

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細胞(bao)後(hou)首先(xian)觀察(cha)細胞(bao)瓶是(shi)否完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是(shi)否有(you)漏液、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有(you)上述(shu)現(xian)象 發生(sheng)請(qing)及(ji)時和(he)我們聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細胞(bao)說明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信息，如(ru)細胞(bao)形態、所(suo)用培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比例(li)、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因子等(deng)，確保細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由(you)於培(pei)養(yang)條件(jian)不(bu)壹致而(er)導(dao)致細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問題(ti)，責(ze)任由(you) 客(ke)戶自(zi)行承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭細胞(bao)瓶表面，顯微(wei)鏡下觀察(cha)細胞(bao)狀態(tai)。因運(yun)輸問題(ti)，部分(fen)細胞(bao)由(you)於溫度(du) 變化及(ji)劇烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎(sui)片，是(shi)正常(chang)現(xian)象。觀察(cha)好(hao)細胞(bao)狀態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒瓶壁將 T25 瓶置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可以消化，懸(xuan)浮細胞(bao)直接(jie)混(hun)勻(yun)收集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基重(zhong)懸 細胞(bao)，並(bing)接(jie)種到新的培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱中進行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用相同(tong)條件的培(pei)養(yang)基用(yong)於細胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶收到細胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細胞(bao)狀態(tai)，便於和(he)我司技術(shu)部(bu)溝通(tong) 交流。由(you)於運(yun)輸的原因，個別敏感(gan)細胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩定的情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和(he)我們聯系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具體(ti)情(qing)況(kuang)，以便我們的技(ji)術(shu)人員跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直至問題(ti)解決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用的(de)培(pei)養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)養(yang)基) 不(bu)能再用來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換用(yong)按(an)照說明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條件(jian)新(xin)配制的培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收到細胞(bao)後(hou)第壹(yi)次(ci)傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。