更新時間(jian):2025-11-29
Y1HGold 感受態細(xi)胞100ul*50 菌(jun)株(zhu)壹(yi)種常用於質(zhi)粒(li)克(ke)隆(long)的(de)菌(jun)株(zhu)。其(qi)φ80lacZΔM15基(ji)因(yin)的(de)產(chan)物可(ke)與pUC載體(ti)編(bian)碼的(de)b-半乳(ru)糖(tang)苷酶(mei)氨(an)基(ji)端(duan)實現(xian)a互補,可(ke)用於藍白斑篩選(xuan)。recA1和(he)endA1 的(de)突變(bian)有利(li)於克(ke)隆(long)DNA 的(de)穩(wen)定(ding)和(he)高純度質粒DNA的(de)提(ti)取(qu)。
Y1HGold 感受態細(xi)胞100ul*50 操(cao)作方法(以(yi)下操(cao)作均按無(wu)菌條(tiao)件(jian)的(de)標(biao)準(zhun)進(jin)行)
1 取(qu)感受態細(xi)胞置於冰(bing)浴(yu)中,如需分裝(zhuang)可將(jiang)剛(gang)融(rong)化(hua)細(xi)胞懸液分裝(zhuang)到無(wu)菌預(yu)冷(leng)的(de)離心管中,置於冰(bing)浴(yu)中。
● 壹次(ci)轉化(hua)感受態細(xi)胞的(de)建(jian)議用(yong)量(liang)為(wei)50-100 μl,可(ke)以(yi)根據實際(ji)情況分裝(zhuang)使(shi)用(yong)。應(ying)註(zhu)意所(suo)用(yong)DNA 體(ti)積(ji)不(bu)要超過(guo)感受態細(xi)胞懸液體(ti)積(ji)的(de)十(shi)分之壹。
以(yi)下實(shi)驗以(yi)100 μl感受態細(xi)胞為(wei)例。
Y1HGold 感受態細(xi)胞100ul*50 2 向(xiang)感受態細(xi)胞懸液中(zhong)加(jia)入目的(de)DNA(100 μl 的(de)感受態細(xi)胞能(neng)夠被1 ng 超(chao)螺(luo)旋(xuan)質粒(li)DNA 所(suo)飽和(he)),輕輕旋(xuan)轉離心管以(yi)混勻內容物,在(zai)冰(bing)浴(yu)中靜置30 分鐘。
3 將離心管置於42℃水(shui)浴中(zhong)放置60-90 秒(miao),然(ran)後快(kuai)速(su)將(jiang)管(guan)轉(zhuan)移(yi)到(dao)冰(bing)浴(yu)中,使(shi)細(xi)胞冷(leng)卻(que)2-3 分鐘,該過程不(bu)要搖動(dong)離心管。
4 向每(mei)個離心管中加(jia)入900 μl 無(wu)菌的(de)SOC 或(huo)LB 培養基(不(bu)含抗生(sheng)素(su)), 混勻後置於37℃搖床振(zhen)蕩培養1 小時(160-220 轉/分鐘),目的(de)是(shi)使(shi)質(zhi)粒(li)上(shang)相(xiang)關的(de)抗性標記基(ji)因(yin)表達(da),使(shi)菌(jun)體(ti)復蘇。
Y1HGold 感受態細(xi)胞100ul*50 5 將(jiang)離心管內容物混勻,吸(xi)取(qu)100 μl 已轉化(hua)的(de)感受態細(xi)胞加(jia)到含相應抗生(sheng)素(su)的(de)SOB 或(huo)LB 固(gu)體(ti)瓊脂(zhi)培(pei)養基上,用無(wu)菌的(de)彎頭(tou)玻棒(bang)輕輕的(de)將(jiang)細(xi)胞均勻塗(tu)開(kai)。將平(ping)板置於室溫直(zhi)至(zhi)液體(ti)被(bei)吸(xi)收(shou),倒(dao)置平板,37℃培養12-16 小時。
● 塗布(bu)用(yong)量(liang)可根(gen)據具體(ti)實(shi)驗來(lai)調(tiao)整(zheng)。如(ru)轉(zhuan)化(hua)的(de)DNA 總(zong)量(liang)較多(duo),可取(qu)更少量(liang)轉化(hua)產物塗(tu)布(bu)平(ping)板;反(fan)之(zhi),如轉化(hua)的(de)DNA 總(zong)量(liang)較少,可取(qu)200-300 μl 轉化(hua)產物塗(tu)布(bu)平(ping)板。如果(guo)預(yu)計(ji)的(de)克(ke)隆(long)較少,可通(tong)過(guo)離心(4,000 rpm, 2分鐘)後吸(xi)除(chu)部分培養液,懸浮(fu)菌體(ti)後將(jiang)其塗(tu)布(bu)於壹(yi)個(ge)平板中。(塗布(bu)剩(sheng)余(yu)的(de)菌(jun)液可(ke)置於4℃保(bao)存(cun),如果(guo)次(ci)日(ri)的(de)轉(zhuan)化(hua)菌落(luo)數過少可以(yi)將剩(sheng)下的(de)菌(jun)液再(zai)塗(tu)布(bu)新(xin)的(de)培(pei)養板)
註(zhu)意事(shi)項(xiang)
1. 感受態細(xi)胞應(ying)保存(cun)在(zai) -70℃,不(bu)可多(duo)次(ci)凍融(rong)和(he)放置時間(jian)過(guo)長(chang),以(yi)避(bi)免(mian)降(jiang)低感受態細(xi)胞的(de)轉(zhuan)化(hua)效率。
2. 進(jin)行轉(zhuan)化(hua)操(cao)作時,應根(gen)據相應(ying)溫(wen)度及無(wu)菌條(tiao)件(jian)的(de)要求(qiu)進(jin)行。
3 為(wei)防止轉化(hua)實驗(yan)不(bu)成功(gong),可(ke)以(yi)保留(liu)部(bu)分連(lian)接(jie)反(fan)應(ying)液,以(yi)重(zhong)新轉化(hua),將損(sun)失(shi)降到(dao)低。
以(yi)下是(shi)的(de)相(xiang)關(guan)產(chan)品(pin):
MP-Ab 人(ren)肺炎(yan)支原體(ti)抗體(ti) 規格: 48T/96T
Cpn-Ab 人(ren)肺炎(yan)衣(yi)原體(ti)抗體(ti) 規格: 48T/96T
PARC/CCL18 人(ren)肺部(bu)活(huo)化(hua)調(tiao)節趨化(hua)因(yin)子(zi) 規格: 48T/96T
SP-D 人(ren)肺表面活(huo)性物質(zhi)相關蛋(dan)白D 規格: 48T/96T
SP-C 人(ren)肺表面活(huo)性物質(zhi)相關蛋(dan)白C 規格: 48T/96T
SP-B 人(ren)肺表面活(huo)性物質(zhi)相關蛋(dan)白B 規格: 48T/96T
SP-A 人(ren)肺表面活(huo)性物質(zhi)相關蛋(dan)白A 規格: 48T/96T
人(ren)肺癌(ai)標(biao)誌物ELISA Kit,48T/96T 人(ren)肺癌(ai)標(biao)誌物ELISA Kit,48T/96T 規格: 48T/96T
DR-70TM 人(ren)肺癌(ai)標(biao)誌物DR-70 規格: 48T/96T
LTA 人(ren)非小(xiao)細(xi)胞肺(fei)癌(ai)抗原 規格: 48T/96T
NNE 人(ren)非神(shen)經(jing)元(yuan)性烯(xi)醇化(hua)酶(mei) 規格: 48T/96T
NON 人(ren)非甲基化(hua)寡核(he)苷酸(suan) 規格: 48T/96T
AhR 人(ren)芳香(xiang)烴(ting)受體(ti) 規格: 48T/96T
E1/UBAE 人(ren)泛素(su)激(ji)活(huo)酶(mei) 規格: 48T/96T
Ub 人(ren)泛素(su)蛋(dan)白 規格: 48T/96T
rT3 人(ren)反(fan)*狀腺(xian)原氨(an)酸(suan) 規格: 48T/96T
DNM2 人(ren)發動(dong)蛋(dan)白 規格: 48T/96T
DPPⅣ 人(ren)二(er)肽(tai)基(ji)肽(tai)酶(mei)Ⅳ 規格: 48T/96T
人(ren)二(er)磷酸(suan)尿(niao)核(he)苷葡(pu)糖(tang)醛酸基(ji)轉移(yi)酶(mei)2家(jia)族(zu)肽(tai)B4 人(ren)二(er)磷酸(suan)尿(niao)核(he)苷葡(pu)糖(tang)醛酸基(ji)轉移(yi)酶(mei)2家(jia)族(zu)肽(tai)B4 規格: 48T/96T
SLC/CCL21 人(ren)二(er)級淋(lin)巴組織趨(qu)化(hua)因(yin)子(zi) 規格: 48T/96T
DAO 人(ren)二(er)胺氧化(hua)酶(mei) 規格: 48T/96T
CA 人(ren)兒茶(cha)酚胺 規格: 48T/96T
PMN Elastase 人(ren)多(duo)形核(he)白細(xi)胞彈(dan)性蛋(dan)白酶(mei) 規格: 48T/96T
PMN Elastase 人(ren)多(duo)形核(he)白細(xi)胞彈(dan)性蛋(dan)白酶(mei) 規格: 48T/96T
PTN 人(ren)多(duo)效生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi) 規格: 48T/96T
PTN 人(ren)多(duo)效生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi) 規格: 48T/96T
poly-IgR 人(ren)多(duo)免(mian)疫球蛋(dan)白受體(ti) 規格: 48T/96T
PHSA 人(ren)多(duo)聚血(xue)清(qing)蛋(dan)白 規格: 48T/96T
PARP 人(ren)多(duo)聚ADP核(he)糖(tang)聚合酶(mei) 規格: 48T/96T
DDC 人(ren)多(duo)巴胺脫羧(suo)酶(mei) 規格: 48T/96T
DBH 人(ren)多(duo)巴胺-β羥化(hua)酶(mei) 規格: 48T/96T
D2R 人(ren)多(duo)巴胺D2受體(ti) 規格: 48T/96T
D1R 人(ren)多(duo)巴胺D1受體(ti) 規格: 48T/96T
D1R 人(ren)多(duo)巴胺D1受體(ti) 規格: 48T/96T
DA 人(ren)多(duo)巴胺 規格: 48T/96T
PON 人(ren)對氧磷酶(mei) 規格: 48T/96T
PABA 人(ren)對氨(an)基(ji)苯(ben)甲酸 規格: 48T/96T
Y1HGold 感受態細(xi)胞100ul*50 TE 人(ren)端(duan)粒酶(mei) 規格: 48T/96T
TSST-1 人(ren)毒性休(xiu)克(ke)綜合征(zheng)毒素(su)1 規格: 48T/96T
HDV IgM 人(ren)丁型(xing)肝炎(yan)IgM 規格: 48T/96T