進(jin)口ELISA試劑(ji)盒實驗原(yuan)理(li)：

本試劑(ji)盒應用雙(shuang)抗體夾心法測(ce)定標(biao)本中兔(tu)氧化低密度(du)脂(zhi)蛋(dan)白(bai)（Ox-LDL）水平(ping)。用純(chun)化的(de)兔(tu)氧化低密度(du)脂(zhi)蛋(dan)白(bai)（Ox-LDL）抗體包被微孔(kong)板(ban)，制成固相(xiang)抗體，往包被單(dan)抗的(de)微(wei)孔(kong)中(zhong)依次加(jia)入氧化低密度(du)脂(zhi)蛋(dan)白(bai)（Ox-LDL），再與(yu)HRP標(biao)記的(de)羊(yang)抗兔抗體結(jie)合(he)，形(xing)成抗體-抗原(yuan)-酶標(biao)抗體復合(he)物(wu)，經過(guo)*洗(xi)滌(di)後(hou)加(jia)底物(wu)TMB顯(xian)色(se)。TMB在HRP酶(mei)的(de)催(cui)化下轉(zhuan)化成藍色(se)，並在酸(suan)的(de)作(zuo)用下轉(zhuan)化成*終的(de)黃(huang)色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深(shen)淺和樣品(pin)中(zhong)的(de)氧化低密度(du)脂(zhi)蛋(dan)白(bai)（Ox-LDL）呈(cheng)正相(xiang)關(guan)。用酶標(biao)儀(yi)在450nm波長下(xia)測(ce)定吸光(guang)度(du)（OD值(zhi)），通(tong)過(guo)標(biao)準曲(qu)線計(ji)算(suan)樣品(pin)中(zhong)兔氧化低密度(du)脂(zhi)蛋(dan)白(bai)（Ox-LDL）濃(nong)度(du)。

進(jin)口ELISA試劑(ji)盒性能(neng):
 
1．準確(que)性：標(biao)準品(pin)線性回歸與(yu)預期(qi)濃(nong)度(du)相(xiang)關(guan)系數R值(zhi)，大(da)於(yu)等(deng)於(yu)0.9900。

2．靈(ling)敏度(du)：zui低(di)檢(jian)測濃(nong)度(du)小(xiao)於(yu)10 pg/ml。

3．特(te)異(yi)性：不與(yu)其它可(ke)溶(rong)性結(jie)構(gou)類似(si)物(wu)交(jiao)叉反(fan)應。

4．重(zhong)復性：板(ban)內、板(ban)間(jian)變異(yi)系(xi)數(shu)均小(xiao)於(yu)15%。

進(jin)口ELISA試劑(ji)盒操(cao)作步驟(zhou)：

1. 標(biao)準品(pin)的(de)稀(xi)釋(shi)與(yu)加(jia)樣：在酶(mei)標(biao)包被板(ban)上設標(biao)準品(pin)孔(kong)10孔(kong)，在*、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)分(fen)別加(jia)標(biao)準品(pin)100μl，然(ran)後(hou)在*、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混勻；然(ran)後(hou)從(cong)*孔(kong)、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)各(ge)取100μl分(fen)別加(jia)到(dao)第(di)三(san)孔(kong)和(he)第(di)四(si)孔(kong)，再(zai)在第(di)三(san)、第(di)四(si)孔(kong)分(fen)別加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混勻；然(ran)後(hou)在第(di)三(san)孔(kong)和(he)第(di)四(si)孔(kong)中(zhong)先(xian)各(ge)取50μl棄掉，再(zai)各(ge)取50μl分(fen)別加(jia)到(dao)第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔(kong)中(zhong)，再(zai)在第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔(kong)中(zhong)分(fen)別加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50ul，混勻；混勻後(hou)從第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔(kong)中(zhong)各(ge)取50μl分(fen)別加(jia)到(dao)第(di)七(qi)、第(di)八孔(kong)中(zhong)，再(zai)在第(di)七(qi)、第(di)八孔(kong)中(zhong)分(fen)別加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混勻後(hou)從第(di)七(qi)、第(di)八孔(kong)中(zhong)分(fen)別取50μl加(jia)到(dao)第(di)九(jiu)、第(di)十(shi)孔(kong)中(zhong)，再(zai)在第(di)九(jiu)第(di)十(shi)孔(kong)分(fen)別加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混勻後(hou)從第(di)九(jiu)第(di)十(shi)孔(kong)中(zhong)各(ge)取50μl棄掉。

2. 加(jia)樣：分(fen)別設(she)空(kong)白孔(kong)（空(kong)白對(dui)照(zhao)孔(kong)不加(jia)樣品(pin)及(ji)酶標(biao)試劑(ji)，其余各(ge)步操(cao)作相(xiang)同）、待測(ce)樣品(pin)孔(kong)。在酶(mei)標(biao)包被板(ban)上待測(ce)樣品(pin)孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待(dai)測樣品(pin)10μl（樣品(pin)zui終稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)5倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)於(yu)酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)底部，盡量不觸及孔(kong)壁，輕輕(qing)晃(huang)動(dong)混勻。

3. 溫(wen)育：用封板(ban)膜(mo)封板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。

4. 配液：將(jiang)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌液用蒸(zheng)餾水(shui)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀(xi)釋(shi)後(hou)備用。

5. 洗滌(di)：小心揭(jie)掉(diao)封(feng)板(ban)膜(mo)，棄去液體，甩幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液，靜(jing)置(zhi)30秒(miao)後(hou)棄去，如(ru)此(ci)重(zhong)復5次(ci)，拍幹。

6. 加(jia)酶(mei)：每孔(kong)加(jia)入酶標(biao)試劑(ji)50μl，空(kong)白孔(kong)除(chu)外(wai)。

7. 溫(wen)育(yu)：操(cao)作同3。

8. 洗滌(di)：操(cao)作同5。

9. 顯色(se)：每孔(kong)先(xian)加(jia)入顯色(se)劑(ji)A50μl，再加(jia)入顯色(se)劑(ji)B50μl，輕輕(qing)震蕩(dang)混勻，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)15分(fen)鐘(zhong).

10. 終止(zhi)：每(mei)孔(kong)加(jia)終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反(fan)應（此(ci)時藍色(se)立(li)轉(zhuan)黃色(se)）。