更新(xin)時間(jian):2025-11-29
Y1HGold 感受(shou)態細(xi)胞(bao)100ul*10是采用(yong)大(da)腸(chang)桿菌(jun)經特殊工(gong)藝處(chu)理得(de)到(dao)的(de)感受(shou)態細(xi)胞(bao),可用(yong)於DNA 的(de)化(hua)學轉(zhuan)化(hua)。使(shi)用(yong)pUC19 質粒(li)檢(jian)測(ce),轉化(hua)效率可達(da)108個(ge)轉(zhuan)化(hua)子/μg質粒(li)DNA,-70℃保(bao)存(cun)3個(ge)月轉(zhuan)化(hua)效率可保(bao)持在90%以上(shang)。
Y1HGold 感受(shou)態細(xi)胞(bao)100ul*10 操(cao)作(zuo)方法(以下操(cao)作(zuo)均(jun)按(an)無(wu)菌條件(jian)的(de)標準進行)
1 取(qu)感受(shou)態細(xi)胞(bao)置(zhi)於冰(bing)浴中(zhong),如需(xu)分(fen)裝可(ke)將(jiang)剛(gang)融化(hua)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液分(fen)裝到(dao)無(wu)菌預(yu)冷的(de)離心管(guan)中(zhong),置(zhi)於冰(bing)浴中(zhong)。
● 壹(yi)次轉(zhuan)化(hua)感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)的(de)建(jian)議用(yong)量為(wei)50-100 μl,可以根據(ju)實際(ji)情況(kuang)分(fen)裝使(shi)用(yong)。應註意所用(yong)DNA 體(ti)積(ji)不要(yao)超過(guo)感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)懸(xuan)液體(ti)積(ji)的(de)十分(fen)之(zhi)壹(yi)。
以下實驗(yan)以100 μl感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)為(wei)例。
Y1HGold 感受(shou)態細(xi)胞(bao)100ul*102 向(xiang)感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)懸(xuan)液中(zhong)加入目的(de)DNA(100 μl 的(de)感受(shou)態細(xi)胞(bao)能(neng)夠被1 ng 超螺(luo)旋(xuan)質粒(li)DNA 所(suo)飽(bao)和(he)),輕(qing)輕(qing)旋(xuan)轉離心管(guan)以混(hun)勻內(nei)容物(wu),在冰(bing)浴中(zhong)靜置(zhi)30 分(fen)鐘。
3 將(jiang)離(li)心管(guan)置(zhi)於42℃水(shui)浴(yu)中(zhong)放置(zhi)60-90 秒,然後快速將(jiang)管(guan)轉移到(dao)冰(bing)浴中(zhong),使(shi)細(xi)胞(bao)冷卻2-3 分(fen)鐘,該(gai)過(guo)程(cheng)不要搖(yao)動離心管(guan)。
4 向(xiang)每(mei)個(ge)離心管(guan)中(zhong)加入900 μl 無(wu)菌的(de)SOC 或LB 培養基(不(bu)含(han)抗(kang)生素), 混勻後置(zhi)於37℃搖(yao)床(chuang)振(zhen)蕩(dang)培養1 小時(160-220 轉/分(fen)鐘),目的(de)是使(shi)質粒(li)上(shang)相(xiang)關(guan)的(de)抗性(xing)標記基(ji)因(yin)表(biao)達(da),使(shi)菌(jun)體(ti)復(fu)蘇(su)。
5 將離(li)心管(guan)內容物(wu)混勻,吸(xi)取100 μl 已(yi)轉(zhuan)化(hua)的(de)感受(shou)態細(xi)胞(bao)加到(dao)含(han)相(xiang)應抗生素的(de)SOB 或LB 固(gu)體(ti)瓊脂培養基上(shang),用(yong)無(wu)菌的(de)彎頭(tou)玻(bo)棒(bang)輕輕(qing)的(de)將細(xi)胞(bao)均(jun)勻塗開。將平(ping)板(ban)置(zhi)於室(shi)溫(wen)直(zhi)至(zhi)液體(ti)被吸(xi)收,倒(dao)置(zhi)平板(ban),37℃培養12-16 小時。
Y1HGold 感受(shou)態細(xi)胞(bao)100ul*10● 塗布用(yong)量可根據(ju)具體(ti)實驗(yan)來(lai)調(tiao)整(zheng)。如(ru)轉(zhuan)化(hua)的(de)DNA 總(zong)量較多(duo),可取(qu)更少(shao)量轉化(hua)產物(wu)塗布平板(ban);反(fan)之(zhi),如轉(zhuan)化(hua)的(de)DNA 總(zong)量較少(shao),可取(qu)200-300 μl 轉(zhuan)化(hua)產物(wu)塗布平板(ban)。如(ru)果預(yu)計(ji)的(de)克隆(long)較(jiao)少(shao),可通(tong)過(guo)離(li)心(4,000 rpm, 2分(fen)鐘)後吸(xi)除部分(fen)培養液,懸(xuan)浮(fu)菌(jun)體(ti)後將其(qi)塗布於壹(yi)個(ge)平(ping)板(ban)中(zhong)。(塗布剩余的(de)菌液可(ke)置(zhi)於4℃保(bao)存(cun),如(ru)果次日(ri)的(de)轉化(hua)菌(jun)落(luo)數(shu)過(guo)少(shao)可(ke)以將(jiang)剩下的(de)菌液再(zai)塗布新(xin)的(de)培養板(ban))
註意事(shi)項
1. 感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)應保(bao)存(cun)在(zai) -70℃,不可(ke)多(duo)次凍(dong)融和(he)放置(zhi)時間(jian)過(guo)長(chang),以避免(mian)降低感受(shou)態細(xi)胞(bao)的(de)轉化(hua)效率。
2. 進行轉(zhuan)化(hua)操(cao)作(zuo)時,應根據(ju)相(xiang)應溫(wen)度(du)及無(wu)菌條件(jian)的(de)要求(qiu)進行。
3 為(wei)防(fang)止轉(zhuan)化(hua)實驗(yan)不(bu)成(cheng)功(gong),可(ke)以保(bao)留部分(fen)連接(jie)反(fan)應液,以重(zhong)新(xin)轉(zhuan)化(hua),將(jiang)損失(shi)降到(dao)低。
以下是(shi)的(de)相(xiang)關(guan)產品(pin):
HDV IgG 人丁(ding)型肝炎IgG 規(gui)格(ge): 48T/96T
AZT 人 規(gui)格(ge): 48T/96T
ASK-1 人雕(diao)亡(wang)信(xin)號調(tiao)節(jie)激酶I 規格(ge): 48T/96T
FASL 人雕(diao)亡(wang)相(xiang)關(guan)因(yin)子配體(ti) 規(gui)格(ge): 48T/96T
FAS/CD95 人雕(diao)亡(wang)相(xiang)關(guan)因(yin)子 規格(ge): 48T/96T
βAPP 人澱(dian)粉(fen)樣(yang)前體(ti)蛋(dan)白 規(gui)格(ge): 48T/96T
Amylase 人 規(gui)格(ge): 48T/96T
ETFB 人電子轉移(yi)黃素蛋白β肽 規格(ge): 48T/96T
FⅧAg 人第(di)八因子相(xiang)關(guan)抗(kang)原(yuan) 規格(ge): 48T/96T
Resistin 人抵抗素 規格(ge): 48T/96T
HIF-1α 人低氧誘(you)導因(yin)子1α 規格(ge): 48T/96T
LRP-6 人低密度(du)脂蛋(dan)白(bai)受(shou)體(ti)相(xiang)關(guan)蛋(dan)白6 規格(ge): 48T/96T
LDLR 人低密度(du)脂蛋(dan)白(bai)受(shou)體(ti) 規(gui)格(ge): 48T/96T
LDL-IC 人低密度(du)脂蛋(dan)白(bai)免(mian)疫(yi)復(fu)合(he)物(wu) 規格(ge): 48T/96T
LDL 人低密度(du)脂蛋(dan)白(bai) 規(gui)格(ge): 48T/96T
LMP7/PSMB9 人低分(fen)子質量蛋白(bai)7 規格(ge): 48T/96T
LMWH 人低分(fen)子肝素 規格(ge): 48T/96T
NGF 人的(de)神經生(sheng)長(chang)因子 規格(ge): 48T/96T
人的(de)牛血(xue)清(qing)白(bai)蛋白殘(can)留檢(jian)測(ce)ELISA Kit,48T/96T 人的(de)牛血(xue)清(qing)白(bai)蛋白殘(can)留檢(jian)測(ce)ELISA Kit,48T/96T 規格(ge): 48T/96T
ConA 人刀豆(dou)素A 規格(ge): 48T/96T
PLP 人蛋(dan)白(bai)脂(zhi)質蛋白(bai)抗體(ti) 規(gui)格(ge): 48T/96T
PR3-ANCA 人蛋(dan)白(bai)酶(mei)3特異(yi)性(xing)抗(kang)中(zhong)性(xing)粒(li)細(xi)胞(bao)胞(bao)質抗體(ti) 規(gui)格(ge): 48T/96T
PPP1R1A 人蛋(dan)白(bai)磷(lin)酸酶1調(tiao)控(kong)/抑制(zhi)因(yin)子亞(ya)基1A 規(gui)格(ge): 48T/96T
PP 人蛋(dan)白(bai)磷(lin)酸酶 規(gui)格(ge): 48T/96T
PTP/PTPase/CD148 人蛋(dan)白(bai)磷(lin)酸酶 規(gui)格(ge): 48T/96T
PTP/PTPase/CD148 人蛋(dan)白(bai)磷(lin)酸酶 規(gui)格(ge): 48T/96T
PTK/CD115 人蛋(dan)白(bai)激酶 規格(ge): 48T/96T
PTK/CD115 人蛋(dan)白(bai)激酶 規格(ge): 48T/96T
PKC 人蛋(dan)白(bai)激酶C 規格(ge): 48T/96T
PKB 人蛋(dan)白(bai)激酶B 規格(ge): 48T/96T
PKA 人蛋(dan)白(bai)激酶A 規格(ge): 48T/96T
PDI 人蛋(dan)白(bai)二(er)硫(liu)化(hua)物(wu)異(yi)構(gou)酶前體(ti) 規(gui)格(ge): 48T/96T
PDIA3 人蛋(dan)白(bai)二(er)硫(liu)化(hua)物(wu)異(yi)構(gou)酶A3 規(gui)格(ge): 48T/96T
Protein Z 人蛋(dan)白(bai)Z 規(gui)格(ge): 48T/96T
Protein S 人蛋(dan)白(bai)S 規(gui)格(ge): 48T/96T
Y1HGold 感受(shou)態細(xi)胞(bao)100ul*10 Protein C 人蛋白C 規(gui)格(ge): 48T/96T
肽酰(xian)脯(pu)氨(an)酰順(shun)/反(fan)異(yi)構(gou)酶 人(ren)蛋(dan)白(bai) 規格(ge): 48T/96T
Elastase 人彈(dan)性(xing)蛋(dan)白酶 規(gui)格(ge): 48T/96T
Elastin 人彈(dan)性(xing)蛋(dan)白 規格(ge): 48T/96T
Cholic acid 人膽酸(suan) 規(gui)格(ge): 48T/96T
CCK-8 人膽囊(nang)收縮(suo)素/縮(suo)膽囊(nang)素八肽 規格(ge): 48T/96T
CCK 人膽囊(nang)收縮(suo)素/腸促肽 規(gui)格(ge): 48T/96T
CHAc 人乙(yi)酰(xian)化(hua)酶(mei) 規格(ge): 48T/96T
CETP 人酯轉(zhuan)移蛋(dan)白 規(gui)格(ge): 48T/96T
listeriolysin 人單核細(xi)胞(bao)增(zeng)多(duo)性(xing)李(li)斯(si)特菌(jun)素 規格(ge): 48T/96T