酶ELISA試劑(ji)盒(he)，即酶(mei)聯(lian)免疫(yi)吸附(fu)試(shi)驗試(shi)劑(ji)盒(he)，是酶免疫(yi)測(ce)定(ding)技(ji)術(shu)中應(ying)用(yong)廣(guang)的技(ji)術(shu)。其(qi)基(ji)本(ben)原(yuan)理(li)是(shi)酶分子與(yu)抗體或(huo)抗抗體分子共(gong)價結合(he)，這(zhe)種結合(he)既(ji)不(bu)會改變(bian)抗(kang)體的免疫(yi)學(xue)特(te)性，也(ye)不(bu)影(ying)響(xiang)酶的生(sheng)物學活性。酶(mei)標記抗(kang)體可以與(yu)吸附(fu)在(zai)固相(xiang)載(zai)體上的抗(kang)原(yuan)或(huo)抗體發(fa)生特(te)異性結合(he)。在(zai)加入(ru)底物溶(rong)液(ye)後(hou)，底物在酶(mei)的(de)作(zuo)用下會使其(qi)所(suo)含的(de)供氫體由無(wu)色的(de)還原(yuan)型變(bian)成(cheng)有色的(de)氧化(hua)型，從(cong)而出(chu)現顏色(se)反(fan)應(ying)。因此，可以通(tong)過底物的顏色(se)反(fan)應(ying)來(lai)判定(ding)有無(wu)相應(ying)的(de)免疫(yi)反(fan)應(ying)，顏色(se)反(fan)應(ying)的(de)深(shen)淺與標本(ben)中相應(ying)抗(kang)體或(huo)抗原的量呈(cheng)正(zheng)比。
酶(mei)ELISA試劑(ji)盒(he)在使用(yong)前的(de)準備是確(que)保(bao)實(shi)驗準確(que)性和(he)可(ke)重(zhong)復(fu)性的(de)關(guan)鍵步驟(zhou)。以下是系統(tong)化(hua)的(de)準備流程(cheng)及註(zhu)意事(shi)項：
壹(yi)、試劑(ji)與材(cai)料準備
試劑平衡與分裝(zhuang)
溫度平(ping)衡：
未(wei)開封的試劑(ji)盒(he)需提(ti)前從(cong)冰(bing)箱(xiang)（2-8℃）或(huo)冷(leng)凍(dong)（-20℃）中取出(chu)，室(shi)溫（20-25℃）平衡30分鐘，避免(mian)溫差(cha)導(dao)致冷(leng)凝(ning)水稀釋(shi)試劑。
分裝(zhuang)處(chu)理：
若(ruo)試(shi)劑需多(duo)次(ci)使用(yong)，建議分裝(zhuang)成(cheng)單次(ci)用(yong)量（如(ru)標準品、酶(mei)標抗體），避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融導(dao)致失活。
試(shi)劑(ji)檢(jian)查(zha)
外(wai)觀(guan)確(que)認(ren)：檢(jian)查(zha)液(ye)體試劑是(shi)否(fou)渾(hun)濁、沈(chen)澱或(huo)變(bian)色(se)（如TMB底物變(bian)藍可(ke)能(neng)已(yi)氧化(hua)失效）。
有效期(qi)驗證(zheng)：確(que)保(bao)試劑(ji)在(zai)保(bao)質(zhi)期(qi)內，開(kai)封後(hou)未(wei)過期(qi)（如部(bu)分試劑(ji)開封後(hou)穩定(ding)性僅(jin)1個月）。
標準品配(pei)制(zhi)
梯度(du)稀釋(shi)：根據(ju)說(shuo)明(ming)書(shu)用樣本(ben)稀釋(shi)液(ye)（如(ru)PBS或(huo)專(zhuan)用(yong)緩(huan)沖液(ye)）將(jiang)標準品稀釋(shi)成系列濃(nong)度(du)（如(ru)1:2遞(di)進稀釋(shi)），用於制(zhi)作(zuo)標準曲線(xian)。
混勻操作(zuo)：使用(yong)渦(wo)旋儀輕(qing)輕(qing)混勻，避免(mian)產生氣泡(pao)，影(ying)響(xiang)準確(que)性。
二(er)、實(shi)驗器(qi)材(cai)準備
耗材(cai)預(yu)處(chu)理(li)
酶(mei)標板：
檢(jian)查(zha)板(ban)條(tiao)是(shi)否(fou)變(bian)形(xing)或(huo)受(shou)潮，開(kai)封後(hou)未(wei)使用(yong)的(de)板條(tiao)需(xu)密(mi)封並(bing)加(jia)幹(gan)燥劑(ji)保(bao)存(cun)。
如(ru)需自備板(ban)條(tiao)，選(xuan)擇高(gao)結合(he)力(li)ELISA板（如(ru)平(ping)底96孔板），避免(mian)使用(yong)含去(qu)垢(gou)劑(ji)的(de)板(ban)子(zi)。
吸頭與容器：使用(yong)無(wu)酶、無(wu)內毒(du)素的(de)離心管及壹(yi)次(ci)性吸頭，避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。
儀器校(xiao)準
移液(ye)器(qi)校(xiao)準：確(que)保(bao)移液(ye)精(jing)度（如使用(yong)0.1-10μL、20-200μL量程(cheng)），定(ding)期(qi)校(xiao)準。
洗板(ban)機(ji)設置：調(tiao)整洗板(ban)次(ci)數(shu)（通常5次(ci)）、浸(jin)泡(pao)時間(jian)（30秒）及吸液(ye)速(su)度，避免(mian)殘(can)留(liu)或(huo)沖掉(diao)結合(he)抗(kang)體。
三、樣本(ben)處(chu)理(li)
樣本(ben)采(cai)集與(yu)保(bao)存(cun)
血(xue)清/血(xue)漿：收(shou)集後(hou)盡快(kuai)離心（3000 rpm，10分鐘），分裝(zhuang)後(hou)-20℃或(huo)-80℃凍存(cun)，避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融。
細(xi)胞上清：離心去除(chu)雜(za)質(zhi)（如(ru)細(xi)胞碎片(pian)），直接(jie)用於(yu)檢(jian)測(ce)或(huo)暫(zan)存(cun)於(yu)2-8℃（24小時內使用(yong)）。
樣本(ben)稀釋(shi)
用試劑(ji)盒(he)提(ti)供的稀釋(shi)液(ye)（或(huo)PBS）將(jiang)樣本(ben)稀釋(shi)至合(he)適(shi)倍數(shu)，避免(mian)基(ji)質(zhi)效應(ying)幹(gan)擾（如(ru)血(xue)清稀釋(shi)10倍可減(jian)少(shao)非特(te)異性結合(he)）。
