C58C1 感(gan)受態(tai)細胞100ul*10​

C58C1 感(gan)受態(tai)細胞100ul*10​ 操(cao)作(zuo)方法（以下(xia)操(cao)作(zuo)均(jun)按無(wu)菌(jun)條件的(de)標準進(jin)行(xing)）
1 取(qu)感(gan)受(shou)態(tai)細胞置(zhi)於(yu)冰浴(yu)中，如(ru)需(xu)分裝可(ke)將剛(gang)融(rong)化細胞懸(xuan)液(ye)分裝到(dao)無(wu)菌(jun)預(yu)冷(leng)的(de)離心管中(zhong)，置(zhi)於(yu)冰浴(yu)中。
C58C1 感(gan)受態(tai)細胞100ul*10​ ●  壹次轉(zhuan)化感(gan)受(shou)態(tai)細胞的(de)建議用量(liang)為50-100 μl，可(ke)以根(gen)據(ju)實(shi)際(ji)情(qing)況(kuang)分裝使用。應(ying)註意所(suo)用DNA 體(ti)積(ji)不要(yao)超過(guo)感(gan)受(shou)態(tai)細胞懸(xuan)液(ye)體(ti)積(ji)的(de)十(shi)分之壹。
以下(xia)實(shi)驗(yan)以100 μl感(gan)受(shou)態(tai)細胞為(wei)例(li)。
2 向感(gan)受態(tai)細胞懸(xuan)液(ye)中加(jia)入目(mu)的(de)DNA（100 μl 的(de)感受態(tai)細胞能(neng)夠被(bei)1 ng 超螺旋質(zhi)粒(li)DNA 所(suo)飽和(he)），輕輕旋轉(zhuan)離心管以混(hun)勻(yun)內(nei)容(rong)物，在冰浴(yu)中靜置(zhi)30 分鐘。
3 將離心管置(zhi)於(yu)42℃水(shui)浴(yu)中放(fang)置60-90 秒(miao)，然後(hou)快(kuai)速(su)將管轉(zhuan)移到(dao)冰浴(yu)中，使細胞冷(leng)卻(que)2-3 分鐘，該過(guo)程(cheng)不要(yao)搖動(dong)離心管。
4 向每(mei)個離心管中(zhong)加(jia)入900 μl 無(wu)菌(jun)的(de)SOC 或(huo)LB 培養(yang)基（不(bu)含抗生(sheng)素(su)）， 混勻後(hou)置於(yu)37℃搖(yao)床(chuang)振(zhen)蕩(dang)培(pei)養(yang)1 小時(shi)（160-220 轉(zhuan)/分鐘），目(mu)的(de)是使質(zhi)粒(li)上(shang)相(xiang)關(guan)的(de)抗性標記基因(yin)表達(da)，使菌(jun)體(ti)復(fu)蘇(su)。
C58C1 感(gan)受態(tai)細胞100ul*10​ 5 將(jiang)離心管內(nei)容(rong)物混勻(yun)，吸取(qu)100 μl 已(yi)轉(zhuan)化的(de)感受態(tai)細胞加(jia)到含相應(ying)抗(kang)生素的(de)SOB 或(huo)LB 固(gu)體(ti)瓊(qiong)脂培養(yang)基上(shang)，用無(wu)菌(jun)的(de)彎頭玻棒(bang)輕輕的(de)將細胞均(jun)勻塗開。將平板置於(yu)室(shi)溫直(zhi)至液(ye)體(ti)被(bei)吸收，倒置平板，37℃培養(yang)12-16 小時(shi)。
●  塗布(bu)用量(liang)可(ke)根(gen)據(ju)具體(ti)實(shi)驗(yan)來(lai)調(tiao)整。如(ru)轉(zhuan)化的(de)DNA 總(zong)量(liang)較多(duo)，可(ke)取更少(shao)量(liang)轉(zhuan)化產物塗布(bu)平板；反(fan)之(zhi)，如(ru)轉(zhuan)化的(de)DNA 總(zong)量(liang)較少(shao)，可(ke)取200-300 μl 轉(zhuan)化產物塗布(bu)平板。如(ru)果預(yu)計的(de)克隆較(jiao)少(shao)，可(ke)通過(guo)離心（4,000 rpm, 2分鐘）後吸除部分培養(yang)液(ye)，懸浮(fu)菌(jun)體(ti)後(hou)將其(qi)塗布(bu)於(yu)壹個平板中。（塗布(bu)剩余的(de)菌(jun)液(ye)可(ke)置於(yu)4℃保(bao)存，如(ru)果次日的(de)轉(zhuan)化菌(jun)落數(shu)過(guo)少(shao)可(ke)以將(jiang)剩下(xia)的(de)菌(jun)液(ye)再塗布(bu)新(xin)的(de)培養(yang)板）
 註意事項
1. 感受(shou)態(tai)細胞應(ying)保(bao)存在 -70℃，不可(ke)多次凍(dong)融(rong)和(he)放(fang)置(zhi)時(shi)間過(guo)長(chang)，以避(bi)免降低感受(shou)態(tai)細胞的(de)轉(zhuan)化效率(lv)。
2. 進(jin)行(xing)轉(zhuan)化操(cao)作(zuo)時，應根(gen)據(ju)相應溫度及無(wu)菌(jun)條件的(de)要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)。
3 為(wei)防(fang)止轉(zhuan)化實(shi)驗(yan)不成(cheng)功，可(ke)以保(bao)留(liu)部分連接(jie)反(fan)應(ying)液(ye)，以重新轉(zhuan)化，將(jiang)損(sun)失降到低。
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