更新(xin)時間:2025-11-29
C58C1 感受態(tai)細胞(bao)100ul*50 菌(jun)株壹(yi)種(zhong)常(chang)用於(yu)質粒(li)克隆(long)的菌(jun)株。其(qi)φ80lacZΔM15基(ji)因(yin)的產(chan)物可與(yu)pUC載體(ti)編(bian)碼(ma)的b-半乳糖(tang)苷(gan)酶氨(an)基(ji)端(duan)實現a互(hu)補(bu),可用於(yu)藍(lan)白斑(ban)篩(shai)選。recA1和endA1 的突變(bian)有利(li)於(yu)克隆(long)DNA 的穩定(ding)和高純度質(zhi)粒(li)DNA的提取(qu)。
C58C1 感受態(tai)細胞(bao)100ul*50 操作方法(fa)(以下(xia)操作均按無菌(jun)條件的標準(zhun)進(jin)行(xing))
1 取(qu)感受態(tai)細胞(bao)置於(yu)冰(bing)浴(yu)中,如需(xu)分裝(zhuang)可將(jiang)剛(gang)融(rong)化(hua)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)分(fen)裝(zhuang)到無(wu)菌(jun)預冷的離(li)心(xin)管(guan)中,置於(yu)冰(bing)浴(yu)中。
● 壹次(ci)轉(zhuan)化(hua)感(gan)受態(tai)細胞(bao)的建(jian)議(yi)用量(liang)為(wei)50-100 μl,可以根據(ju)實(shi)際(ji)情(qing)況分(fen)裝(zhuang)使(shi)用。應註意(yi)所(suo)用DNA 體(ti)積(ji)不(bu)要超過感受態(tai)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)體(ti)積(ji)的十分(fen)之(zhi)壹。
以下(xia)實驗以100 μl感(gan)受態(tai)細胞(bao)為例。
C58C1 感受態(tai)細胞(bao)100ul*50 2 向感受態(tai)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)中(zhong)加(jia)入目的DNA(100 μl 的感受態(tai)細胞(bao)能夠被(bei)1 ng 超螺旋(xuan)質(zhi)粒(li)DNA 所(suo)飽(bao)和),輕(qing)輕(qing)旋(xuan)轉(zhuan)離(li)心(xin)管(guan)以混(hun)勻內容物(wu),在(zai)冰(bing)浴(yu)中靜置30 分鐘(zhong)。
3 將離(li)心(xin)管(guan)置於(yu)42℃水(shui)浴(yu)中(zhong)放置60-90 秒,然(ran)後快速(su)將管(guan)轉移到冰(bing)浴(yu)中,使(shi)細胞(bao)冷卻(que)2-3 分鐘(zhong),該(gai)過程(cheng)不(bu)要搖(yao)動(dong)離(li)心(xin)管(guan)。
4 向每(mei)個離(li)心(xin)管(guan)中加(jia)入900 μl 無菌(jun)的SOC 或LB 培(pei)養(yang)基(ji)(不(bu)含(han)抗(kang)生(sheng)素), 混(hun)勻後(hou)置於(yu)37℃搖床(chuang)振(zhen)蕩(dang)培養(yang)1 小(xiao)時(160-220 轉/分鐘),目的是使(shi)質(zhi)粒(li)上相(xiang)關(guan)的抗(kang)性(xing)標(biao)記(ji)基(ji)因(yin)表(biao)達(da),使(shi)菌(jun)體(ti)復(fu)蘇(su)。
C58C1 感(gan)受態(tai)細胞(bao)100ul*50 5 將離(li)心(xin)管(guan)內容物(wu)混(hun)勻,吸取(qu)100 μl 已轉(zhuan)化的感受態(tai)細胞(bao)加到含(han)相(xiang)應(ying)抗(kang)生(sheng)素的SOB 或LB 固(gu)體(ti)瓊(qiong)脂培(pei)養基(ji)上,用無菌(jun)的彎頭玻棒(bang)輕(qing)輕(qing)的將細胞(bao)均勻塗(tu)開。將平板置於(yu)室溫直(zhi)至液(ye)體(ti)被(bei)吸收(shou),倒置平板,37℃培(pei)養(yang)12-16 小(xiao)時。
● 塗(tu)布用量(liang)可根據(ju)具(ju)體(ti)實(shi)驗來調整(zheng)。如(ru)轉(zhuan)化(hua)的DNA 總(zong)量(liang)較(jiao)多,可取(qu)更少量(liang)轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗(tu)布平板;反(fan)之(zhi),如(ru)轉化(hua)的DNA 總(zong)量(liang)較(jiao)少(shao),可取(qu)200-300 μl 轉化(hua)產(chan)物塗(tu)布平板。如(ru)果(guo)預計的克隆(long)較(jiao)少,可通(tong)過離(li)心(xin)(4,000 rpm, 2分(fen)鐘(zhong))後吸除(chu)部(bu)分(fen)培養(yang)液(ye),懸(xuan)浮(fu)菌(jun)體(ti)後(hou)將其(qi)塗(tu)布於(yu)壹個(ge)平板中(zhong)。(塗(tu)布剩余的菌(jun)液(ye)可置於(yu)4℃保存(cun),如果(guo)次(ci)日(ri)的轉化(hua)菌(jun)落數(shu)過少可以將(jiang)剩下(xia)的菌(jun)液(ye)再塗(tu)布新(xin)的培養(yang)板(ban))
註意(yi)事項(xiang)
1. 感受態(tai)細胞(bao)應保存(cun)在 -70℃,不(bu)可多次(ci)凍(dong)融(rong)和放置時間過長,以避免(mian)降(jiang)低感(gan)受態(tai)細胞(bao)的轉化(hua)效(xiao)率。
2. 進(jin)行(xing)轉(zhuan)化(hua)操(cao)作時,應根據(ju)相(xiang)應(ying)溫度及(ji)無菌(jun)條件的要求進(jin)行(xing)。
3 為(wei)防(fang)止轉化(hua)實(shi)驗不(bu)成功(gong),可以保(bao)留部(bu)分連(lian)接反(fan)應(ying)液(ye),以重(zhong)新(xin)轉化(hua),將損(sun)失(shi)降(jiang)到(dao)低(di)。
以下(xia)是的相(xiang)關(guan)產(chan)品(pin):
NT-proBNP 人(ren)N端(duan)前腦鈉(na)素(su) 規格: 48T/96T
NT-proBNP 人N端(duan)前腦鈉(na)素(su) 規格: 48T/96T
NLR 人NOD樣(yang)受體(ti) 規(gui)格: 48T/96T
NHE3 人Na+/H+交(jiao)換(huan)體(ti)3 規(gui)格: 48T/96T
PAL 人L苯(ben)解(jie)氨(an)酶 規格: 48T/96T
Jo1/HRS 人Jo1抗(kang)體(ti) 規(gui)格: 48T/96T
IRAP 人ICE蛋(dan)白酶激活因(yin)子(zi) 規(gui)格: 48T/96T
人H-ras ELISA Kit,48T/96T 人(ren)H-ras ELISA Kit,48T/96T 規格: 48T/96T
人H-ras ELISA Kit,48T/96T 人(ren)H-ras ELISA Kit,48T/96T 規格: 48T/96T
GAP 人GTP酶活化(hua)蛋(dan)白 規(gui)格: 48T/96T
Flt-3L 人FMS樣(yang)激酶3配(pei)體(ti) 規(gui)格: 48T/96T
Flt3 人FMS樣(yang)激酶3 規格: 48T/96T
E-Selectin/CD62E 人E選擇(ze)素(su) 規(gui)格: 48T/96T
E-Cad 人E鈣(gai)粘(zhan)著(zhe)蛋(dan)白/上皮(pi)性鈣(gai)黏附蛋(dan)白 規(gui)格: 48T/96T
EJ/GlyRS 人EJ抗(kang)體(ti)/抗(kang)甘氨(an)酰(xian)tRNA合成酶抗(kang)體(ti) 規(gui)格: 48T/96T
D2D 人D二(er)聚體(ti) 規(gui)格: 48T/96T
D2D 人D二(er)聚體(ti) 規(gui)格: 48T/96T
DBP 人DNA結(jie)合蛋(dan)白 規(gui)格: 48T/96T
DKK1 人Dickkopf 1 規(gui)格: 48T/96T
CNP 人C型(xing)鈉尿肽(tai) 規格: 48T/96T
C-Peptide 人C肽(tai) 規格: 48T/96T
CRP 人C反(fan)應蛋(dan)白 規(gui)格: 48T/96T
CP 人C多肽(tai) 規格: 48T/96T
CXCR3 人CXC趨化因(yin)子(zi)受體(ti)3 規(gui)格: 48T/96T
CXCR1 人CXC趨化因(yin)子(zi)受體(ti)1 規(gui)格: 48T/96T
CX3CR1 人CX3C趨化因(yin)子(zi)受體(ti)1 規(gui)格: 48T/96T
人c-sis ELISA Kit,48T/96T 人(ren)c-sis ELISA Kit,48T/96T 規格: 48T/96T
人c-sis ELISA Kit,48T/96T 人(ren)c-sis ELISA Kit,48T/96T 規格: 48T/96T
C58C1 感受態(tai)細胞(bao)100ul*50 c-myc 人c-myc癌基(ji)因(yin)產(chan)物 規(gui)格: 48T/96T
人c-myc ELISA Kit,48T/96T 人(ren)c-myc ELISA Kit,48T/96T 規格: 48T/96T
人c-jun ELISA Kit,48T/96T 人(ren)c-jun ELISA Kit,48T/96T 規格: 48T/96T