更新(xin)時(shi)間(jian):2025-11-29
Ar 1193 感受態細胞(bao)100ul*10菌株(zhu)壹種(zhong)常用於(yu)質粒克(ke)隆的菌株(zhu)。其(qi)φ80lacZΔM15基(ji)因的產(chan)物(wu)可(ke)與(yu)pUC載體(ti)編碼的b-半乳(ru)糖(tang)苷酶氨基(ji)端(duan)實現a互補,可(ke)用於(yu)藍白斑(ban)篩(shai)選。recA1和(he)endA1 的突變(bian)有(you)利(li)於克(ke)隆DNA 的穩定和(he)高純(chun)度質粒DNA的(de)提(ti)取(qu)。
Ar 1193 感受態細胞(bao)100ul*10以下是的(de)訂購信(xin)息(xi)儲存(cun)條件(jian):-70℃凍存(cun)
操作(zuo)方法(fa):
1. 取(qu)-80℃保存(cun)的農桿菌感受態於室(shi)溫(wen)或(huo)手心(xin)片刻待(dai)其(qi)部(bu)分融(rong)化(hua),處於(yu)冰水(shui)混合(he)狀(zhuang)態時(shi)插(cha)入冰(bing)中。
2.每100 μl感受態加入0.01-1 μg質粒DNA(轉化(hua)效率較高,*次(ci)使(shi)用前(qian)做(zuo)預(yu)實驗確定(ding)所(suo)加質粒的(de)量),用手管底混勻,依(yi)次(ci)於(yu)冰(bing)上(shang)靜置(zhi)5分鐘(zhong)、液氮5分鐘(zhong)、37℃水(shui)浴(yu)5分鐘(zhong)、冰(bing)浴(yu)5分鐘(zhong)。
Ar 1193 感受態細胞(bao)100ul*103. 加入700 μl無(wu)抗(kang)生(sheng)素(su)的(de)LB或(huo)YEB液體(ti)培養基(ji),於(yu)28℃振(zhen)蕩(dang)培養2~3小時(shi)。
4. 6000 rpm離心(xin)壹分鐘(zhong)收(shou)菌,留(liu)取(qu)100 μl左右上(shang)清(qing)輕輕吹打重懸菌塊塗布(bu)於(yu)含(han)相應抗(kang)生(sheng)素(su)的(de)LB或(huo)YEB平(ping)板上(shang),倒(dao)置(zhi)放(fang)於28℃培養箱(xiang)培養2-3天
註意事(shi)項(xiang)
1. 加入質粒時(shi)體(ti)積不應(ying)大(da)於(yu)感受態體(ti)積的1/10;質粒不(bu)純或(huo)存(cun)在乙(yi)醇(chun)等(deng)有(you)機(ji)物(wu)汙(wu)染,轉化(hua)效率急劇(ju)下降(jiang);質粒增(zeng)大(da)壹(yi)倍(bei),轉化(hua)效率下降壹(yi)個(ge)數(shu)量級(ji)。
Ar 1193 感受態細胞(bao)100ul*102. 混入(ru)質粒時(shi)應(ying)輕柔(rou)操作(zuo)。轉化(hua)高濃(nong)度的質粒可(ke)相應減少(shao)終用(yong)於(yu)塗板(ban)的(de)菌量。
3. 平(ping)板上(shang)陽(yang)性(xing)克隆密(mi)度過大(da)時(shi),由(you)於營養不足,陽(yang)性(xing)克隆(long)生(sheng)長變慢(man),菌落變小,為(wei)了(le)獲(huo)得(de)大(da)的(de)菌落,應減少(shao)質粒用(yong)量。
4. 濃度不應高於(yu)25 μg/ml,過高的(de)濃(nong)度不利於(yu)農桿菌生(sheng)長,會降(jiang)低(di)其(qi)生(sheng)長速度和(he)轉化(hua)效率。本(ben)公(gong)司感受態計(ji)算轉化(hua)效率時(shi)所(suo)用平(ping)板只(zhi)含(han)有(you)50 μg/ml kan,若(ruo)所(suo)用平(ping)板含(han)有(you)20 μg/ml rif則(ze)轉化(hua)效率降低到(dao)1/2。
5. 培養基(ji)中(zhong)加入的目的(de)是防(fang)止(zhi)雜(za)菌生(sheng)長、篩選(xuan)農桿菌;根(gen)據所(suo)用菌株(zhu)抗(kang)性(xing)加入Ti質粒篩(shai)選抗(kang)生(sheng)素(su)可(ke)防(fang)止(zhi)Ti質粒丟(diu)失,但(dan)Ti質粒篩(shai)選抗(kang)生(sheng)素(su)不(bu)利(li)於(yu)農桿菌的轉基(ji)因操作(zuo),所(suo)以壹(yi)般(ban)培養農桿菌時(shi)不(bu)考(kao)慮(lv)這(zhe)些(xie)抗(kang)生(sheng)素(su),Ti質粒丟(diu)失的概率極低(可(ke)以(yi)忽(hu)略(lve))。
HSP-40 雞(ji)熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)40 規(gui)格: 48T/96T
HSP-20 雞熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)20 規(gui)格: 48T/96T
IgG 雞免疫球(qiu)蛋白(bai)G 規(gui)格: 48T/96T
IgE 雞免疫球(qiu)蛋白(bai)E 規(gui)格: 48T/96T
IgA 雞免疫球(qiu)蛋白(bai)A 規(gui)格: 48T/96T
Irna 雞免疫核糖核酸(suan) 規(gui)格: 48T/96T
IgY 雞卵(luan)黃(huang)免疫球(qiu)蛋白(bai) 規(gui)格: 48T/96T
JE IgG 雞流(liu)行(xing)性乙(yi)型(xing)腦炎抗(kang)體(ti)IgG 規(gui)格: 48T/96T
sEPCR 雞可(ke)溶(rong)性血(xue)管內(nei)皮(pi)細胞(bao)蛋白(bai)C受體(ti) 規(gui)格: 48T/96T
sICAM-1 雞可(ke)溶(rong)性細胞(bao)間粘附(fu)分子(zi)1 規(gui)格: 48T/96T
sE-selectin 雞可(ke)溶(rong)性E選(xuan)擇素(su) 規(gui)格: 48T/96T
AT-Ⅲ 雞抗(kang)Ⅲ抗(kang)體(ti) 規(gui)格: 48T/96T
AmAC-1 雞巨噬細胞(bao)替代激活(huo)相關(guan)化(hua)學因子1 規(gui)格: 48T/96T
bFGF 雞堿(jian)性(xing)成纖維(wei)細胞(bao)生(sheng)長因子 規(gui)格: 48T/96T
MYO/MB 雞肌(ji)紅(hong)蛋白(bai) 規(gui)格: 48T/96T
SIgA 雞分泌型(xing)免疫球(qiu)蛋白(bai)A 規(gui)格: 48T/96T
PPP 雞蛋卵(luan)黃(huang)高磷(lin)蛋白(bai)磷(lin)酸(suan)肽 規(gui)格: 48T/96T
HSVⅡ-Ab 雞單(dan)純皰疹病毒(du)Ⅱ型(xing)抗(kang)體(ti) 規(gui)格: 48T/96T
PRL 雞催(cui)乳(ru)素(su) 規(gui)格: 48T/96T
FSH 雞促(cu)卵泡(pao)素(su) 規(gui)格: 48T/96T
LH 雞促(cu)黃(huang)體(ti)激素(su) 規(gui)格: 48T/96T
IC 雞傳(chuan)染性鼻(bi)炎抗(kang)體(ti) 規(gui)格: 48T/96T
C3SP 雞補體(ti)3裂解(jie)產(chan)物(wu) 規(gui)格: 48T/96T
DEV 雞病毒(du)性(xing)腸炎病毒(du) 規(gui)格: 48T/96T
EGF 雞表(biao)皮(pi)生(sheng)長因子 規(gui)格: 48T/96T
ALV-AG 雞白(bai)血(xue)病病毒(du)抗(kang)原(yuan) 規(gui)格: 48T/96T
PD 雞白(bai)痢(li)抗(kang)體(ti)檢測 規(gui)格: 48T/96T
IL-4 雞白(bai)介(jie)素(su)4 規(gui)格: 48T/96T
IL-3 雞白(bai)介(jie)素(su)3 規(gui)格: 48T/96T
IL-2 雞白(bai)介(jie)素(su)2 規(gui)格: 48T/96T
IL-1β 雞白(bai)介(jie)素(su)1β 規(gui)格: 48T/96T
IL-18 雞白(bai)介(jie)素(su)18 規(gui)格: 48T/96T
IL-17 雞白(bai)介(jie)素(su)17 規(gui)格: 48T/96T
IL-1 雞白(bai)介(jie)素(su)1 規(gui)格: 48T/96T
IFN-γ 雞γ幹擾素(su) 規(gui)格: 48T/96T
β-lactamase 雞β內(nei)酰(xian)胺酶(mei) 規(gui)格: 48T/96T
IFN-β/IFNB 雞β幹擾素(su) 規(gui)格: 48T/96T
α-glucosidase 雞α葡(pu)萄(tao)糖苷酶(mei) 規(gui)格: 48T/96T
IFN-α 雞α幹擾素(su) 規(gui)格: 48T/96T
NAG 雞N-乙(yi)酰(xian)-β-D-氨基(ji)葡(pu)萄(tao)糖苷酶(mei) 規(gui)格: 48T/96T
Ar 1193 感受態細胞(bao)100ul*10 PAL 雞L苯解氨酶(mei) 規(gui)格: 48T/96T
CRP 雞C反(fan)應蛋白(bai) 規(gui)格: 48T/96T
BF 雞B因子 規(gui)格: 48T/96T
5-NT 雞5核苷酸(suan)酶 規(gui)格: 48T/96T
17-KS 雞17-酮(tong)類(lei)固(gu)醇(chun) 規(gui)格: 48T/96T
17-OHCS 雞17羥(qiang)皮(pi)質類(lei)固(gu)醇(chun) 規(gui)格: 48T/96T