遊(you)離脂肪酸(suan)ELISA檢測(ce)試劑(ji)盒樣本(ben)處理及要求(qiu)：

1. 血(xue)清(qing)：室(shi)溫血(xue)液(ye)自然凝(ning)固(gu)10-20 分鐘(zhong)，離心20 分鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000 轉(zhuan)/分）。仔(zai)細收(shou)集(ji)上清(qing)，保(bao)存過程(cheng)中(zhong)如出(chu)現(xian)沈(chen)澱(dian)，應(ying)再次離心。

2. 血(xue)漿(jiang)：選(xuan)擇EDTA 或檸(ning)檬酸(suan)鈉作(zuo)為抗(kang)凝(ning)劑，混(hun)合10-20 分鐘(zhong)後，離心20 分鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000 轉(zhuan)/分）。仔(zai)細收(shou)集(ji)上清(qing)，保(bao)存過程(cheng)中(zhong)如有沈(chen)澱(dian)形成(cheng)，應(ying)該(gai)再次離心。

3. 尿(niao)液(ye)：用無菌(jun)管(guan)收集(ji)，離心20 分鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000 轉(zhuan)/分）。仔(zai)細收(shou)集(ji)上清(qing)，保(bao)存過程(cheng)中(zhong)如有沈(chen)澱(dian)形成(cheng)，應(ying)再次離心。胸(xiong)腹水(shui)、腦(nao)脊液(ye)參照實(shi)行。

4. 細胞(bao)：檢測(ce)分泌(mi)性的成(cheng)份時，用無(wu)菌(jun)管收集(ji)。離心20 分鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000 轉(zhuan)/分）。仔(zai)細收(shou)集(ji)上清(qing)。檢測(ce)細胞(bao)內的成(cheng)份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀(xi)釋(shi)細胞(bao)懸液(ye)，細胞(bao)濃度(du)達(da)到100 萬(wan)/ml 左(zuo)右。通(tong)過反復凍(dong)融(rong)，以使細胞(bao)破壞並放(fang)出(chu)細胞(bao)內成(cheng)份。離心20 分鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000 轉(zhuan)/分）。仔(zai)細收(shou)集(ji)上清(qing)。保(bao)存過程(cheng)中(zhong)如有沈(chen)澱(dian)形成(cheng)，應(ying)再次離心。

5. 組織標本(ben)：切割(ge)標(biao)本(ben)後，稱取重量。加(jia)入(ru)壹(yi)定(ding)量的PBS，PH7.4。用液(ye)氮(dan)迅速(su)冷(leng)凍(dong)保(bao)存備(bei)用(yong)。標本(ben)融(rong)化後仍然保(bao)持2-8℃的溫度(du)。加(jia)入(ru)壹(yi)定(ding)量的PBS（PH7.4），用手工(gong)或(huo)勻(yun)漿(jiang)器(qi)將(jiang)標(biao)本(ben)勻(yun)漿(jiang)充(chong)分。離心20 分鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000 轉(zhuan)/分）。仔(zai)細收(shou)集(ji)上清(qing)。分裝後壹(yi)份待檢測(ce)，其(qi)余(yu)冷(leng)凍(dong)備(bei)用(yong)。

6. 標(biao)本(ben)采(cai)集(ji)後盡(jin)早(zao)進(jin)行提取，提取按(an)相(xiang)關文(wen)獻(xian)進(jin)行，提取後應盡(jin)快(kuai)進(jin)行實(shi)驗。若(ruo)不(bu)能(neng)馬上進(jin)行試驗(yan)，可(ke)將(jiang)標(biao)本(ben)放(fang)於(yu)-20℃保(bao)存，但(dan)應(ying)避免(mian)反復凍(dong)融(rong).

7. 不(bu)能(neng)檢測(ce)含NaN3 的樣品，因NaN3 抑(yi)制辣根(gen)過氧(yang)化(hua)物酶(mei)的（HRP）活性。

遊(you)離脂肪酸(suan)ELISA檢測(ce)試劑(ji)盒操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou):

1.標準(zhun)品的加(jia)樣：設置標(biao)準品孔(kong)和(he)樣本(ben)孔(kong)，標(biao)準(zhun)品孔(kong)各(ge)加(jia)不(bu)同(tong)濃度(du)的標準品50μL

2.加(jia)樣：分別設空(kong)白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對(dui)照孔(kong)不(bu)加(jia)樣品及酶標(biao)試劑(ji)，其(qi)余(yu)各(ge)步(bu)操作(zuo)相同(tong)）、待測樣品孔(kong)。在酶標(biao)包(bao)被板上待測樣品遊離脂肪酸(suan)ELISA檢測(ce)試劑(ji)盒孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣品稀釋(shi)液(ye)40μl，然後再加(jia)待測樣品10μl（樣品終(zhong)稀(xi)釋(shi)度(du)為5倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣品加(jia)於酶(mei)標板孔(kong)底(di)部(bu)，盡(jin)量不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁(bi)，輕輕晃(huang)動混勻(yun)。

3.加(jia)酶：每孔(kong)加(jia)入(ru)酶(mei)標試劑(ji)100μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外。

4.溫育(yu)：用封板膜封板後置37℃溫育(yu)60分鐘(zhong)。

5.配液(ye)：將(jiang)20倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌液(ye)用蒸(zheng)餾(liu)水(shui)20倍(bei)稀(xi)釋(shi)後備用。

6.洗滌：小心(xin)揭(jie)掉封板膜，棄去(qu)液(ye)體(ti)，甩幹(gan)，每孔(kong)加(jia)滿洗滌液(ye)，靜(jing)置30秒(miao)後棄去，如此(ci)重(zhong)復5次，拍幹。

7.顯色：每孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯色劑(ji)A50μl，再加(jia)入(ru)顯色劑(ji)B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃避光(guang)顯色15分鐘(zhong).

8.終(zhong)止(zhi)：每孔(kong)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反應(ying)（此(ci)時藍色立(li)轉黃(huang)色）。

9.測(ce)定：以空(kong)白(bai)孔(kong)調(tiao)零(ling)，450nm波長依(yi)序測量各(ge)孔(kong)的吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)）。 測(ce)定(ding)應(ying)在加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)後15分鐘(zhong)以內(nei)進(jin)行。