更(geng)新(xin)時(shi)間:2025-11-29
Ar 1193 感(gan)受態(tai)細胞(bao)100ul*50是(shi)采(cai)用大腸桿(gan)菌經特殊工(gong)藝(yi)處(chu)理得到(dao)的(de)感受態(tai)細胞(bao),可用於DNA 的(de)化學轉(zhuan)化。使用pUC19 質(zhi)粒檢(jian)測,轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)可達108個轉(zhuan)化子/μg質(zhi)粒DNA,-70℃保(bao)存(cun)3個(ge)月轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)可保(bao)持在90%以上。
Ar 1193 感(gan)受態(tai)細胞(bao)100ul*50以下是(shi)的(de)訂(ding)購(gou)信息儲(chu)存(cun)條(tiao)件:-70℃凍(dong)存(cun)
操(cao)作方(fang)法:
1. 取-80℃保(bao)存(cun)的(de)農桿菌感受態(tai)於室溫(wen)或手(shou)心(xin)片刻(ke)待(dai)其部分融(rong)化,處(chu)於冰水混合(he)狀(zhuang)態(tai)時(shi)插入(ru)冰中(zhong)。
2.每100 μl感受態(tai)加入(ru)0.01-1 μg質粒DNA(轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)較(jiao)高(gao),*次使用前做預(yu)實驗確定所加(jia)質(zhi)粒的(de)量),用手(shou)管底(di)混勻,依次於冰上靜(jing)置(zhi)5分鐘、液(ye)氮5分鐘、37℃水浴5分(fen)鐘、冰浴5分(fen)鐘。
3. 加(jia)入(ru)700 μl無(wu)抗(kang)生素(su)的LB或YEB液體培(pei)養基(ji),於28℃振(zhen)蕩培養2~3小時(shi)。
Ar 1193 感受態(tai)細胞(bao)100ul*504. 6000 rpm離心(xin)壹分(fen)鐘收(shou)菌,留取100 μl左(zuo)右上清(qing)輕輕吹(chui)打(da)重(zhong)懸菌塊塗布(bu)於含(han)相(xiang)應(ying)抗(kang)生素(su)的LB或YEB平(ping)板上,倒(dao)置(zhi)放於28℃培(pei)養箱(xiang)培(pei)養2-3天
註意(yi)事(shi)項
1. 加入(ru)質粒時(shi)體積(ji)不應(ying)大於感(gan)受態(tai)體積(ji)的(de)1/10;質粒不純或存(cun)在乙醇等(deng)有(you)機(ji)物(wu)汙染(ran),轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)急(ji)劇(ju)下降(jiang);質(zhi)粒增(zeng)大壹倍(bei),轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)下降(jiang)壹(yi)個(ge)數(shu)量級(ji)。
2. 混入(ru)質粒時(shi)應(ying)輕柔(rou)操(cao)作。轉(zhuan)化高(gao)濃(nong)度的質粒可相(xiang)應(ying)減少(shao)終(zhong)用於塗板的(de)菌量。
Ar 1193 感受態(tai)細胞(bao)100ul*503. 平(ping)板上陽性克(ke)隆密(mi)度過大時(shi),由(you)於營(ying)養不足(zu),陽性克(ke)隆生長變(bian)慢(man),菌落變(bian)小,為(wei)了(le)獲得(de)大的菌落,應(ying)減少(shao)質(zhi)粒用量。
4. 濃(nong)度不應(ying)高(gao)於25 μg/ml,過(guo)高(gao)的濃(nong)度不利(li)於農桿菌生長,會(hui)降(jiang)低其生長速度和轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)。本(ben)公司感(gan)受態(tai)計算轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)時(shi)所用平(ping)板只含(han)有50 μg/ml kan,若(ruo)所用平(ping)板含(han)有20 μg/ml rif則(ze)轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)降(jiang)低到1/2。
5. 培養基(ji)中(zhong)加入(ru)的目(mu)的(de)是(shi)防(fang)止雜菌生長、篩選農桿菌;根據所用菌株(zhu)抗(kang)性加(jia)入(ru)Ti質粒篩選抗(kang)生素(su)可防(fang)止Ti質粒丟(diu)失(shi),但(dan)Ti質(zhi)粒篩選抗(kang)生素(su)不利(li)於農桿菌的轉(zhuan)基(ji)因(yin)操(cao)作,所以壹(yi)般(ban)培(pei)養農桿菌時(shi)不考慮這(zhe)些抗(kang)生素(su),Ti質粒丟(diu)失(shi)的(de)概(gai)率(lv)極低(可以忽(hu)略)。
IgE 馬免疫球蛋(dan)白(bai)E 規(gui)格: 48T/96T
β-EP 馬(ma)β內啡(fei)肽(tai) 規(gui)格: 48T/96T
Aβ1-40 馬(ma)β澱(dian)粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)1-40 規(gui)格: 48T/96T
TGFβ2 駱(luo)駝轉(zhuan)化生長因(yin)子β2 規(gui)格: 48T/96T
Lp-PL-A2 駱(luo)駝脂蛋(dan)白(bai)磷(lin)脂酶A2 規(gui)格: 48T/96T
ET-1 駱(luo)駝內皮(pi)素1 規(gui)格: 48T/96T
β-EP 駱(luo)駝β內啡(fei)肽(tai) 規(gui)格: 48T/96T
CC16 裸(luo)鼠克(ke)拉(la)拉(la)細胞(bao)蛋(dan)白(bai) 規(gui)格: 48T/96T
AFP 裸(luo)鼠甲(jia)種胎兒球蛋(dan)白(bai)/甲(jia)胎蛋(dan)白(bai) 規(gui)格: 48T/96T
COX-2 裸(luo)鼠環加(jia)氧(yang)酶2 規(gui)格: 48T/96T
PP 裸(luo)鼠蛋(dan)白(bai)磷(lin)酸酶 規(gui)格: 48T/96T
MrNV 羅氏沼(zhao)蝦(xia)諾(nuo)達病毒 規(gui)格: 48T/96T
MHC 鹿(lu)主(zhu)要(yao)組(zu)織(zhi)相(xiang)容性復(fu)合(he)體 規(gui)格: 48T/96T
IGFBP-3 鹿(lu)胰(yi)島素(su)樣(yang)生長因(yin)子結(jie)合(he)蛋(dan)白(bai)3 規(gui)格: 48T/96T
SAA 鹿(lu)血(xue)清澱(dian)粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)A 規(gui)格: 48T/96T
eNOS 鹿(lu)內皮(pi)型壹氧(yang)化氮(dan)合(he)成(cheng)酶 規(gui)格: 48T/96T
EMP 鹿(lu)紅(hong)細胞(bao)膜蛋(dan)白(bai) 規(gui)格: 48T/96T
VTG 鯉(li)魚卵黃蛋(dan)白(bai)原(yuan) 規(gui)格: 48T/96T
VTG 鯉(li)魚卵黃蛋(dan)白(bai)原(yuan) 規(gui)格: 48T/96T
UEA 荊(jing)豆(dou)凝集(ji)素(su) 規(gui)格: 48T/96T
LT 家蠶(can)卵黃(huang)蛋(dan)白(bai) 規(gui)格: 48T/96T
TGF-β1 雞(ji)轉(zhuan)化生長因(yin)子β1 規(gui)格: 48T/96T
MHC/B 雞(ji)主(zhu)要(yao)組(zu)織(zhi)相(xiang)容性復(fu)合(he)體 規(gui)格: 48T/96T
TRAIL-R3 雞(ji)腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因(yin)子相(xiang)關(guan)雕(diao)亡(wang)誘(you)導配(pei)體3 規(gui)格: 48T/96T
TNF-α 雞(ji)腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因(yin)子α 規(gui)格: 48T/96T
LPS 雞(ji)脂多(duo)糖/內毒素(su) 規(gui)格: 48T/96T
ACAC 雞(ji)乙(yi)酰乙(yi)酸檢(jian)測 規(gui)格: 48T/96T
IGF-1 雞(ji)胰(yi)島素(su)樣(yang)生長因(yin)子1 規(gui)格: 48T/96T
NADPH 雞(ji)腺(xian)嘌(piao)呤二核(he)苷酸磷(lin)酸 規(gui)格: 48T/96T
PF-4/CXCL4 雞(ji)血(xue)小板因(yin)子4 規(gui)格: 48T/96T
NO 雞(ji)血(xue)清壹(yi)氧化氮(dan) 規(gui)格: 48T/96T
VEGF 雞(ji)血(xue)管內皮(pi)細胞(bao)生長因(yin)子 規(gui)格: 48T/96T
HA 雞(ji)透明質酸 規(gui)格: 48T/96T
CA 雞(ji)碳(tan)酸(suan)酐(gan)酶 規(gui)格: 48T/96T
GH 雞(ji)生長因(yin)子 規(gui)格: 48T/96T
ADM 雞(ji)腎(shen)上腺(xian)髓(sui)質素(su) 規(gui)格: 48T/96T
Ar 1193 感(gan)受態(tai)細胞(bao)100ul*50 GFAP 雞(ji)神(shen)經膠質(zhi)纖(xian)維(wei)酸(suan)性蛋(dan)白(bai) 規(gui)格: 48T/96T
HSP-70 雞(ji)熱(re)休(xiu)克(ke)蛋(dan)白(bai)70 規(gui)格: 48T/96T
HSP-70 雞(ji)熱(re)休(xiu)克(ke)蛋(dan)白(bai)70 規(gui)格: 48T/96T
Hsp-60 雞(ji)熱(re)休(xiu)克(ke)蛋(dan)白(bai)60 規(gui)格: 48T/96T