JM110 感受態細胞(bao)100ul*50

JM110 感受態細胞(bao)100ul*50操作(zuo)方法（以下(xia)操作(zuo)均按無(wu)菌(jun)條件的標準(zhun)進行(xing)）
1 取(qu)感受態細胞(bao)置(zhi)於(yu)冰(bing)浴(yu)中(zhong)，如(ru)需(xu)分裝(zhuang)可將剛融(rong)化細胞懸液分裝(zhuang)到(dao)無菌預冷的離心管中(zhong)，置(zhi)於(yu)冰(bing)浴(yu)中(zhong)。
●  壹(yi)次(ci)轉(zhuan)化感受態細胞(bao)的建議用(yong)量為50-100 μl，可以根據實際情(qing)況(kuang)分裝(zhuang)使(shi)用(yong)。應註(zhu)意(yi)所(suo)用(yong)DNA 體積不要超(chao)過(guo)感受態細胞(bao)懸液體積的十分之壹(yi)。
以下(xia)實驗(yan)以100 μl感受態細胞(bao)為(wei)例(li)。
JM110 感受態細胞(bao)100ul*502 向感受態細胞(bao)懸液中(zhong)加(jia)入(ru)目(mu)的DNA（100 μl 的感受態細胞(bao)能(neng)夠(gou)被1 ng 超(chao)螺(luo)旋質(zhi)粒(li)DNA 所(suo)飽(bao)和(he)），輕(qing)輕(qing)旋(xuan)轉(zhuan)離(li)心管以混勻內(nei)容(rong)物(wu)，在(zai)冰浴(yu)中(zhong)靜置(zhi)30 分(fen)鐘(zhong)。
3 將離心(xin)管置(zhi)於(yu)42℃水(shui)浴(yu)中(zhong)放(fang)置(zhi)60-90 秒(miao)，然後(hou)快速將管轉(zhuan)移(yi)到(dao)冰浴(yu)中(zhong)，使(shi)細胞冷卻2-3 分(fen)鐘，該過(guo)程(cheng)不要搖(yao)動(dong)離心(xin)管。
4 向每(mei)個離心(xin)管中(zhong)加(jia)入(ru)900 μl 無(wu)菌(jun)的SOC 或LB 培養基（不含抗生(sheng)素(su)）， 混勻後(hou)置(zhi)於(yu)37℃搖(yao)床(chuang)振蕩(dang)培養1 小時(shi)（160-220 轉(zhuan)/分(fen)鐘），目的是使質(zhi)粒(li)上相(xiang)關(guan)的抗性(xing)標記(ji)基因表(biao)達(da)，使菌(jun)體復蘇(su)。
5 將離(li)心(xin)管內(nei)容物(wu)混勻，吸(xi)取(qu)100 μl 已轉化的感受態細胞(bao)加(jia)到(dao)含相應抗(kang)生(sheng)素(su)的SOB 或LB 固(gu)體瓊脂(zhi)培養基上，用(yong)無菌(jun)的彎頭玻棒(bang)輕(qing)輕(qing)的將細胞均勻塗(tu)開(kai)。將平(ping)板置(zhi)於(yu)室(shi)溫直(zhi)至液體被吸(xi)收，倒置(zhi)平(ping)板(ban)，37℃培養12-16 小時(shi)。
●  塗(tu)布(bu)用(yong)量可根據具(ju)體實驗(yan)來(lai)調整。如(ru)轉(zhuan)化的DNA 總(zong)量較(jiao)多(duo)，可取更(geng)少量轉化產物(wu)塗(tu)布(bu)平板(ban)；反之，如(ru)轉(zhuan)化的DNA 總(zong)量較(jiao)少，可取200-300 μl 轉(zhuan)化產物(wu)塗(tu)布(bu)平板(ban)。如(ru)果(guo)預計的克(ke)隆(long)較(jiao)少，可通過(guo)離(li)心（4,000 rpm, 2分鐘）後(hou)吸(xi)除(chu)部分培養液，懸浮菌體後將(jiang)其塗(tu)布(bu)於(yu)壹(yi)個平板(ban)中(zhong)。（塗(tu)布(bu)剩(sheng)余(yu)的菌液可置(zhi)於(yu)4℃保存(cun)，如(ru)果(guo)次(ci)日(ri)的轉化菌落數過(guo)少可以將剩(sheng)下(xia)的菌液再(zai)塗(tu)布(bu)新(xin)的培養板）
JM110 感受態細胞(bao)100ul*50註(zhu)意(yi)事項(xiang)
1. 感受態細胞(bao)應保存(cun)在(zai) -70℃，不可多次(ci)凍(dong)融(rong)和放(fang)置(zhi)時(shi)間(jian)過(guo)長，以避免(mian)降(jiang)低(di)感受態細胞(bao)的轉化效(xiao)率(lv)。
2. 進行(xing)轉(zhuan)化操作(zuo)時(shi)，應根(gen)據相(xiang)應溫度(du)及(ji)無(wu)菌條件的要求進行。
3 為防止(zhi)轉化實驗(yan)不成功(gong)，可以保留(liu)部分連接(jie)反(fan)應液，以重(zhong)新(xin)轉(zhuan)化，將損失降(jiang)到(dao)低(di)。
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